认知侵袭性真菌感染的试验室诊断课件.ppt

1、认知侵袭性真菌感染的认知侵袭性真菌感染的实验室诊断实验室诊断汇报人汇报人 杨烨建杨烨建何为侵袭性真菌感染何为侵袭性真菌感染?DFI（deep fungal infection）真菌侵犯毛发、表皮、甲床以外的真菌侵犯毛发、表皮、甲床以外的组织（皮下组织、黏膜、肌肉、内组织（皮下组织、黏膜、肌肉、内脏器官、中枢神经系统等）引起的脏器官、中枢神经系统等）引起的感染。感染。DFI中急、危、重者。真菌在组织器中急、危、重者。真菌在组织器官或血液中生长繁殖，导致炎症反官或血液中生长繁殖，导致炎症反应和组织器官损伤，常伴多器官功应和组织器官损伤，常伴多器官功能障碍。能障碍。IFI（invasive fung

2、al infection）2007年欧洲癌症治疗研究组织年欧洲癌症治疗研究组织(EORTC)侵袭侵袭性真菌感染协作组性真菌感染协作组(IFICG)和美国国立变态和美国国立变态反应与传染病研究所霉菌病研究组反应与传染病研究所霉菌病研究组(NIAID-MSG)将将IFI改称改称IFD。国内未获响应，现仅用。国内未获响应，现仅用于侵袭性念珠菌病于侵袭性念珠菌病(invasive candidosis,IC)和和曲霉病曲霉病(invasive aspergillosis,IA)。IFD（invasive fungal disease）IFI诊断依据诊断依据EORTC和和NIAID/MSG 2007年修

3、订标准年修订标准,国内各学会诊治指南。国内各学会诊治指南。IFI诊断分级：诊断分级：拟诊（拟诊（possible）临床诊断（临床诊断（probable）确诊（确诊（proven）IFI诊断依据诊断依据 IFI分级诊断标准分级诊断标准诊诊 断断级级 别别高高 危危因因 素素临临 床床特特 征征微生物学微生物学检检 查查组织病理组织病理学学 证证 据据拟拟 诊诊+-临临 床床诊诊 断断+-确确 诊诊+（1）血液真菌）血液真菌培养培养阳性，但曲霉、青霉（马尔尼菲青霉阳性，但曲霉、青霉（马尔尼菲青霉除外）需排除污染。除外）需排除污染。（2）导管相关性真菌血症，导管培养与血）导管相关性真菌血症，导管培养

4、与血培养培养均阳性，均阳性，且为同一真菌。且为同一真菌。（3）胸水真菌）胸水真菌培养培养阳性。阳性。（4）肺组织真菌）肺组织真菌培养培养阳性。阳性。（5）合格痰标本或）合格痰标本或BALF镜检镜检发现肺孢子菌包囊、滋养发现肺孢子菌包囊、滋养体或囊内小体。体或囊内小体。（6）胸水、）胸水、CSF、血液直、血液直接镜接镜检发现新生隐球菌。检发现新生隐球菌。（7）直接导尿）直接导尿培养培养念珠菌念珠菌105CFU/ml。有确诊价值的微生物学检查有确诊价值的微生物学检查常见常见IFIIFI病原的诊断病原的诊断 以下列念珠菌属最常见以下列念珠菌属最常见:白色白色（C.albicans）、光滑）、光滑（C

5、.glabrata）、）、热带热带（C.tropicalis）、）、近平滑近平滑（C.parapsilosis）、克柔）、克柔（C.krusei）、都柏林）、都柏林（C.dubliniensis）、季也蒙）、季也蒙（C.guilliermondii）。）。北京大学人民医院血液科北京大学人民医院血液科(2004.42005.2间间)165株念珠菌，株念珠菌，其中：其中：白念白念78.8%，其他念珠菌，其他念珠菌21.2%；张红金等张红金等2006.16月月ICU患者并发患者并发IFI 137例，其中：例，其中：白念白念65株（株（47.4%）、光滑）、光滑36株（株（26.3%）、热带）、热带2

6、8株（株（20.4%）、平滑）、平滑5株（株（3.6%）、克柔）、克柔2株（株（1.5%）、青霉）、青霉1株（株（0.7%）。）。常见常见IFI病原（病原（1）念珠菌属（）念珠菌属（Candida）单因素分析单因素分析:念珠菌定植、念珠菌定植、WBC0.5109/L持续持续10d、使用、使用碳青霉烯类抗生素是恶性血液病患者发生碳青霉烯类抗生素是恶性血液病患者发生IC的危的危险因素；险因素；多因素分析多因素分析:WBC0.5109/L持续持续10d是是IC唯一危险因素。唯一危险因素。IC发病的重要前提是念珠菌定植发病的重要前提是念珠菌定植（1）革兰染色、乳酸酚棉蓝染色，镜检）革兰染色、乳酸酚棉蓝

7、染色，镜检46m圆或卵圆芽圆或卵圆芽胞，可见出芽，假菌丝。胞，可见出芽，假菌丝。用含荧光增白剂（用含荧光增白剂（Calcofluor White，CFW）的）的10%20%KOH涂片，紫外线激发呈蓝白或绿色荧光。涂片，紫外线激发呈蓝白或绿色荧光。（2）培养于沙氏培养基生长乳白色酵母样菌落；培养于沙氏培养基生长乳白色酵母样菌落；玉米粉玉米粉-Tween80琼脂生长假菌丝、厚壁孢子；琼脂生长假菌丝、厚壁孢子；CHROMagar培基上（培基上（35）菌落呈色：白念）菌落呈色：白念-绿色，热绿色，热带带-蓝灰，粉红、边缘模糊蓝灰，粉红、边缘模糊-克柔。克柔。其他种为白色至粉红色。血清（鸡蛋清）中其他种

8、为白色至粉红色。血清（鸡蛋清）中37 23h白念产生芽管。白念产生芽管。种间鉴别用糖发酵和糖同化试验。种间鉴别用糖发酵和糖同化试验。常规检查常规检查（1）测抗原）测抗原 胞壁胞壁1,3-D-葡聚糖（葡聚糖（G试验），表面抗原甘试验），表面抗原甘露聚糖（露聚糖（LA试验），热不稳定蛋白（试验），热不稳定蛋白（LA试验），胞浆蛋试验），胞浆蛋白烯醇化酶（白烯醇化酶（ELISA和和WB），），Mr 65000蛋白（抑制蛋白（抑制ELISA）等。等。（2）测抗体）测抗体 烯醇化酶（烯醇化酶（P47）抗体（）抗体（ELISA），白念珠菌），白念珠菌芽管抗体（芽管抗体（CAGTA）间接免疫荧光法。）间接免

9、疫荧光法。血清学试验血清学试验（1）以）以ITSI（internal transcribed spacer 1，内部可转录间隔区，内部可转录间隔区1）为靶基因的泛真菌为靶基因的泛真菌PCR加加DNA测序法（可测念珠菌、隐球菌、曲测序法（可测念珠菌、隐球菌、曲霉、镰刀菌等多种真菌）。霉、镰刀菌等多种真菌）。（2）泛曲霉念珠菌检测法（）泛曲霉念珠菌检测法（pan-AC assay）用种特异探计）用种特异探计real-timePCR（常见的（常见的6种念珠菌、种念珠菌、9种曲霉）。种曲霉）。（3）以）以28SrDNA为靶基因的为靶基因的real-timePCR。可测念珠菌、曲霉、。可测念珠菌、曲霉、

10、隐球菌、毛霉、青霉等。隐球菌、毛霉、青霉等。（4）多串连）多串连PCR（multiplex tandem PCR，MT-PCR）以）以ITS1、ITS2、EF1-、微管蛋白（微管蛋白（-tubulin）为靶基因，可测常见念珠菌、隐）为靶基因，可测常见念珠菌、隐球菌、曲霉、镰刀菌、接合菌等。球菌、曲霉、镰刀菌、接合菌等。（5）反向线点杂交（）反向线点杂交（reverse line blot hybridization，RLB）和基因）和基因芯片（芯片（oligonucleotide microarray）技术。尚未获批准。）技术。尚未获批准。分子生物学诊断分子生物学诊断185个种中有个种中有20

11、多个可致机会性感染多个可致机会性感染 常见为常见为:烟曲霉（烟曲霉（A.fumigatus）、黄曲霉（）、黄曲霉（A.flavus）、）、黑曲霉（黑曲霉（A.niger）。）。棒曲霉（棒曲霉（A.clavatus）、灰绿曲霉（）、灰绿曲霉（A.glaucus）、构巢）、构巢曲霉（曲霉（A.nidulans）、米曲霉（）、米曲霉（A.oryzae）、土曲霉）、土曲霉（A.terreus）、焦曲霉（）、焦曲霉（A.ustus）、杂色曲霉）、杂色曲霉（A.versicolor）也有报告。）也有报告。常见常见IFI病原（病原（2）曲霉菌属（）曲霉菌属（Aspergillus）曲霉菌孢子是链状的，成熟后

12、脱落，曲霉菌孢子是链状的，成熟后脱落，25m，易在空气中悬浮。，易在空气中悬浮。经空气吸入孢子致病，与定植无关。经空气吸入孢子致病，与定植无关。曲霉鉴定主要依靠形态学特征曲霉鉴定主要依靠形态学特征 血清学试验：血清学试验：G试验，试验，GM试验。试验。分子生物学诊断：同念珠菌属。分子生物学诊断：同念珠菌属。包括包括:菌落颜色，分生孢子梗形态、颜色，产孢结构菌落颜色，分生孢子梗形态、颜色，产孢结构数目，顶囊形态等。数目，顶囊形态等。烟曲霉耐高温，烟曲霉耐高温，40（38.550）生长良好。）生长良好。约约78个种，致病的约个种，致病的约17个种和个种和8个变种，引起个变种，引起IFI的主的主要为

13、要为:-新生隐球菌（新生隐球菌（C.neoformans），），-有新生变种（有新生变种（var.neoformans）（血清型）（血清型D型），型），-格特变种（格特变种（var.gatii）（）（B、C型），型），-grubii变种（变种（var.grubii）（）（A型）。型）。在在A、B、C、D、AD血清型中，我国已见血清型中，我国已见A、D及及AD型，型，A型最多。型最多。常见常见IFI病原（病原（3）隐球菌属（）隐球菌属（Cryptococcus）感染途径：感染途径：经呼吸道吸入孢子（可从鸽粪、按树分离），侵犯肺与经呼吸道吸入孢子（可从鸽粪、按树分离），侵犯肺与神经系统。神经系统。

14、鉴定要点：鉴定要点：沙氏培养基沙氏培养基2537均生长。均生长。CSF直接或离心沉淀物涂直接或离心沉淀物涂片墨汁染色发现圆或椭圆双层厚壁孢子，外有宽荚膜。片墨汁染色发现圆或椭圆双层厚壁孢子，外有宽荚膜。菌体可见单个出芽。菌体可见单个出芽。血清学试验：血清学试验：隐球菌荚菌多糖抗原胶乳凝集试验隐球菌荚菌多糖抗原胶乳凝集试验(LA),试剂盒法国试剂盒法国PaxtorexTM Crypto Plus,红色胶乳颗粒包被抗糖醛酸木糖甘露聚糖红色胶乳颗粒包被抗糖醛酸木糖甘露聚糖(GXM)单抗。单抗。标本：血清、标本：血清、CSF、BALF、尿，血清和、尿，血清和CSF用链霉蛋白酶用链霉蛋白酶56、30mi

15、n预处理。预处理。假阳性：假阳性：RF500IU/ml时时(9/26)；TB患者血清患者血清(2/26)。1:4稀释转阴。稀释转阴。ELISA法：法：多抗包被，酶标记单抗检测。不受多抗包被，酶标记单抗检测。不受RF干扰。干扰。分子生物学诊断：分子生物学诊断：同念珠菌属。同念珠菌属。组织病理中的隐球菌（组织病理中的隐球菌（PAS）墨汁染色中的隐球菌隐球菌性脑膜炎诊断隐球菌性脑膜炎诊断 脑脊液检查脑脊液检查墨汁涂片墨汁涂片培养培养动物接种动物接种电镜观察电镜观察荚膜抗原乳胶凝集试验（荚膜抗原乳胶凝集试验（LATLAT）分子生物学的方法分子生物学的方法涂片和培养对于诊断具有决定意义涂片和培养对于诊断

16、具有决定意义直接墨汁涂片直接墨汁涂片 阳性率大约为阳性率大约为60%优点：快速简便、可做菌体计数优点：快速简便、可做菌体计数 当脑脊液中的菌体数较少当脑脊液中的菌体数较少 （低于（低于103/mm3 ）常）常常会有常会有假阴性假阴性结果，需要做进一步的检查结果，需要做进一步的检查真菌培养真菌培养对本病的诊断有决定意义，是确诊的对本病的诊断有决定意义，是确诊的金标准金标准诊断的敏感性高于直接真菌涂片诊断的敏感性高于直接真菌涂片脑脊液真菌培养的方法，对于培养的结果具有重脑脊液真菌培养的方法，对于培养的结果具有重要的影响要的影响荚膜抗原乳胶凝集实验（荚膜抗原乳胶凝集实验（LAT）LAT是以高效价的抗

17、隐球菌荚膜多糖抗体吸附于标准大小的乳胶上，检测血清或CSF标本中的隐球菌荚膜抗原。特异性接近100%，敏感性约为95%与菌体计数具有平行性，对于预后判断有帮助属真菌界，子囊菌门，古子囊菌纲，肺孢子菌目，肺孢属真菌界，子囊菌门，古子囊菌纲，肺孢子菌目，肺孢子菌科，肺孢子菌属。子菌科，肺孢子菌属。1909年年Chagas首先发现（克氏锥虫），至上世纪首先发现（克氏锥虫），至上世纪80年代年代一直归为原虫（真菌培养基不生长；细胞膜无麦角固醇，一直归为原虫（真菌培养基不生长；细胞膜无麦角固醇，对麦角醇合成抑制剂类抗真菌药耐药，但对抗原虫药敏对麦角醇合成抑制剂类抗真菌药耐药，但对抗原虫药敏感）。感）。常

18、见常见IFI病原（病原（4）卡氏肺孢子菌（）卡氏肺孢子菌（Pneumocystis carinii）直接镜检：直接镜检：痰（痰（30%）、）、BALF（75%）、经皮穿刺肺活检）、经皮穿刺肺活检（60%）、开胸肺活检（）、开胸肺活检（95%）查找包囊等。染色法：）查找包囊等。染色法：Gomoris环六亚甲基四胺银（环六亚甲基四胺银（GMS），亚甲胺蓝、荧），亚甲胺蓝、荧光素染色（染包囊壁和囊壁括弧样结构）。光素染色（染包囊壁和囊壁括弧样结构）。培养：培养：Uero、CEI、WI-38、MRC-5和和Chang肝细胞等。肝细胞等。血清学试验：血清学试验：查抗原：荧光素标记单抗测标本中包囊、滋养查

19、抗原：荧光素标记单抗测标本中包囊、滋养体，阳性率体，阳性率97%99%。查抗体：查抗体：ELISA、IIF、WB查抗体，阳性率查抗体，阳性率50%90%，假阳性率高。，假阳性率高。WB法测抗法测抗Mr 3500045000抗体，抗体，提示活动感染。提示活动感染。分子生物学诊断：分子生物学诊断：同念珠菌属。同念珠菌属。无性型在孢子囊内形成不能游动的静孢子，有性无性型在孢子囊内形成不能游动的静孢子，有性型形成接合孢子。型形成接合孢子。毛霉目（毛霉目（Mucorales）、虫霉目（）、虫霉目（Entomophthorales）中部分种可致毛霉病（中部分种可致毛霉病（mucormycosis）或接合菌

20、病）或接合菌病（zygomycosis）。）。常见常见IFI病原（病原（5）接合菌（）接合菌（Zygomycetes）毛霉属（毛霉属（Mucor）、根霉属（）、根霉属（Rhizopus）、犁头霉属）、犁头霉属（Absidia）、根毛霉属（）、根毛霉属（Mucor Rhizomucor）、被孢霉属）、被孢霉属（Mortierella）、共头霉属（）、共头霉属（Sycephalastrum）、小克银汉霉）、小克银汉霉属（属（Cunninghamella）、瓶霉属（）、瓶霉属（Saksenaea）等致病的种多。）等致病的种多。吸入孢子、创伤感染、食入污染食物致病。特点是菌丝侵吸入孢子、创伤感染、食入

21、污染食物致病。特点是菌丝侵犯血管，引起栓塞、组织坏死、化脓性反应和肉芽肿。犯血管，引起栓塞、组织坏死、化脓性反应和肉芽肿。最常播散至脑，鼻窦炎、眶窝织炎、肺炎。最常播散至脑，鼻窦炎、眶窝织炎、肺炎。鼻脑毛霉病占鼻脑毛霉病占30%50%，病死率，病死率80%90%，次为肺、胃、，次为肺、胃、肠毛霉病。肠毛霉病。毛霉毛霉目中有目中有7个科、个科、12属、属、24种致病种致病直接镜检标本中见直接镜检标本中见90角分支的宽大、透明、无角分支的宽大、透明、无分隔或极少分隔菌丝可诊断。确诊须从组织切片中分隔或极少分隔菌丝可诊断。确诊须从组织切片中找到菌丝。找到菌丝。虫霉虫霉目中目中1科、科、2属、属、3种

22、致病：种致病：蛙粪霉属蛙粪霉属(Basidiobolus)中的固孢蛙粪霉中的固孢蛙粪霉(B.haptasporus)，耳霉属，耳霉属(Conidiobolus)中的冠状耳霉中的冠状耳霉(C.coronatus)和异孢耳霉和异孢耳霉(C.incongruus)。传入途径传入途径:微小外伤，昆虫叮咬。微小外伤，昆虫叮咬。直接镜检标本中宽大、不规则，无分隔的直接镜检标本中宽大、不规则，无分隔的薄壁真菌菌丝及其片段。薄壁真菌菌丝及其片段。分子生物学诊断：同念珠菌属。分子生物学诊断：同念珠菌属。25菌丝相、菌丝相、37酵母相的致病真菌包括酵母相的致病真菌包括申克孢申克孢子丝菌，马尔尼菲青霉子丝菌，马尔尼

23、菲青霉、荚膜组织胞浆菌、粗球孢、荚膜组织胞浆菌、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌、皮炎芽生菌等。子菌、巴西副球孢子菌、皮炎芽生菌等。有的有地域分布特点；有的有地域分布特点；对人致病力强，感染无须免疫受损。对人致病力强，感染无须免疫受损。常见常见IFI病原（病原（6）双相型真菌）双相型真菌申克氏孢子丝菌申克氏孢子丝菌镜下镜下特征特征 纤细分支分隔菌丝 直角分枝的分生孢子梗，顶端梨形或圆形小分生孢子，呈“梅花瓣样”结构 有的小分生孢子沿菌丝两侧排列，呈“袖套状”酵母相镜下可见革兰阳性卵圆形或梭形孢子自然界土壤、竹笋、甘蔗中（自然界土壤、竹笋、甘蔗中（25）多以菌丝形）多以菌丝形式存在，组织中形成酵母样细

24、胞，两端钝圆，有横式存在，组织中形成酵母样细胞，两端钝圆，有横隔。竹鼠为带菌动物。隔。竹鼠为带菌动物。吸入本菌孢子或食入霉变甘蔗发病。侵犯单核吞吸入本菌孢子或食入霉变甘蔗发病。侵犯单核吞噬细胞系统，全身重要脏器均可受累。所致噬细胞系统，全身重要脏器均可受累。所致IFI 70%见于见于AIDS患者。患者。马尔尼菲青霉（马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei）骨髓、外周血涂片，皮肤、淋巴结活检组织涂（切）片，骨髓、外周血涂片，皮肤、淋巴结活检组织涂（切）片，溃疡分泌物涂片，巨噬细胞内外直径溃疡分泌物涂片，巨噬细胞内外直径23m，有，有13个横个横隔的椭圆（腊肠）形细胞。糖原染色可

25、与黑热病隔的椭圆（腊肠）形细胞。糖原染色可与黑热病LD小体小体和荚膜组织胞浆菌鉴别。和荚膜组织胞浆菌鉴别。培养阳性为诊断金标准培养阳性为诊断金标准。阳性率骨髓。阳性率骨髓100%，皮损，皮损90%，血液血液76%。血清学试验检测。血清学试验检测Mp1基因编码的本菌特异的胞基因编码的本菌特异的胞壁甘露糖蛋白壁甘露糖蛋白Mp1P抗原或其特异抗体。抗原或其特异抗体。分子生物学诊断：同念珠菌飞行属。分子生物学诊断：同念珠菌飞行属。马尔尼菲青霉马尔尼菲青霉鉴定依据鉴定依据 双相菌 直接或病理检查找到腊肠形孢子 菌落特征（培养基被染成红色）和镜下结构（帚状枝及孢间连体）在察氏培养基上生长不良（麦芽汁培养基

26、上生长良好）菌丝相酵母相菌丝相(正面)菌丝相(反面)马尔尼菲青霉马尔尼菲青霉腊肠形孢子腊肠形孢子某些种与大骨节病、克山病、食管癌有关，在真某些种与大骨节病、克山病、食管癌有关，在真菌性角膜炎中占菌性角膜炎中占58.7%。可致心、脑、肺感染和真。可致心、脑、肺感染和真菌血症。菌血症。引起的引起的IFI逐年增多，发病率、死亡率仅次于白念逐年增多，发病率、死亡率仅次于白念珠菌和曲霉所致感染。珠菌和曲霉所致感染。吸入本菌致肺感染，类似吸入本菌致肺感染，类似IA。侵犯血管引起血栓。侵犯血管引起血栓致组织坏死。致组织坏死。常见常见IFI病原（病原（7）镰刀菌属（）镰刀菌属（Fusarium）特征：特征：典

27、型镰刀形大分生孢子，大、小不等，有典型镰刀形大分生孢子，大、小不等，有25个分个分隔。但即使多次分离出同一真菌也只能是疑诊。隔。但即使多次分离出同一真菌也只能是疑诊。确诊：确诊：培养阳性，病理组织切片发现本菌培养阳性，病理组织切片发现本菌。介绍两个实验介绍两个实验 GM试验试验 G试验试验 GM试验试验 检测检测曲霉半乳甘露聚糖（曲霉半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）抗原）抗原。试试剂盒：剂盒：Bio-Rad公司公司 PLATELIATM Aspergillus EIA.原理：原理：一步酶免疫夹心微孔板法一步酶免疫夹心微孔板法（1）GM连续连续2次阳性次阳性 有临床诊断价值。有临

28、床诊断价值。（2）GM阴性不能排除阴性不能排除IA（GM低于可测限）；高危患低于可测限）；高危患者应每周者应每周2次筛查。次筛查。（3）A值值0.000提示操作、试剂、仪器有误，应复测。提示操作、试剂、仪器有误，应复测。（4）假阴性：见于慢性肉芽肿病，）假阴性：见于慢性肉芽肿病，Jobs综合征及某些综合征及某些用抗真菌药治疗的用抗真菌药治疗的IA患者。患者。结果解释：结果解释：（5）假阳性：）假阳性：青霉属（青霉属（Penicillium）、交链孢属（）、交链孢属（Alternaria）、拟青）、拟青霉属（霉属（Percilomyces）、地丝菌属（）、地丝菌属（Geotrichum），组织胞

29、），组织胞浆菌属（浆菌属（Histoplasma）真菌与）真菌与EBA-2单抗有交叉反应。单抗有交叉反应。某些谷类制品、乳脂点心中含半乳呋喃糖某些谷类制品、乳脂点心中含半乳呋喃糖（galactofuranose），牛奶制品（），牛奶制品（humanized milks）含高浓）含高浓度度GM，常在婴儿造成，常在婴儿造成GM假阳性。假阳性。某些批次半合成某些批次半合成内酰胺抗生素内酰胺抗生素（piperacillin/tazobactam，amoxicillin与与clavulanic acid）中含）中含GM抗原。抗原。（6）GM试验对中性粒细胞减少症试验对中性粒细胞减少症IA患者诊断价值患者

30、诊断价值较高，对非中性粒细胞减少的较高，对非中性粒细胞减少的IA诊断价值较差。诊断价值较差。G试验试验：检测真菌检测真菌(念珠菌、曲霉、肺孢子菌等念珠菌、曲霉、肺孢子菌等)壁壁1,3-D葡聚糖葡聚糖(glucan).适用于念珠菌、曲霉、肺孢子菌、镰孢霉等引起的适用于念珠菌、曲霉、肺孢子菌、镰孢霉等引起的感染。感染。试剂盒试剂盒:Glucatell(美国美国Cape Code公司公司),2003年美国年美国FDA批准批准,美洲鲎美洲鲎:界值界值60pg/ml。Fungitec.G(日本日本Seikagaku Kogyo公司公司),东方鲎东方鲎:界值界值20pg/ml。Goldstream(北京金

31、山川公司北京金山川公司):界值界值20pg/ml。试验原理试验原理 类似检测细菌内毒素的鲎试验类似检测细菌内毒素的鲎试验(limulus lysate test),细菌内毒素细菌内毒素/1,3-D-glucan激活鲎变形细激活鲎变形细胞裂解物中的凝固酶原，生成凝固蛋白，引胞裂解物中的凝固酶原，生成凝固蛋白，引起浊度起浊度/色度变化。根据标准曲线得出检样中色度变化。根据标准曲线得出检样中1,3-D-glucan含量。含量。参考值参考值 10pg/ml。结果解释（金山川试剂盒说明书）结果解释（金山川试剂盒说明书）20pg/ml IFI（不能区分真菌种属）（不能区分真菌种属）以以50pg/ml为阳性

32、为阳性,诊断诊断IFI敏感性敏感性63.6%,特异性特异性90.8%.Cut off值值,敏感性敏感性,特异性尚待大规模临床验证。特异性尚待大规模临床验证。1、真菌感染检查知识普及，人才培训。、真菌感染检查知识普及，人才培训。2、质优价廉的商品试剂盒供应。、质优价廉的商品试剂盒供应。3、产、学、研结合，研发验证新方法、新试剂。、产、学、研结合，研发验证新方法、新试剂。几点建议几点建议 分离提取白念珠菌烯醇化酶 基因工程制备白念珠菌烯醇化酶 动物模型考察侵袭性白念珠菌感染后抗体产生规律 制备烯醇化酶单克隆和多克隆抗体 蛋白质组学技术筛选烟曲霉优势抗原 巢式PCR技术检测烟曲霉DNA 用烟曲霉分泌蛋白检测侵袭性曲霉病人以及疾病模型动物抗体，评估诊断价值。血清学方法有益于IC的早期诊断；目前市场提供诊断试剂品种少，检测的敏感性、特异性尚不能满足需要；解决IC早期快速诊断问题任重而道远，需要同仁们共同努力！谢 谢！