食用菌菌种选择及菌种标准化生产技术ppt课件.ppt

1、食用菌菌种选择食用菌菌种选择及菌种标准化生产技术及菌种标准化生产技术河北师范大学河北师范大学王立安王立安 教授教授一、食用菌菌种有关概念一、食用菌菌种有关概念1.1.菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。2.2.母种：由食用菌的孢子或者子实体分离而得的最初菌种。母种：由食用菌的孢子或者子实体分离而得的最初菌种。3.3.原种：将母种扩大到新的培养基上而培育出来的菌丝体。原种：将母种扩大到新的培养基上而培育出来的菌丝体。4.4.栽培种：由原种再扩大接种一次培养而得，可直接应用于生栽培种：由原种再扩大接种一次培养而得，可直接应用于生产。产。5.5.菌种老化：

2、是指菌龄过长导致的菌丝代谢能力减弱、出菇能菌种老化：是指菌龄过长导致的菌丝代谢能力减弱、出菇能力下降的现象。力下降的现象。6.6.菌种退化：是指菌种受高温等逆境因素或病毒感染等致病因菌种退化：是指菌种受高温等逆境因素或病毒感染等致病因素出现的菌种出菇能力下降的现象。素出现的菌种出菇能力下降的现象。固体菌种和液体菌种固体菌种和液体菌种 固体菌种最为常用，为固态营养基质培育的菌种。优点：使固体菌种最为常用，为固态营养基质培育的菌种。优点：使用方便。缺点：存在菌龄不一致问题。且普遍生产设施不达用方便。缺点：存在菌龄不一致问题。且普遍生产设施不达标。标。液体菌种为液体营养基质培养出的菌种。液体菌种为液

3、体营养基质培养出的菌种。优点：培养周期短、发菌快和省工、省料等。优点：培养周期短、发菌快和省工、省料等。缺点：设备投入大，技术要求高；不易贮存，不利运输，必缺点：设备投入大，技术要求高；不易贮存，不利运输，必须就地及时使用。此外，液体菌种培养过程中，有时会出现须就地及时使用。此外，液体菌种培养过程中，有时会出现所谓所谓“去双核化去双核化”现象，使双核菌丝体变成单核菌丝体，从现象，使双核菌丝体变成单核菌丝体，从而给进一步扩大培养和栽培带来一定的风险。而给进一步扩大培养和栽培带来一定的风险。当前菌种问题当前菌种问题 品种太滥、市场混乱：一新品种的育成最快需三年；品种太滥、市场混乱：一新品种的育成最

4、快需三年；菌种抗性含糊不清。抗性应有所指，而非抽象特性。如生物菌种抗性含糊不清。抗性应有所指，而非抽象特性。如生物转化率不可能转化率不可能200%200%以上；温型不可能以上；温型不可能38380 0C C仍正常出菇。仍正常出菇。菌种退化问题：五代内使用，栽培种菌种退化问题：五代内使用，栽培种1 12 2周内使用。周内使用。菌种生产设施、技术普遍不达标，菌种质量难以保证；菇农菌种生产设施、技术普遍不达标，菌种质量难以保证；菇农菌种知识普遍缺乏，纠纷不断，维权困难。菌种知识普遍缺乏，纠纷不断，维权困难。花香菇不是遗传特性而是一个生态学特征，任何一种香菇，花香菇不是遗传特性而是一个生态学特征，任何

5、一种香菇，只要具备花菇的形成条件：低温、低湿、晴朗、微风、昼夜只要具备花菇的形成条件：低温、低湿、晴朗、微风、昼夜温差大都可以形成花菇。一般中高温或中温型品种更易形成温差大都可以形成花菇。一般中高温或中温型品种更易形成花菇。花菇。二、国家对菌种管理的相关规定二、国家对菌种管理的相关规定从事菌种生产经营的单位和个人，应当取得从事菌种生产经营的单位和个人，应当取得食用菌菌种生产经营许可食用菌菌种生产经营许可证证。仅从事栽培种经营的单位和个人，可以不办理仅从事栽培种经营的单位和个人，可以不办理食用菌菌种生产经营许食用菌菌种生产经营许可证可证，但经营者要具备菌种的相关知识，具有相应的菌种贮藏设备和，但

6、经营者要具备菌种的相关知识，具有相应的菌种贮藏设备和场所，并报县级人民政府农业行政主管部门备案。场所，并报县级人民政府农业行政主管部门备案。栽培种栽培种食用菌菌种生产经营许可证食用菌菌种生产经营许可证由所在地县级人民政府农业行政由所在地县级人民政府农业行政主管部门核发，报省级人民政府农业行政主管部门备案。主管部门核发，报省级人民政府农业行政主管部门备案。母种和原种母种和原种食用菌菌种生产经营许可证食用菌菌种生产经营许可证，由所在地县级人民政府农，由所在地县级人民政府农业行政主管部门审核，省级人民政府农业行政主管部门核发，报农业部业行政主管部门审核，省级人民政府农业行政主管部门核发，报农业部备案

7、。备案。1.生产经营母种和原种的条件生产经营母种和原种的条件（1）生产经营母种注册资本）生产经营母种注册资本100万元以上，生产经营原种万元以上，生产经营原种注册资本注册资本50万元以上；万元以上；（2）省级人民政府农业行政主管部门考核合格的检验人员）省级人民政府农业行政主管部门考核合格的检验人员1名以上、生产技术人员名以上、生产技术人员2名以上；名以上；（3）有相应的灭菌、接种、培养、贮存等设备和场所，有）有相应的灭菌、接种、培养、贮存等设备和场所，有相应的质量检验仪器和设施。生产母种还应当有做出菇试相应的质量检验仪器和设施。生产母种还应当有做出菇试验所需的设备和场所。验所需的设备和场所。（

8、4）生产场地环境卫生及其他条件符合农业部）生产场地环境卫生及其他条件符合农业部食用菌菌食用菌菌种生产技术规程种生产技术规程要求。要求。2.生产经营栽培种的条件生产经营栽培种的条件（1）注册资本）注册资本10万元以上；万元以上；（2）省级人民政府农业行政主管部门考核合格的检验人）省级人民政府农业行政主管部门考核合格的检验人员员1名以上、生产技术人员名以上、生产技术人员1名以上；名以上；（3）有必要的灭菌、接种、培养、贮存等设备和场所，）有必要的灭菌、接种、培养、贮存等设备和场所，有必要的质量检验仪器和设施；有必要的质量检验仪器和设施；（4）栽培种生产场地的环境卫生及其他条件符合农业部）栽培种生产

9、场地的环境卫生及其他条件符合农业部食用菌菌种生产技术规程食用菌菌种生产技术规程要求。要求。3.对食用菌菌种生产的规定对食用菌菌种生产的规定 菌种生产经营许可证有效期为菌种生产经营许可证有效期为3年。年。禁止无证或者未按许可证的规定生产经营菌种；禁止伪造、禁止无证或者未按许可证的规定生产经营菌种；禁止伪造、涂改、买卖、租借涂改、买卖、租借食用菌菌种生产经营许可证食用菌菌种生产经营许可证。菌种生产单位和个人应当按照农业部菌种生产单位和个人应当按照农业部食用菌菌种生产技食用菌菌种生产技术规程术规程生产，并建立菌种生产档案，载明生产地点、时生产，并建立菌种生产档案，载明生产地点、时间、数量、培养基配方

10、、培养条件、菌种来源、操作人、间、数量、培养基配方、培养条件、菌种来源、操作人、技术负责人、检验记录、菌种流向等内容。生产档案应当技术负责人、检验记录、菌种流向等内容。生产档案应当保存至菌种售出后保存至菌种售出后2年。年。4.对食用菌菌种经营的相关规定对食用菌菌种经营的相关规定 菌种经营单位和个人应当建立菌种经营档案，载明菌种来菌种经营单位和个人应当建立菌种经营档案，载明菌种来源、贮存时间和条件、销售去向、运输、经办人等内容。源、贮存时间和条件、销售去向、运输、经办人等内容。经营档案应当保存至菌种销售后经营档案应当保存至菌种销售后2年。年。销售的菌种应当附有标签和菌种质量合格证。标签应当标销售

11、的菌种应当附有标签和菌种质量合格证。标签应当标注菌种种类、品种、级别、接种日期、保藏条件、保质期、注菌种种类、品种、级别、接种日期、保藏条件、保质期、菌种生产经营许可证编号、执行标准及生产者名称、生产菌种生产经营许可证编号、执行标准及生产者名称、生产地点。标签标注的内容应当与销售菌种相符。地点。标签标注的内容应当与销售菌种相符。菌种经营者应当向购买者提供菌种的品种种性说明、栽培菌种经营者应当向购买者提供菌种的品种种性说明、栽培要点及相关咨询服务，并对菌种质量负责。要点及相关咨询服务，并对菌种质量负责。5.判断假菌种、劣质菌种的标准判断假菌种、劣质菌种的标准 具备下列条件之一的为假菌种：具备下列

12、条件之一的为假菌种：（1）以非菌种冒充菌种；）以非菌种冒充菌种；（2）菌种种类、品种、级别与标签内容不符的。）菌种种类、品种、级别与标签内容不符的。具备下列条件之一的为劣菌种：具备下列条件之一的为劣菌种：（1）质量低于国家规定的种用标准的；）质量低于国家规定的种用标准的；（2）质量低于标签标注指标的；）质量低于标签标注指标的；（3）菌种过期、变质的。）菌种过期、变质的。6.菌种种性与新品种认定菌种种性与新品种认定 菌种种性是指食用菌品种特性的简称，包括对温度、湿度、菌种种性是指食用菌品种特性的简称，包括对温度、湿度、酸碱度、光线、氧气等环境条件的要求，抗逆性、丰产性、酸碱度、光线、氧气等环境条

13、件的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺性状。农艺性状。食用菌品种选育（引进）者可自愿向全国农业技术推广服食用菌品种选育（引进）者可自愿向全国农业技术推广服务中心申请品种认定。全国农业技术推广服务中心成立食务中心申请品种认定。全国农业技术推广服务中心成立食用菌品种认定委员会，承担品种认定的技术鉴定工作。用菌品种认定委员会，承担品种认定的技术鉴定工作。三、优良菌种的标准与检测三、优良菌种的标准与检测 母种：菌丝粗壮、洁白，生长健壮有力，无任何杂菌；不母种：菌丝粗壮、洁白，生长健壮有力，无任何杂菌；不发黄，不

14、老化，培养基不失水；培养皿检测培养无扇变，发黄，不老化，培养基不失水；培养皿检测培养无扇变，菌落圆形，边缘整齐。菌龄掌握在刚长满斜面即用于扩接菌落圆形，边缘整齐。菌龄掌握在刚长满斜面即用于扩接原种或继代培养。原种或继代培养。原种、栽培种：原种、栽培种：（1）菌丝洁白、无杂菌，棉塞、纸盖均无霉点，菌丝满瓶或袋。菌丝长满瓶或袋后，）菌丝洁白、无杂菌，棉塞、纸盖均无霉点，菌丝满瓶或袋。菌丝长满瓶或袋后，表面分泌茶色液滴，有少数原基形成，可视为正常。表面分泌茶色液滴，有少数原基形成，可视为正常。（2）打开瓶或袋口塞有食用菌独特的芳香味，无霉味和酸臭味。）打开瓶或袋口塞有食用菌独特的芳香味，无霉味和酸臭

15、味。（3）随机挖取一块菌种，成块而有韧性、不松散。将菌种块接到新的培养基上，在）随机挖取一块菌种，成块而有韧性、不松散。将菌种块接到新的培养基上，在25下培养，菌种萌发正常。劣质原种、栽培种的表现是菌丝表面出现杂菌斑纹（拮下培养，菌种萌发正常。劣质原种、栽培种的表现是菌丝表面出现杂菌斑纹（拮抗线），菌丝细弱，脱壁萎缩，发黄老化，这样的原种、栽培种不能用于生产。抗线），菌丝细弱，脱壁萎缩，发黄老化，这样的原种、栽培种不能用于生产。1.菌种质量鉴定菌种质量鉴定 菌种鉴定（6方面）：纯度、长势、菌龄、均匀度、出菇快慢。出菇试验是最可靠、最实际的方法。产量高、品质好优良菌种。1.母种的引进母种的引进

16、引种要从有实力，信誉度高的科研单位引种。引种要从有实力，信誉度高的科研单位引种。必须做到：必须做到：一看试管和瓶上是否贴有标签；一看试管和瓶上是否贴有标签；二看标签上的菌种名称、菌种代号、接种时间是否二看标签上的菌种名称、菌种代号、接种时间是否符合所要求的品种；符合所要求的品种；三看试管或菌种瓶内菌丝长势，是否污染或老化；三看试管或菌种瓶内菌丝长势，是否污染或老化；四看管口或瓶口棉花塞是否松脱，管、瓶有无破裂。四看管口或瓶口棉花塞是否松脱，管、瓶有无破裂。2.母种质量鉴定母种质量鉴定 控制转管次数，转管控制转管次数，转管23次为宜，最多不超过次为宜，最多不超过4次。（菌种培次。（菌种培养的时间

17、越长，菌龄越大，生活力下降，菌种易老化）养的时间越长，菌龄越大，生活力下降，菌种易老化）出菇试验：菌丝生长健壮，出菇快、朵形好、产量高，为优良出菇试验：菌丝生长健壮，出菇快、朵形好、产量高，为优良菌种。菌种。外观肉眼鉴定：外表菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强；外观肉眼鉴定：外表菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强；菌丝已干燥、收缩或菌丝自溶产生大量红褐色液体，则生活力菌丝已干燥、收缩或菌丝自溶产生大量红褐色液体，则生活力降低。降低。长势鉴定：菌丝生长快、整齐，浓而健壮，是优良品种。长势鉴定：菌丝生长快、整齐，浓而健壮，是优良品种。温度适应性鉴定：一般菌类在温度适应性鉴定：一般菌类在30，高

18、温型菌在，高温型菌在35，培养，培养4h，在高温下，仍能健壮生长，为优良菌种；在高温下，菌丝，在高温下，仍能健壮生长，为优良菌种；在高温下，菌丝萎缩，为不良菌种。萎缩，为不良菌种。干湿度鉴定：能在偏干或偏湿培养基上生长良好的菌种，为优干湿度鉴定：能在偏干或偏湿培养基上生长良好的菌种，为优良菌种。良菌种。3.原种和栽培种的质量鉴定原种和栽培种的质量鉴定 3.1 菌种传代和菌龄应在规定范围内菌种传代和菌龄应在规定范围内（1）用转管在）用转管在45次以内的母种生产的原种和栽次以内的母种生产的原种和栽培种。培种。（2）一般食用菌的原种和栽培种，在常温下可保）一般食用菌的原种和栽培种，在常温下可保存存3

19、个月内有效；草菇、灵芝、凤尾菇等高温型菌个月内有效；草菇、灵芝、凤尾菇等高温型菌则保存则保存1个月内有效。超过上述期限的菌种，即使个月内有效。超过上述期限的菌种，即使外观健壮，生产上也不使用。外观健壮，生产上也不使用。3.2 原种及栽培种外观要求原种及栽培种外观要求（1）菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。）菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。（2）菌丝已长满培养基，银耳的菌种还要求在培养基上分）菌丝已长满培养基，银耳的菌种还要求在培养基上分化出子实体原基。化出子实体原基。（3）菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特有的色泽。）菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特有的色泽。（4）菌种瓶内无杂色出现和无杂菌污

20、染，。）菌种瓶内无杂色出现和无杂菌污染，。（5）菌种瓶内无黄色汁液渗出，反之，表明菌种老化。）菌种瓶内无黄色汁液渗出，反之，表明菌种老化。（6）菌种培养基不能干缩与瓶壁分开。）菌种培养基不能干缩与瓶壁分开。3.3 常见优质原种和栽培种的性状常见优质原种和栽培种的性状（1）平菇：菌丝粗壮，浓白，密集，爬壁力强，菌柱断面）平菇：菌丝粗壮，浓白，密集，爬壁力强，菌柱断面菌丝浓白，清香，无异味，发菌快。菌丝浓白，清香，无异味，发菌快。（2）金针菇：菌丝洁白，较粗壮，密集，长绒毛，外观似）金针菇：菌丝洁白，较粗壮，密集，长绒毛，外观似细粉状，培养后期菌种表面易产生菇蕾。细粉状，培养后期菌种表面易产生菇蕾

21、。（3）香菇：菌丝洁白，绵毛状，后期见光易分泌出酱油色）香菇：菌丝洁白，绵毛状，后期见光易分泌出酱油色液体，呈褐色，有时表面产生小菇蕾。液体，呈褐色，有时表面产生小菇蕾。（4）双孢蘑菇：菌丝灰白带微蓝，密集，细绒状，气生菌）双孢蘑菇：菌丝灰白带微蓝，密集，细绒状，气生菌丝少，贴生菌丝在培养基内呈细绒状分布，有特有的蘑菇香丝少，贴生菌丝在培养基内呈细绒状分布，有特有的蘑菇香味。味。四、菌种标准化生产（一）标准化制种场地（二）母种评价筛选与复壮（三）菌种制备与培养（四）菌种保存（一）标准化制种场地可参照“”字型房，以方便生产。包括：配料室、灭菌室、冷却室、接种室、菌种培养室、销售室以及库房等。周围

22、环境要卫生。场地基本要求：地势高燥，通风良好。排水畅通，交通便利。场地基本要求：地势高燥，通风良好。排水畅通，交通便利。环境卫生要求：至少环境卫生要求：至少300m之内无禽畜舍，无垃圾之内无禽畜舍，无垃圾(粪便粪便)场，无污水和其场，无污水和其他污染源他污染源(如大量扬尘的水泥厂、砖瓦厂、石灰厂、木材加工厂等如大量扬尘的水泥厂、砖瓦厂、石灰厂、木材加工厂等)。厂房设置和建造：有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装室厂房设置和建造：有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装室(场场)、灭、灭菌室、冷却室、按种室、培养室、贮存室、菌种检验室等。厂房建造从菌室、冷却室、按种室、培养室、贮存室、菌种检验室

23、等。厂房建造从结构和功能上满足食用菌菌种生产的基本需要。结构和功能上满足食用菌菌种生产的基本需要。摊晒场：要求平坦高燥、通风良好，光照充足、空旷宽阔、远离火源。摊晒场：要求平坦高燥、通风良好，光照充足、空旷宽阔、远离火源。原材料库：要求高燥、通风良好，防雨、远离火源。原材料库：要求高燥、通风良好，防雨、远离火源。配料分装室配料分装室(场场)：要求水电方便，空间充足。如安排在室外，应有天棚，：要求水电方便，空间充足。如安排在室外，应有天棚，防雨防晒。防雨防晒。灭菌室：要求水电安全方便，通风良好，空间充足，散热畅通。灭菌室：要求水电安全方便，通风良好，空间充足，散热畅通。冷却室：洁净、防尘、易散热

24、。冷却室：洁净、防尘、易散热。接种室：要设缓冲间，防尘换气性能良好，内壁和屋顶光滑，经常清洗接种室：要设缓冲间，防尘换气性能良好，内壁和屋顶光滑，经常清洗和消毒。做到空气洁净和消毒。做到空气洁净培养室和贮存室：内壁和屋顶光滑，便于清洗和消毒。培养室和贮存室培养室和贮存室：内壁和屋顶光滑，便于清洗和消毒。培养室和贮存室墙壁要加厚，利于控温。墙壁要加厚，利于控温。菌种检验室：水电方便，利于装备相应的检验设备和仪器菌种检验室：水电方便，利于装备相应的检验设备和仪器基本设备：磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、净化工作台、接种基本设备：磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、净化工作台、接种箱、调温设备、

25、除湿机、培养架、恒温箱、冰箱、显微镜等及常规用具，箱、调温设备、除湿机、培养架、恒温箱、冰箱、显微镜等及常规用具，产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装瓶装袋机。高压灭菌锅应使用经有产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装瓶装袋机。高压灭菌锅应使用经有关部门检验的安全合格产品。关部门检验的安全合格产品。基本设施：配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施规模基本设施：配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施规模要配套。冷却室、按种室、培养室和贮存室都要有调温设施。要配套。冷却室、按种室、培养室和贮存室都要有调温设施。（二）母种评价筛选与复壮（二）母种评价筛选与复壮1菌种复壮的方法菌种复壮的方法

26、菌种来源：试管斜面种或采用组织分离的试管斜面种。菌种来源：试管斜面种或采用组织分离的试管斜面种。评价筛选与复壮操作：评价筛选与复壮操作：（1）从斜面种中挑取远离接种点下面的菌丝少许，接种到与试管培养基成分不）从斜面种中挑取远离接种点下面的菌丝少许，接种到与试管培养基成分不同的平板培养基中，每一平板可接同的平板培养基中，每一平板可接3-4块。块。25恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养5天后，观察菌天后，观察菌落形态。落形态。（2）从形态圆形、规整，生长旺盛的菌落周边，在显微镜下应用显微操作器把）从形态圆形、规整，生长旺盛的菌落周边，在显微镜下应用显微操作器把菌丝尖端切下（可用无菌小刀切取菌落边缘的

27、菌丝尖端进行分离移植，也可用无菌丝尖端切下（可用无菌小刀切取菌落边缘的菌丝尖端进行分离移植，也可用无菌毛细管截取菌丝尖端单细胞进行纯种分离），转接到与平板培养基成分不同的菌毛细管截取菌丝尖端单细胞进行纯种分离），转接到与平板培养基成分不同的平板上。平板上。25条件下继续培养，采用相同操作，对菌种进一步挑选、脱毒、复壮。条件下继续培养，采用相同操作，对菌种进一步挑选、脱毒、复壮。（3）直至菌落呈规则圆形，菌丝生长明显加快。挑取菌落边缘菌丝，接种到与）直至菌落呈规则圆形，菌丝生长明显加快。挑取菌落边缘菌丝，接种到与与平板培养基成分不同的试管斜面中。与平板培养基成分不同的试管斜面中。25恒温培养箱中

28、培养恒温培养箱中培养7-10天后，密封试天后，密封试管口，于管口，于4冷藏箱保存。此为复壮菌种。冷藏箱保存。此为复壮菌种。图1.大棕菇提纯复壮图2.香菇A288提纯复壮图3.香菇灵仙一号提纯复壮图4.姬菇P20提纯复壮图5.蜜环菌提纯复壮香菇母种脱毒复壮前发菌情况香菇母种脱毒复壮前发菌情况香菇母种脱毒复壮后发菌情况香菇母种脱毒复壮后发菌情况2.筛选复壮菌种的检测方法筛选复壮菌种的检测方法 直接观察：用肉眼观察复壮后试管中菌丝洁白、粗壮，爬直接观察：用肉眼观察复壮后试管中菌丝洁白、粗壮，爬壁能力强。壁能力强。显微镜检查：在载玻片上滴一滴蒸馏水，然后挑取少许菌显微镜检查：在载玻片上滴一滴蒸馏水，然

29、后挑取少许菌丝置水滴上，让菌丝体充分展开，盖好盖玻片，再置显微丝置水滴上，让菌丝体充分展开，盖好盖玻片，再置显微镜下观察。也可通过菌丝体染色后镜检观察。复壮菌种菌镜下观察。也可通过菌丝体染色后镜检观察。复壮菌种菌丝体应粗壮，菌丝节较长，呈分枝状；与未复壮前菌丝节丝体应粗壮，菌丝节较长，呈分枝状；与未复壮前菌丝节很短，分枝很浓密，菌丝较纤细形成对比。很短，分枝很浓密，菌丝较纤细形成对比。经特殊染色后，应能看到双核及锁状联合，以确保复壮后经特殊染色后，应能看到双核及锁状联合，以确保复壮后菌丝为双核菌丝。菌丝为双核菌丝。3.菌丝生长速率测定菌丝生长速率测定 将复壮菌种，转接至将复壮菌种，转接至PDA

30、平板培养基中央，待菌丝形成放平板培养基中央，待菌丝形成放射状菌落后，用直径射状菌落后，用直径0.5cm的无菌打孔器研菌落边缘同心的无菌打孔器研菌落边缘同心圆处取菌丝块，将相同大小的菌块接种到圆处取菌丝块，将相同大小的菌块接种到PDA平板培养基平板培养基上（每一平板可接上（每一平板可接3块，均匀摆放小，相当于块，均匀摆放小，相当于3次重复。次重复。25恒温培养恒温培养5天后，每隔天后，每隔24小时测定菌落直径，连测小时测定菌落直径，连测5天，计算并统计菌丝平均生长速度。天，计算并统计菌丝平均生长速度。复壮后菌丝平均生长速度应高于未复壮前。复壮后菌丝平均生长速度应高于未复壮前。4.其他指标测定其他

31、指标测定吃料能力测定：将复壮试管母种接入新鲜配制的装在试管中的栽培料培吃料能力测定：将复壮试管母种接入新鲜配制的装在试管中的栽培料培养基中，置养基中，置24下进行培养，下进行培养，5天后观察菌丝生长状况并测定生长速度。天后观察菌丝生长状况并测定生长速度。复壮后菌种与未复壮的菌种相比，菌块萌发快并迅速向培养料中生长伸复壮后菌种与未复壮的菌种相比，菌块萌发快并迅速向培养料中生长伸展，吃料能力应明显增强。展，吃料能力应明显增强。第一潮菇产量测定：第一潮菇产量测定：采用相同出菇培养基制备栽培袋，发满菌后按食用采用相同出菇培养基制备栽培袋，发满菌后按食用菌出菇环境要求进行管理，测定第一潮菇产量。复壮后菌

32、种第一潮菇产菌出菇环境要求进行管理，测定第一潮菇产量。复壮后菌种第一潮菇产量应高于复壮前。量应高于复壮前。酯酶同工酶图谱：以新鲜菌丝体或子实体为材料制备新鲜酶液，采用酯酶同工酶图谱：以新鲜菌丝体或子实体为材料制备新鲜酶液，采用SDS-PAGE技术及酯酶染色技术显示酯酶同工酶图谱，复壮前后菌丝体技术及酯酶染色技术显示酯酶同工酶图谱，复壮前后菌丝体或子实体同工酶图谱应具相同谱带，复壮后酯酶条带应比复壮前着色较或子实体同工酶图谱应具相同谱带，复壮后酯酶条带应比复壮前着色较深。深。（三）菌种制备与培养 1.标准化生产对菌种培养时间的要求标准化生产对菌种培养时间的要求 母种最佳培养时间母种最佳培养时间7

33、-10天，菌龄掌握在刚长满斜天，菌龄掌握在刚长满斜面即用于扩接原种或继代培养。面即用于扩接原种或继代培养。原种接种后应在原种接种后应在40-50天长满瓶，菌龄掌握在菌丝天长满瓶，菌龄掌握在菌丝长满瓶长满瓶10天左右使用。天左右使用。栽培种接种后菌丝应在栽培种接种后菌丝应在30-45天长满瓶，菌龄掌握天长满瓶，菌龄掌握在菌丝长满瓶后在菌丝长满瓶后15天内使用。天内使用。2.菌种标准化生产对技术的要求菌种标准化生产对技术的要求 2.1 使用品种：使用品种：应使用经省级以上农作物品种审定委员会登记的品种，并且应使用经省级以上农作物品种审定委员会登记的品种，并且清楚种性。不应使用来源和种性不清的菌种和

34、生产性状未经清楚种性。不应使用来源和种性不清的菌种和生产性状未经系统试验验证的组织分离物作种源生产菌种。并从具相应技系统试验验证的组织分离物作种源生产菌种。并从具相应技术资质的供种单位引种。术资质的供种单位引种。2.2 移植扩大：移植扩大：母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不应超过母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不应超过6瓶瓶(袋袋)；一瓶原种移植扩大栽培种不应超过；一瓶原种移植扩大栽培种不应超过50瓶瓶(袋袋)。2.3 生产工艺流程：生产工艺流程：培养基配制培养基配制分装分装灭菌灭菌冷却冷却接种接种培养培养(检查检查)成品成品 2.4 容器要求：容器要求：（1）母种：使

35、用玻璃试管和棉塞，试管）母种：使用玻璃试管和棉塞，试管18 mm180 mm或或20mm200mm，棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。，棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。（2）原种：使用）原种：使用650 mL-750 ml，耐，耐126高温的无色或高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶，或近无色的玻璃菌种瓶，或850 ml耐耐126高温白色半透明高温白色半透明符合符合GB 9687卫生规定的塑料菌种瓶，或卫生规定的塑料菌种瓶，或15cm28cm耐耐126高温符合高温符合GB 9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。也可用卫生规定的聚丙烯塑料袋。也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。能满足滤菌和透气要求

36、的无棉塑料盖代替棉塞。（3）栽培种栽培种：同原种。也可使用：同原种。也可使用17 cm35 cm耐耐126高温符合高温符合GB 9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。卫生规定的聚丙烯塑料袋。2.5 培养原料：培养原料：（1）化学试剂类：这类原料如硫酸镁、磷酸二氢钾等，要使化学试剂类：这类原料如硫酸镁、磷酸二氢钾等，要使用化学纯级试剂。用化学纯级试剂。（2）生物制剂和天然材料类）生物制剂和天然材料类生物制剂如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽壳、生物制剂如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净干燥。麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净干燥。（3）培养基配

37、方）培养基配方母种培养基：一般使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基母种培养基：一般使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA：马铃薯马铃薯200 g(用浸出汁用浸出汁)，葡萄糖，葡萄糖20g，琼脂，琼脂20g，水，水1000mL，PH值自然值自然)或综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（或综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA：马铃薯：马铃薯200g(用浸出汁用浸出汁)，葡萄糖，葡萄糖20g，磷酸二氢钾，磷酸二氢钾2g，硫酸镁，硫酸镁0.5g，琼脂琼脂20g，水，水1000 mL，pH值自然。特殊种类需加入其生长值自然。特殊种类需加入其生长所需特殊物质，如酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等，但所需特殊物质，如酵母粉、蛋白胨、

38、麦芽汁、麦芽糖等，但不应过富。严格掌握不应过富。严格掌握PH值。值。2.6 常用原种和栽培种培养基：常用原种和栽培种培养基：根据当地原料资源和所生产品种的要求，使用适宜的培养根据当地原料资源和所生产品种的要求，使用适宜的培养基配方，严格掌握含水量和基配方，严格掌握含水量和PH值。值。2.6.1 以木屑为主料的培养基配方：以木屑为主料的培养基配方：适用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金针菇、滑菇、鸡适用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金针菇、滑菇、鸡腿菇、真姬菇等多数木腐菌类。腿菇、真姬菇等多数木腐菌类。1.阔叶树木屑阔叶树木屑78%，麸皮，麸皮20%，糖，糖1，石膏，石膏1，含水量，含水量58%士

39、士2%。2.阔叶树木屑阔叶树木屑63%，棉籽壳，棉籽壳15，麸皮，麸皮20%，糖，糖1，石膏，石膏1，含水量，含水量58%土土2%。3.阔叶树木屑阔叶树木屑63%，玉米芯粉，玉米芯粉15，麸皮，麸皮20，糖，糖1，石膏石膏1%，含水量，含水量58%土土2%。2.6.2 以棉籽壳为主料的培养基：以棉籽壳为主料的培养基：适用于黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、真姬菇、杨树菇、鸡腿菇、适用于黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、真姬菇、杨树菇、鸡腿菇、侧耳属等多数木腐菌类。侧耳属等多数木腐菌类。1.棉籽壳棉籽壳99%，石膏，石膏1，含水量，含水量60土土2%。2.棉籽壳棉籽壳84-89%，麦麸，麦麸10%-15

40、%，石膏，石膏1%，含水量，含水量60%士士2%。3.棉籽壳棉籽壳54-69%，玉米芯，玉米芯20-30，麦麸，麦麸l0%-15%，石膏，石膏1，含水，含水量量60%土土2%。4.棉籽壳棉籽壳54-69%，阔叶树木屑，阔叶树木屑20%-30%，麦麸，麦麸10%-15%，石膏，石膏1%，含水量含水量60士士2%。2.6.3 以棉籽壳或稻草为主的培养基：以棉籽壳或稻草为主的培养基：适用于草菇。适用于草菇。1.棉籽壳棉籽壳99%，石灰，石灰1%，含水量，含水量68%土土2。2.棉籽壳棉籽壳84%-89%，麦麸，麦麸10%-15%，石灰，石灰1%，含水量，含水量68%土土2。3.棉籽壳棉籽壳44%，碎

41、稻草，碎稻草40%，麦麸，麦麸15%，石灰，石灰1%，含水量，含水量68%土土2。2.6.4 腐熟料培养基：腐熟料培养基：适用于双孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇属的种类。适用于双孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇属的种类。1.腐熟麦秸或稻草（干）腐熟麦秸或稻草（干）77%，腐熟牛粪粉（干），腐熟牛粪粉（干）20%，石膏粉，石膏粉1%，碳酸钙，碳酸钙2%，含水量，含水量62%土土1%，PH7.5。2.腐熟棉籽壳（干）腐熟棉籽壳（干）97%，石膏粉，石膏粉1%，碳酸钙，碳酸钙2%，含水量含水量55%土土1%，PH7.5。2.6.5 谷粒培养基：谷粒培养基：小麦、谷子、玉米或高梁小麦、谷子、玉米或高梁97%

42、-98，石膏，石膏2%-3，含水，含水量量50%1，适用于双孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇，适用于双孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇属的种类，也可用于侧耳属各种和金针菇的原种。属的种类，也可用于侧耳属各种和金针菇的原种。2.7 分装要求：分装要求：母种培养基的分装量掌握在试管长度的四分之一至五分之一，灭菌后母种培养基的分装量掌握在试管长度的四分之一至五分之一，灭菌后摆放成的斜面顶端距试管口不少于摆放成的斜面顶端距试管口不少于50mm，原种和栽培种培养基装至距瓶，原种和栽培种培养基装至距瓶(袋袋)口不少于口不少于60 mm，灭菌后不少于，灭菌后不少于45 mm。棉塞大小松紧要适度。原种。棉塞大小松紧要

43、适度。原种和栽培种培养基的松紧度要一致。和栽培种培养基的松紧度要一致。2.8 灭菌要求：灭菌要求：母种的培养基配制分装后应立即灭菌；原种和栽培种培养基配制后应母种的培养基配制分装后应立即灭菌；原种和栽培种培养基配制后应在在4 h内进锅灭菌。母种培养基灭菌内进锅灭菌。母种培养基灭菌0.11 Mpa0.12 Mpa，30min，木屑培，木屑培养基和草料培养基灭菌养基和草料培养基灭菌0.12 MPa，1.5 h或或0.14 MPa0.15 MPa，1h，谷，谷粒培养基、粪草培养基和木塞培养基灭菌粒培养基、粪草培养基和木塞培养基灭菌0.14 MPa0.15 MPa，2.5 h。装。装容量较大时，灭菌时

44、间要适当延长。灭菌完毕后，应自然降压，不应强制容量较大时，灭菌时间要适当延长。灭菌完毕后，应自然降压，不应强制降压。常压灭菌时，在降压。常压灭菌时，在2 h之内使灭菌室温度达到之内使灭菌室温度达到100，保持，保持1008 h10 h。母种培养基、原种培养基、谷粒培养基、粪草培养基和木塞培养基，。母种培养基、原种培养基、谷粒培养基、粪草培养基和木塞培养基，应高压灭菌，不应常压灭菌。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。应高压灭菌，不应常压灭菌。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。2.9 灭菌效果的检查：灭菌效果的检查：母种培养基置于母种培养基置于28恒温培养，原种和栽培种恒温培养，原种和栽培种培养基经无菌操

45、作接种于培养基经无菌操作接种于GB 4789.28-1994中中4.8规定的营养肉汤培养基中，于规定的营养肉汤培养基中，于28恒温培养，恒温培养，48 h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。后检查，无微生物长出的为灭菌合格。2.10 冷却要求：冷却要求：冷却室使用前要进行清洁和除尘处理。地面铺冷却室使用前要进行清洁和除尘处理。地面铺消毒过的塑料薄膜后，将灭菌后的原种瓶（袋）或消毒过的塑料薄膜后，将灭菌后的原种瓶（袋）或栽培种瓶（袋）放置在冷却室中冷却到料温降至适栽培种瓶（袋）放置在冷却室中冷却到料温降至适宜温度。宜温度。2.11 接种过程规定：接种过程规定：接种室（箱）的基本处理程序：接种室（箱

46、）的基本处理程序：清洁清洁搬入接种物和被接种物搬入接种物和被接种物接种室（箱）的消毒处理。接种室（箱）的消毒处理。接种室（箱）的消毒方法：用药物消毒并用紫外灯照射。接种室（箱）的消毒方法：用药物消毒并用紫外灯照射。净化工作台的消毒处理方法：净化工作台的消毒处理方法：先用先用75酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后预净酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后预净20min。接种操作：接种操作：在无菌室（箱）或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时在无菌室（箱）或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时贴好标签。贴好标签。接种室（箱）后处理：接种室（箱）后处理：接种室每次使用后，

47、要及时清理清洁，排除废气，清除废物，台面接种室每次使用后，要及时清理清洁，排除废气，清除废物，台面要用要用75酒精或新洁尔灭溶液擦试消毒酒精或新洁尔灭溶液擦试消毒2.12 培养室处理及后期管理：培养室处理及后期管理：在使用培养室的前两天，采用药物消毒。在使用培养室的前两天，采用药物消毒。培养条件：培养条件：根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度（多在根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度（多在22-28），保持空气相对湿度在），保持空气相对湿度在75%以下，通风，避光。以下，通风，避光。培养期的检查：培养期的检查：各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种。各级菌种培养期间

48、应定期检查，及时拣出不合格菌种。入库：完成培养的菌种要及时登记入库。入库：完成培养的菌种要及时登记入库。记录：生产各环节应详细记录。记录：生产各环节应详细记录。留样：各级菌种都应留样备查，留样的数量应以每个批号母种留样：各级菌种都应留样备查，留样的数量应以每个批号母种3-5支，支，原种和栽培种原种和栽培种5-7瓶（袋），于瓶（袋），于4-6下贮存，贮存至使用者在正常生下贮存，贮存至使用者在正常生产条件下该批菌种出第一潮菇（耳）。产条件下该批菌种出第一潮菇（耳）。（四）菌种退化及组织分离法1.1.菌种退化的原因分析菌种退化的原因分析2.防止菌种退化的措施防止菌种退化的措施 3.菌种组织分离法菌种

49、组织分离法1.菌种退化的原因分析（）菌种混杂在菌种继代培养过程中，不同品种间交叉（）菌种混杂在菌种继代培养过程中，不同品种间交叉感染，导致不同品种的菌丝体混杂在一起，菌丝生长发生变感染，导致不同品种的菌丝体混杂在一起，菌丝生长发生变异，导致原有品种生产性状的改变，常常表现出产量下降、异，导致原有品种生产性状的改变，常常表现出产量下降、质量变劣等。质量变劣等。（）有害突变的发生一般来说，一个正常菌株经过多代（）有害突变的发生一般来说，一个正常菌株经过多代移植，不会导致遗传性状的改变。但是如果一个菌株的菌丝移植，不会导致遗传性状的改变。但是如果一个菌株的菌丝细胞中发生有害突变，而且突变体能适应外界

50、环境条件。那细胞中发生有害突变，而且突变体能适应外界环境条件。那么，随着移接次数的增加，有害突变体在菌丝细胞群中所占么，随着移接次数的增加，有害突变体在菌丝细胞群中所占的比例会逐渐增大。这样，该菌株的生产性能就会随之恶化，的比例会逐渐增大。这样，该菌株的生产性能就会随之恶化，退化现象就逐渐显现出来。退化现象就逐渐显现出来。（）杂交菌株的双亲核比例失调杂交菌株的菌丝体在（）杂交菌株的双亲核比例失调杂交菌株的菌丝体在转管过程中，受到外界环境、营养条件等改变的影响，其转管过程中，受到外界环境、营养条件等改变的影响，其中一个亲本的核发育正常逐渐占据优势而另一亲本的核可中一个亲本的核发育正常逐渐占据优势