TSPOT诊断结核感染课件.ppt
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- TSPOT 诊断 结核 感染 课件
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1、TSPOT诊断结核感染诊断结核感染2主要内容n结核病及其诊断现状nT-SPOT.TB的原理及其特点nT-SPOT.TB技术的应用3主要内容n结核病及其诊断现状nT-SPOT.TB的原理及其特点nT-SPOT.TB技术的应用4结核的现状结核的现状 结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO统计,全球约有统计,全球约有20亿人感染结核分枝杆菌,每亿人感染结核分枝杆菌,每年有约年有约200万人死于结核。万人死于结核。我国是世界上我国是世界上22个结核病高负担国家之一,结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人个结核病高负担国家之一,结核感染导致的死亡人数是
2、其他传染性疾病总死亡人数的数的2倍以上。倍以上。5中国是结核感染高负担国家n患者人数占全球的14.3%,具体表现为“五多”n感染人数多5.5亿人感染过结核n患病人数多现有活动性肺结核患者500万n潜伏感染人数多受限于检测条件较难统计,2009年流行病调查结果为总人口的44.5%(因采用PPD检测,假阳性较多)n新发患者多仅活动性肺结核2009年新发病患107万n死亡人数多13万/年6结核的传统诊断手段结核的传统诊断手段u结核菌素皮试:结核菌素皮试:低敏感性:低敏感性:免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特异性:低特异性:与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉,易造成“假阳性”结果。u免疫学诊断
3、抗原、抗体(胶体金)u细菌学检查:细菌学检查:常规培养:2月;快速培养:1周;涂片阳性率取决于采集标本中细菌数量,不利于早期诊断。u病理学检查:病理学检查:阳性率低,对取材有较高要求,有创伤,对肉芽肿性病变需进一步鉴别。u分子生物学诊断 PCRu影像学检查7 免疫学诊断PPD皮肤试验 抗体检测 假阳性率高 48-72h读取结果 敏感性、特异性差 8WHO关于血清学检测声明n2011年7月20日,世界卫生组织(WHO)正式声明,要求禁止将血清学检测方法(抗原,抗体,蛋白芯片等)用于肺结核和肺外结核的诊断。WHO warns against the use of inaccurate commer
4、cial serological tests for pulmonary and extra-pulmonary TB.A substandard test with unreliable results TB can be wrongly diagnosed A serological test for diagnosing active TB disease is bad practice Problems of misdiagnosis The inaccurate serological tests are costly Selling substandard tests with u
5、nreliable results9 细菌学诊断抗酸染色涂片 分枝杆菌培养 阳性率低 含菌量1万/mL痰液 需时4-6周 10快速培养系统1.BD BACTEC MGIT 960培养系统培养系统 2.BacT ALERT 3D培养系统培养系统 11分子生物学诊断实时荧光定量PCR技术:HRM 线性探针耐多药检测技术:HAIN技术 基因芯片 PCR 电离质谱检测技术 12病理学检查病理学检查n阳性率低n对取材有较高要求,有创伤n对肉芽肿性病变需进一步鉴别13影像学检查n目前诊断活动性肺结核的重要手段,尤其是粟粒性肺结核n对潜伏性结核诊断价值不大n对肺外结核诊断价值不大14现有检测手段不能满足临床
6、要求n假阴性:免疫力低下或HIV人群,新生儿、老弱人群,药物影响;n假阳性:BCG接种人群,其它分支杆菌感染,交叉污染n肺外的结核感染无法明确诊断n抗痨治疗疗效无法评价n无法排筛结核感染,造成生物制剂或移植手术治疗后病患免疫力下降,引发结核,形成医疗事故15主要内容n结核病及其诊断现状nT-SPOT.TB的原理及其特点nT-SPOT.TB技术的应用1621世纪结核检测的重大突破n-干扰素释放实验(IGRAs)被商化(2006年),用于结核感染的检测n将结核菌特异性抗原加入含受试者的血液标本的培养基中进行孵化,如果受试者受到过MTB感染,那么被结核菌激活的记忆T细胞就会对这些特异性抗原产生反应,
7、发生增殖分化并释放-干扰素n通过定量检测-干扰素的释放水平,来诊断MTB感染nT-SPOT.TB(结核感染T细胞斑点试验)17干扰素检测阴性干扰素检测阳性TB抗原多肽T细胞活化T细胞 干扰素18基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理n结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主,结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主,结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性性T细胞细胞n当再次遇到抗原刺激时,能迅速活化增殖,释放当再次遇到抗原刺激时,能迅速活化增殖,释放r r干扰素干扰素nr r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子干扰素是
8、结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子19基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理T-SPOT.TB技术:技术:n利用结核杆菌感染者外周血单核细胞(利用结核杆菌感染者外周血单核细胞(PBMC)中存在结核特异性)中存在结核特异性T T细胞,这些淋巴细细胞,这些淋巴细胞在受到结核特异抗原刺激后分泌胞在受到结核特异抗原刺激后分泌r r干扰素而设计的干扰素而设计的T T细胞免疫斑点试验。细胞免疫斑点试验。n检测外周血中受结核特异抗原刺激释放检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r r干扰素的干扰素的T T淋巴细胞,经酶联免疫显色后,通过淋巴细胞,经酶联免疫显色后,通过ELI
9、SPOTELISPOT分析系统分析系统 对斑点进行计数,对斑点进行计数,1 1个斑点代表一个细胞,计算出抗原特异性细胞的频率。个斑点代表一个细胞,计算出抗原特异性细胞的频率。20基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理包包21基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理患者体内存在针对MTB的效应T淋巴细胞患者体内不含针对MTB的效应T淋巴细胞22T-SPOT.TB的临床意义的临床意义nT-SPOT.TB高灵敏度高灵敏度 23T-SPOT.TB的临床意义的临床意义种类种类内容摘要内容摘要受试者受试者数量数量文献发表文献发表活动性结核活动性结核/灵敏度灵敏
10、度将将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲确诊的结果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的患者。型结核杆菌感染的患者。T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为97.2%。(。(CI 90.3-99.7%)72Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis(2005);24:529-536在经培养确诊的活动性结核受试者中,在经培养确诊的活动性结核受试者中,T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为96.6%。其中。其中29例免疫力低下例免疫力低下患者,患者,T-SPOT.TB的灵
11、敏度为的灵敏度为100%87Lee et al.ERJ 2006;28:2430在确诊病例(涂片或培养阳性)和临床诊断病例在确诊病例(涂片或培养阳性)和临床诊断病例(有临床症状和抗痨治疗有效)中,(有临床症状和抗痨治疗有效)中,T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为90.3%,并且不受,并且不受CD4细胞数量影响。细胞数量影响。30Clark et al.Clin.Exp.Imm.2007;150(2):238-44在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核患者中,患者中,T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为92%。140Kang et al Che
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