（核医学）体外放射分析技术课件.ppt

1、第五章 体外放射分析技术(in vitro radioassay)Copyright 1996-98 Dale Carnegie&Associates,Inc.概 念：体外实验条件下，生物学基础：特异性结合反应，方法学基础：结合反应动力学规律，定量手段：放射测量技术。超微量定量分析特 点：灵敏度高 特异性强 精密度好 应用面广 方法简便！？超微量分析：10-910-12水平（常规生化：10-3）第一节 不同类型体外放射分析系统的共性基础 一、特异性结合反应 二、结合反应动力学规律 三、放射测量一、特异性结合反应 1、抗原抗体 2、配体受体 3、底物酶 4、激素结合蛋白 男人、女男人、女男人、女

2、人是不是特人是不是特人是不是特异性结合？异性结合？异性结合？通用术语 配体（ligand,L)结合剂（binder,B)彼此之间具有极强的识别及结合能力，能有效地排除非特异性物质对结合反应的干扰。二、结合反应动力学规律 遵守质量作用定律 L+B 适当的实验条件 LB衍生设计出两种方法学 1、竞争结合（competitive binding)过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性结合反应。2、非竞争结合（non-competitive binding)过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争的条件下发生结合反应。衍生设计出两种方法学 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）L+L*+B LB+L*B 2

3、、非竞争结合 Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag Sp.Ab1.Ag+Ab2*Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*结合在试管或包被珠上优点 竞争结合：节约结合剂用量 非竞争结合：灵敏度高，试验周期更短，误差更小。三、放射测量 直接检测技术灵敏度通常较低 采用示踪技术进行间接测量 37Bq/10-15g，提高比活度可提高灵敏度 放射性原子标记到配体或结合剂分子 何种核素？何种射线？非放射定量技术 化学发光技术 时间分辨荧光分析技术 电化学发光技术 酶定量技术：灵敏度差。微粒子酶免疫分析仪大型化学发光分析系统时间分辨荧光免疫分析仪第二节 不同类型体外放射分析系统各自特点及其技术方法一、抗原(

4、antigen)-抗体(antibody)系统 放射免疫分析（RIA)：竞争结合（Radioimmunoassay)免疫放射分析(IRMA)：非竞争结合(immunoradiometric assay)(一)基本试剂及质量要求 1、抗原：免疫用：制备抗体 标准用（标准品，校正品）：制作标准曲线，要“质同量准”标记用：2、抗体：关键试剂,有单克隆抗体、多克隆抗体。评价指标：特异性：指抗体不受交叉反应物质影响的程度。亲和力：抗体与抗原间的结合强度 滴度：能结合50%抗原所对应的抗体稀释度。3、生物样品不是试剂！抽血时间影响 是否加入酶抑制剂 储存条件4、质量控制样品（quality control

5、 sample)指已确知待测成分浓度的同质生物样品。用于监测与评价标准样品及待测样品在检测过程中引入误差的性质及程度。5、分离试剂(separation agent)（1）免疫分离试剂（2）固相分离试剂（3）生物素-亲和素分离试剂（4）吸附分离试剂（5）离子交换、层析分离及电泳分离(6):沉淀分离（二）两类分析系统的设计特点及性能比较1、放射免疫分析 竞争结合 过量的抗原+限量的抗体 温度、时间 复合物 动态平衡后分离（离心及去上清）测量沉淀的放射性，得一组剂量效应数据 数据处理：logit-log转换及线性回归法、四参数logistic拟合加样品、标记物、抗体操作温育（37 、4 、25)2

6、、免疫放射分析 在耦合上单抗1的试管里加入待测抗原或标准品 加入过量的标记抗体2 洗涤，去除未结合部分。测量，得一组数据。数据处理：logit-log转换及线性回归法、五参数logistic拟合法3、两类分析系统的比较RIAIRMA标记对象抗原抗体抗体多克隆，量少单克隆，量大方法学竞争非竞争反应动力学复杂，不稳定简单，稳定性好标准曲线负相关，量程窄正相关，量程较宽NSB影响高剂量段低剂量端误差较大较小批间比较可比性强可比性差3、两类分析系统的比较 相同点：1、免疫反应 2、检测抗原浓度 3、反映的是抗原抗体的活性 4、放射测量二、质量控制体系（一）、数据处理 1、标准样品：标准曲线制备 2、质

7、量控制样品结果获得 3、生物样品结果获得（二）质量指标 1、精密度（precision,reproducibility):分析过程中对某一特定浓度的物质在多次重复检测中所得结果的一致程度。反应误差关系精密度图 2、准确度：测的值与其标称值之间的相符程度。3、灵敏度（sensitivity):4、特异性(specificity)5、稳定性(stability)（三）质量评价 内部质量控制 外部质量控制三、以配体与受体间结合反应为基础的分析系统 受体放射分析(receptor radioassay)：检测受体本身数量及其他参数。放射受体分析(radioreceptor assay）：测受体抗体：如

8、TRAb。四、酶活性放射分析、放射酶促分析 五、蛋白结合分析第三节 临床应用 一、内分泌系统疾病 甲状腺、肾上腺、性腺、垂体、下丘脑 二、肿瘤标志物 三、神经系统、循环系统、消化系统、泌尿系统等（一）甲状腺 体内激素：T3,T4,FT3,FT4,rT3,TSH.自身抗体：TRAb,TGAb,TPOAb,TMAb 下丘脑-垂体-甲状腺轴 TRH-TSH-T3,T4甲亢（Graves Disease),G.D甲低，（碘缺乏病）检测FT3FT4TSH 治疗观察：TRAb(TSI)亦重要 慢性淋巴细胞性甲状腺炎：早期：T3,T4升高，然后降低，TSH,TGAB,TPOAB升高。甲状腺肿瘤：TG升高。全

9、身性疾病：心血管疾病、肿瘤等：T3下降，rT3、TSH升高。（二）肾上腺疾病 皮质醇增多症：ACTHCOR正常情况下有节律分泌，检测可以与单纯性肥胖区分。原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇（UFCOR)增加，肾素活性（PRA)降低。阿狄森病：COR，UFCOR降低。（三）性腺与生殖有关疾病 GnRH-FSH,LH-T,E2,P,HPL,E3,HCG.生殖生理与病理研究：避孕药、不孕不育、试管婴儿、克隆羊等研究。妊娠诊断：B-HCG可诊断早早孕。月经不调等病因诊断：肿瘤：二、肿瘤性疾病（肿瘤标志物）AFP:CEA:CA50 糖类抗原(CA系列）：CA125CA153CA199CA724 PSA 酶（NSE）,激素（B-HCG,降钙素）蛋白（铁蛋白、B2MG)三、神经系统疾病 GH检测：肢端肥大症、侏儒症 PRL检测：泌乳素瘤 TSH FSHLH等四、循环系统疾病 6-K-PGF1a,TXB2 肌钙蛋白、肌红蛋白 地戈辛、茶碱 PRA-AII-ALD系统五、消化系统疾病 乙肝病毒学检测 胃泌素瘤六、泌尿系统疾病 B2-MG:血、尿不同 ALB/UAER: