临床免疫学检验质量控制课件.ppt

1、仪器设备仪器设备 质控方法质控方法 频频 度度 失失 控控 标标 准准全自动扩增仪全自动扩增仪 仪器校验实验仪器校验实验 当仪器移动时当仪器移动时 实验失败实验失败热电偶监测温热电偶监测温度度每月一次每月一次如靶温度或温度差异超出允许范如靶温度或温度差异超出允许范围围扩增功能检测扩增功能检测每每4个月一次个月一次程序打印程序打印每次测定时每次测定时待测孔未出现扩增，检测温度打待测孔未出现扩增，检测温度打印程序不对印程序不对加样器加样器校准校准每年每年2次次不符合要求不符合要求恒温金属浴恒温金属浴温度检测温度检测每年每年4次次 不符合要求不符合要求高速冷冻离心机高速冷冻离心机温度检测温度检测每年

2、每年2次次 不符合要求不符合要求 2 2、外源性干扰因素外源性干扰因素：如标本溶血、细菌污染、储存时间过长、标本：如标本溶血、细菌污染、储存时间过长、标本凝固不全、冷冻保存标本反复冻融等。凝固不全、冷冻保存标本反复冻融等。（1 1）尽量避免溶血尽量避免溶血 红细胞破裂释放出具有过氧化物酶活性物质，增加非特异性显色而成红细胞破裂释放出具有过氧化物酶活性物质，增加非特异性显色而成假阳性。假阳性。（2 2）血清标本宜在新鲜时检测血清标本宜在新鲜时检测 如有细菌污染，菌体中可能含有内源性如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRPHRP，也会产生假阳性。，也会产生假阳性。（3 3）尽量不用抗凝血，尤其不能

3、用尽量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血肝素抗凝血。抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰也可产生假阳性。抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰也可产生假阳性。在PCR检测中：肝素是Taq酶的强抑制剂,且在其后的核酸提取步骤中很难去除，故不用。（4 4）标本在冰箱中保存不宜过长标本在冰箱中保存不宜过长 易导致血清易导致血清IgGIgG聚合，使间接法试剂本底加深。聚合，使间接法试剂本底加深。（5 5）尽量避免污染尽量避免污染基因扩增检验标本采集中的防污染基因扩增检验标本采集中的防污染 1 1、防止混入、防止混入操作者的头发、表皮细胞、痰液操作者的头发、表皮细胞、痰液等。等。2 2、玻璃器皿玻璃器皿常含有不

4、易失活的常含有不易失活的RNAaseRNAase ，使用前必须经，使用前必须经高压高压灭菌。灭菌。方法：方法：250 250 烘烤烘烤4 4小时以上或小时以上或180 180 烘烤烘烤8 8小时以上可使之小时以上可使之永久性灭活。永久性灭活。0.1%0.1%的焦碳酸二乙酯（的焦碳酸二乙酯（DEPCDEPC：是是RNAaseRNAase的强烈抑制剂的强烈抑制剂)的水溶的水溶液浸泡用于制备液浸泡用于制备RNARNA的烧杯、试管和其他用品。的烧杯、试管和其他用品。例如：临床基因扩增检验标本的处理例如：临床基因扩增检验标本的处理 体液标本体液标本：-70以下；DNADNA扩增分析样本扩增分析样本：10

5、 mmol/L Tris（三羟甲基氨基甲烷）；1 mmol/L EDTA（乙二胺四乙酸）（pH7.5-8.0）；4保存；RNARNA扩增分析样本扩增分析样本：于上述缓冲液中-80或液氮下保存；核酸的乙醇沉淀物核酸的乙醇沉淀物：-20下保存。使用GITCGITC（异硫氰酸胍盐异硫氰酸胍盐）的标本：室温下稳定约7天。4 4、建立临床实验室质量管理体系、建立临床实验室质量管理体系 最重要的一点：最重要的一点：“实验室质量管理文件实验室质量管理文件”的书写文件包含：的书写文件包含：质量手质量手册、程序性文件、作业指导书和相关表格、报告等质量记录。册、程序性文件、作业指导书和相关表格、报告等质量记录。程

6、序性文件程序性文件：包括管理性和技术性文件两种。包括管理性和技术性文件两种。作业指导书作业指导书：包括检测细则、标准操作程序包括检测细则、标准操作程序(SOP)SOP)。以文件形式存在，便于查阅，并确保得到实施。以文件形式存在，便于查阅，并确保得到实施。（二）分析中质量控制（二）分析中质量控制 1 1、如何做好免疫类质控物定值的选择？、如何做好免疫类质控物定值的选择？2 2、质控品的正确使用；质控品的正确使用；3 3、ELISAELISA、PCRPCR检测方法的注意事项；检测方法的注意事项；4 4、室内质控的实际操作步骤；、室内质控的实际操作步骤；5 5、相关室内质控的计算及评价方法。相关室内

7、质控的计算及评价方法。使用方法使用方法血清保存在血清保存在2020以下，保质期为以下，保质期为1 1年以上年以上避免避免反复冻融和重新分装质控血清样本。反复冻融和重新分装质控血清样本。使用时将血清在室温复融，待血清完全融化后平衡至室温并充分混使用时将血清在室温复融，待血清完全融化后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果当日未使用完且无污染，可保存在匀。复融后的血清如果当日未使用完且无污染，可保存在2828，限一，限一周内用完。周内用完。质控血清都经过灭活处理，质控血清都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传染性样本对但仍应按照有潜在生物传染性样本对待。待。HBsAgHBsAg、抗、抗HCVHCV

8、、抗抗HI VHI V、梅毒螺旋体抗体的质控血清梅毒螺旋体抗体的质控血清加样时按待加样时按待测病人原始样本对待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进行操作。依照试剂盒说明书进行操作。提供不同含量的质控物是为了实验室根据不提供不同含量的质控物是为了实验室根据不同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的检测值（检测值（S/COS/CO值）在值）在1.51.54 4之间。之间。HBsAg定值单位改变：2004年，WHO研制了第二代HBsAg标准物质，并将定值单位从ng/ml改为IU/ml。现1IU/ml0.5ng/ml1IU/ml0.5ng/ml10mIU/

9、ml30mIU/ml 定值未调整定值未调整 实验室可自己选择任何一个浓度作室内质控实验室可自己选择任何一个浓度作室内质控HBeAgHBeAg质控血清质控血清 定值定值 适用试剂适用试剂1NCU/ml 1NCU/ml 进口的试剂进口的试剂2NCU/ml 2NCU/ml 国产试剂国产试剂4NCU/ml 4NCU/ml 国产试剂国产试剂新的新的4NCU/ml4NCU/ml原原0.25 NCU/ml0.25 NCU/mlHBeAbHBeAb质控血清质控血清 定值定值 适用试剂适用试剂 1NCU/ml 1NCU/ml 进口的试剂进口的试剂 2NCU/ml 2NCU/ml 进口的试剂进口的试剂 4NCU/

10、ml 4NCU/ml 国产试剂国产试剂HBcAbHBcAb质控血清质控血清 定值定值 适用试剂适用试剂 1NCU/ml 1NCU/ml 进口的试剂进口的试剂 2NCU/ml 2NCU/ml 进口的试剂进口的试剂 4NCU/ml 4NCU/ml 国产试剂国产试剂 新的新的4NCU/ml4NCU/ml原原1 NCU/ml1 NCU/ml HBcHBc IgMIgM和和HAV HAV IgMIgM质控血清定值均未调整质控血清定值均未调整常见问题解答常见问题解答 1 1、HBcAbHBcAb室内质控血清和室间质量评价样本检测时是否需要室内质控血清和室间质量评价样本检测时是否需要1:301:30稀稀释？

11、释？原倍检测，原倍标准判断。原倍检测，原倍标准判断。2 2、HBc IgMHBc IgM和和HAV IgMHAV IgM质控室内质控血清和室间质量评价样本检测质控室内质控血清和室间质量评价样本检测时是否需要时是否需要1:10001:1000稀释？稀释？不需要，标本已不需要，标本已1:10001:1000稀释。稀释。如试剂为检测原倍血清的，则不能使用该室内质控血清，也不能参如试剂为检测原倍血清的，则不能使用该室内质控血清，也不能参加本中心该项目的室间质量评价。加本中心该项目的室间质量评价。现1NCU/ml0.5NCU/ml现现1NCU/ml0.5NCU/ml1NCU/ml0.5NCU/ml 1N

12、CU/ml的确定：参考国际单位定值方法，采用5种或以上试剂盒，结果63的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为1NCU/ml。现现1NCU/ml0.25NCU/ml临床考核血清盘临床考核血清盘定 义12S一个质控测定值超出 x 2 s控制限。13S一个质控测定值超出 x 3s控制限。22S两个连续的质控测定值同时超出 x+2s或 x-2s控制限。R4S同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s控制限。31S三个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。41S四个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。7X七个连续的质控测定值同时处于均值（x）的同

13、一侧。7T七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。8X八个连续的质控测定值同时处于均值（x）的同一侧。9X九个连续的质控测定值同时处于均值（x）的同一侧。10X十个连续的质控测定值同时处于均值（x）的同一侧。0 0 1 1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 1313 1414 15 16 17 18 15 16 17 18 1919 2020 21 22 23 24 25 26 21 22 23 24 25 26 2727 +3SD +3SD +2SD +2SD +1SD +1SD -1SD -1SD -2SD -2SD -3

14、SD -3SD测定批（次）测定批（次）LeveyLevey-Jennings-Jennings质控图质控图测测 定定 批批 测测 定定 结结 果果 测测 定定 批批 测测 定定 结结 果果 原始数据原始数据原始数据原始数据（IU/ML）对数值对数值（IU/ML）对数值对数值 基线测定均值基线测定均值 2.3104 标准差标准差(s)6.9104 141.6104 4.20 11.8104 4.26 151.5104 4.18 23.4104 4.53 161.1104 4.04 32.0104 4.30 171.7104 4.23 43.0104 4.48 181.0104 4.0051.71

15、04 4.23191.5104 4.18 62.6104 4.41 203.6104 4.56 73.2104 4.51 211.3104 4.11 81.9104 4.28 224.5104 4.65 92.6104 4.41 231.2104 4.08 101.6104 4.20244.0104 4.60112.9104 4.46 251.7104 4.23 122.2104 4.34 264.1104 4.61 131.9104 4.28 275.3104 4.720 0 1 1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 1313 141

16、4 15 16 17 18 15 16 17 18 1919 2020 21 22 23 24 25 26 21 22 23 24 25 26 27274.374.3710104 4+3SD+3SD3.683.6810104 4+2SD+2SD2.992.9910104 4+1SD+1SD2.32.310104 4 1.611.6110104 4-1SD-1SD0.920.9210104 4-2SD-2SD0.230.2310104 4-3SD-3SD测定批（次）测定批（次）根据上表数据得到的根据上表数据得到的Levey-Jennings质控图质控图 第1-13批，为正常的波动；第14-19批

17、，可能存在准确性问题，有系统误差存在；第20-第27批，波动幅度过大，精密度不好，存在随机误差，第27批结果甚至超出了3s，处于失控状态。质控规则 起动累积和计算的阈值（k）质控限（h）CS1.0S2.7S1.0S3.0SCSCS0.5S5.1SX1.0SX1.0SX0.5S2.7S3.0S5.1SCS1.0S2.7S 根据在不同时间10次（批）测定HBV DNA（含量为3.0104IUml）质控血清所得的均值及标准差为：X=2.5X=2.510104 4 S=0.5 S=0.5 10 104 4 kuku=3.0=3.010104 4 （kuku=x+1.0s=x+1.0s）klkl=2.0

18、=2.010104 4 （KlKl=x-1.0s=x-1.0s）h=h=1.35 1.35 10 104 4 （h=h=2.7s 2.7s ）阈值（k）和质控限（h）；X+2.7s(hu)hu=3.85 104 （hu=x+h）X+1.0s(Ku)ku上限=3.0104（ku=x+1.0s）X X=2.5104 S=0.5 104 X-1.0s(Kl)kl下限=2.0104 （Kl=x-1.0s）X-2.7s(hl)hl=1.15 104 （hl=x-h）累积和质控图质控限质控限h=1.35104（h=2.7s）测定批测定值*104di*104Csi*104结果解释测定批测定值*104di*1

19、04Csi*104结果解释12.8111.5-0.5-0.722.1122.80.80.1停止累积和计算停止累积和计算32.6132.343.30.30.3起始累积和计算起始累积和计算142.953.60.60.9153.80.80.8起始累积和计算起始累积和计算63.10.11.0163.40.41.271.9-1.1-0.1停止累积和计算停止累积和计算171.9-1.10.182.9183.80.80.992.1193.30.31.2101.8-0.2-0.2起始累积和计算起始累积和计算203.60.61.8失控失控（X=2.5=2.510104 4,s=0.5,s=0.510104 4,

20、k,ku上限上限=3.0=3.010104 4,k,k1 1下限下限=2.0=2.010104 4,质控限质控限h=h=1.351.3510104 4)即刻法质控原始数据记录表（即刻法质控原始数据记录表（资料参考资料参考）单位名称:湖北省临床检验中心 质控项目:HBsAg 试剂来源:厦门新创 试剂批号:20130205 仪器型号:美国伯乐550 使用波长:490nm 质控物来源:部临检中心 质控物批号及含量:20130201；IU/ml 2020次在控数据测定为：次在控数据测定为：X=1.76 s=0.25 cv=14.2%X=1.76 s=0.25 cv=14.2%说明：说明：1 1、S S

21、为样本测定为样本测定ODOD值，值，COCO为为Cut-offCut-off值，值，X X为均值，为均值，s s为标准差。为标准差。2 2、结果在控以、结果在控以“”“”表示；失控表示；失控“”表示。表示。3 3、失控数据及原因要填写、失控数据及原因要填写“室内质控失控报告单室内质控失控报告单”。4 4、当获取、当获取2020个在控数据以后，可将个在控数据以后，可将X=1.76X=1.76作为常用靶值，作为常用靶值，s=0.25s=0.25作作为常用控制限作图。质控规则主要采用为常用控制限作图。质控规则主要采用2 2S S、3S3S规则。规则。5 5、具体作图方法参照全国临床检验操作规程（第二

22、版）具体作图方法参照全国临床检验操作规程（第二版）P316P316页。页。1.761.511.261.012.012.262.51次次数数 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 本日期段的本日期段的X：1.78 SD：0.23 CV：15.2%S/co值值 质控规则质控规则 2s：1质控点质控点落在落在2s之外；之外；R 4s：连续连续2个质控点相差超出个质控点相差超出4s范围；范围；4 1s：连续连续4个质控点落在同一个质控点落在同一侧侧1s之外；之外；7：连续连续7个个质控点落在均值之质控点落在均

23、值之一侧；一侧；7/：连续：连续7个质控点呈连续上个质控点呈连续上升或下降；或周期升或下降；或周期性波动变化。性波动变化。临床免疫学检验室内质控失控报告单临床免疫学检验室内质控失控报告单 编号：单位名称：单位名称：日期：日期：试验项目：试验项目：方法：方法：测定仪器：测定仪器：使用波长：使用波长：试剂厂家、批号及失效期：试剂厂家、批号及失效期：质控物生产单位：质控物生产单位：批号失效期：批号失效期：失控质控物批号：失控质控物批号：当日测试质控次数：当日测试质控次数：次次 ；当日第当日第 次失控次失控失控原因：失控原因：失控处理及结果：失控处理及结果：操作者签名：操作者签名：质量负责人签名质量负

24、责人签名：5、几点说明、几点说明 1）开展室内质控的前提条件是什么？开展室内质控的前提条件是什么？试剂：同一厂家，同一批号；试剂：同一厂家，同一批号；质控物：同一含量，同一厂家，同一批号质控物：同一含量，同一厂家，同一批号 2 2）质控物更换了批号如何操作？即刻法前质控物更换了批号如何操作？即刻法前3 3个点是怎样做个点是怎样做出来的？出来的？应将应将“新新”批号质控品在批号质控品在“旧旧”批号质控品使用结束前与批号质控品使用结束前与“旧旧”批号批号质控品一起测定，质控品一起测定，“新新”批号质控品的批号质控品的3 3个在控测定数据为即刻法前个在控测定数据为即刻法前3 3个质个质控点，且控点，

25、且3 3个测定点的变异系数必须小于个测定点的变异系数必须小于30%30%，再用这，再用这3 3个点来控制个点来控制“新新”批批号质控品所发生的数据。号质控品所发生的数据。3 3）试剂更换了批号如何操作？试剂更换了批号如何操作？将将“新新”批号试剂测定的质控值标于批号试剂测定的质控值标于“旧旧”批号试剂框架图，看其有批号试剂框架图，看其有无系统误差。如没有，则继续使用原框架；如有，计算无系统误差。如没有，则继续使用原框架；如有，计算“新新”批号试剂测批号试剂测定质控值的定质控值的x x与与s s，再在原框架基础上移动横轴即可。再在原框架基础上移动横轴即可。分析比较 2 2、阴性质控常见失控原因：、阴性质控常见失控原因：以前扩增产物的“污染”；核酸提取过程中标本间的交叉“污染”；试剂的污染。附件一、试剂盒的评价方法附件一、试剂盒的评价方法附件二、附件二、酶标仪的自检酶标仪的自检方法方法