夹层杯液基抗酸杆菌检测法课件.ppt
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1、“夹层杯夹层杯”液基抗酸杆菌检测法液基抗酸杆菌检测法 湘雅医院检验科湘雅医院检验科 刘文恩刘文恩 Email:Email: 湖南省卫生厅推广计划湖南省卫生厅推广计划内内 容容 提提 要要结核病发病情况结核病发病情况1结核病的实验室诊断方法结核病的实验室诊断方法234夹层杯诊断技术夹层杯诊断技术应用夹层杯检验技术的意义应用夹层杯检验技术的意义5湘雅医院应用情况介绍湘雅医院应用情况介绍结核感染情况结核感染情况n全世界全世界1 13 3的人口感染或曾经感染过结核的人口感染或曾经感染过结核 n全球每年新发病例全球每年新发病例80080010001000万万,死亡超过死亡超过300300万。万。n我国属
2、结核病高发病率国家之一我国属结核病高发病率国家之一,患者数患者数仅次于印度,居世界第二位。仅次于印度,居世界第二位。n结核病仍然是世界卫生组织结核病仍然是世界卫生组织(WHO)(WHO)和我国和我国重点防治的重大传染性疾病。重点防治的重大传染性疾病。中国结核病感染特点中国结核病感染特点低递降率低递降率病例发病例发现率低现率低高感染率高感染率及患病及患病率率高耐药率高耐药率高死亡率高死亡率中国结核感中国结核感染的特点染的特点结核病的实验室诊断方法结核病的实验室诊断方法 细菌学检查是发现传染源的主要途径细菌学检查是发现传染源的主要途径和手段,是确定结核病诊断和治疗、和手段,是确定结核病诊断和治疗、
3、评价治疗效果的可靠标准。评价治疗效果的可靠标准。实验室诊断实验室诊断培养法培养法免疫学方法免疫学方法噬菌体法噬菌体法酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法分子生物学方法分子生物学方法液体培养系统(自动化)液体培养系统(自动化)涂片法涂片法最基本的检查方法最基本的检查方法噬菌体方法噬菌体方法 分枝杆菌的噬菌体在研究中应用已有多年的分枝杆菌的噬菌体在研究中应用已有多年的历史。近年来利用分枝杆菌噬菌体能特异性历史。近年来利用分枝杆菌噬菌体能特异性地感染分枝杆菌的特性地感染分枝杆菌的特性,开发成结核菌临床检测开发成结核菌临床检测试剂盒试剂盒,检测临床标本中是否含有结核菌活菌检测临床标本中是否含有结核菌活菌,且且
4、该技术快速、简便该技术快速、简便,将是否含有结核菌活菌的检将是否含有结核菌活菌的检出时间缩短为出时间缩短为4848h h。这是一项很有希望用于流行这是一项很有希望用于流行病学研究和实验室检测的细菌学新技术。病学研究和实验室检测的细菌学新技术。酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法 酶联免疫斑点法或称结核感染酶联免疫斑点法或称结核感染T T细胞斑点试细胞斑点试 验。是检测抗原刺激后产生细胞因子验。是检测抗原刺激后产生细胞因子主要指主要指-IFN IFN 的外周血单个核细胞数的外周血单个核细胞数,根据斑点的数量来确根据斑点的数量来确定细胞分泌细胞因子的情况定细胞分泌细胞因子的情况,从单细胞水平评价细从单细胞
5、水平评价细胞免疫功能胞免疫功能,从而判断结核分枝杆菌感染的情况。从而判断结核分枝杆菌感染的情况。液体培养系统液体培养系统 是将一种是将一种O O2 2敏感的荧光钌复合物加入分枝杆敏感的荧光钌复合物加入分枝杆菌生长指示管菌生长指示管(MGIT)(MGIT)液体培养基中作为生长指试液体培养基中作为生长指试剂剂,试管底部的荧光复合物与氧气结合时处于淬试管底部的荧光复合物与氧气结合时处于淬灭状态灭状态,结核菌生长时结核菌生长时,氧气逐渐减少氧气逐渐减少,荧光复荧光复合物就发出荧光而被检测到。自动化的合物就发出荧光而被检测到。自动化的MGIT MGIT 还还可加入临界浓度的抗结核药物进行药敏分析。该可加
6、入临界浓度的抗结核药物进行药敏分析。该方法操作简便,阳性标本检出时间平均为方法操作简便,阳性标本检出时间平均为9 9天。天。但价格昂贵。但价格昂贵。涂片法的优缺点涂片法的优缺点n包括:直接涂片法、厚涂法、离心包括:直接涂片法、厚涂法、离心浓缩集菌法、漂浮集菌法等浓缩集菌法、漂浮集菌法等n优点:简便易行优点:简便易行,成本低廉成本低廉,准确性准确性较高较高n缺点:阳性率低,效果不理想。缺点:阳性率低,效果不理想。夹层杯检测技术夹层杯检测技术 运用夹层杯技术,通过标本消化液运用夹层杯技术,通过标本消化液消化后,选择有效成分离心附着于透明消化后,选择有效成分离心附着于透明高分子薄片上,经过自动或手工
7、染色,高分子薄片上,经过自动或手工染色,将完成染色的薄片用取片针取出,人工将完成染色的薄片用取片针取出,人工或计算机辅助阅片。或计算机辅助阅片。检测原理检测原理检测流程示意检测流程示意图图主要设备及相关材料主要设备及相关材料 经过消化后的标本通过滤过式夹层杯经过消化后的标本通过滤过式夹层杯过滤,将抗酸杆菌阻拦在纳米硅介质微孔过滤,将抗酸杆菌阻拦在纳米硅介质微孔滤膜膜片上,直接染色。取出膜片置于滤膜膜片上,直接染色。取出膜片置于滴有光媒介液体的阅片夹中可以直接通滴有光媒介液体的阅片夹中可以直接通过普通显微镜进行观察。过普通显微镜进行观察。检测原理检测原理检测流程示意检测流程示意图图主要设备及相关
8、材料主要设备及相关材料夹层杯诊断技术的优点夹层杯诊断技术的优点阳性率阳性率高高背景背景清晰清晰,易于观察,易于观察易于易于标准化标准化检测速度检测速度快快生物安全性生物安全性好好夹层杯诊断夹层杯诊断技术的优点技术的优点阳性率高阳性率高 液基抗酸杆菌集菌制片技术在标本中液基抗酸杆菌集菌制片技术在标本中加入消化液加入消化液,有助于降解标本中的蛋白成有助于降解标本中的蛋白成分分,使标本中的结核菌分散出来,且所用使标本中的结核菌分散出来,且所用的标本量明显大于直接涂片法,故大大提的标本量明显大于直接涂片法,故大大提高了阳性率。高了阳性率。背景清晰,易于观察背景清晰,易于观察 由于蛋白分解由于蛋白分解,
9、避免蛋白成分的聚集避免蛋白成分的聚集,从而抗酸从而抗酸杆菌分布均匀杆菌分布均匀,而且染色后背景清晰而且染色后背景清晰,很容易观察到很容易观察到抗酸杆菌的存在。抗酸杆菌的存在。易于标准化易于标准化 夹层杯诊断技术整个实验过程均可执行标夹层杯诊断技术整个实验过程均可执行标准化准化:标本体积定量标本体积定量;标本收集保存条件可控制标本收集保存条件可控制;染色温度、时间可控制染色温度、时间可控制;夹层片的面积是固定夹层片的面积是固定的的,通过离心后细菌均匀沉积在夹层片上通过离心后细菌均匀沉积在夹层片上,油油镜每个视野的实际面积也是可以计算的。通过镜每个视野的实际面积也是可以计算的。通过计算机处理后计算
10、机处理后,可准确计算每毫升痰液中抗酸可准确计算每毫升痰液中抗酸杆菌量。杆菌量。检测速度快检测速度快液基结核菌集菌制片技术液基结核菌集菌制片技术,单台单台TQ-12TQ-12离心涂片机离心涂片机,单人每日可完成单人每日可完成100100例标例标本制片本制片,阅片。而滤过式夹层杯的检测阅片。而滤过式夹层杯的检测速度更快捷,十分钟就可检测速度更快捷,十分钟就可检测5 5份标本。份标本。生物安全性好生物安全性好 整个操作均在容器中进行,并且进行整个操作均在容器中进行,并且进行了灭活处理,安全性很高。标本经树胶封了灭活处理,安全性很高。标本经树胶封存于载玻片上存于载玻片上,显微镜无须与含菌面接触显微镜无
11、须与含菌面接触,检验人员降低了实验室感染风险。检验人员降低了实验室感染风险。应用夹层杯检验技术的意义应用夹层杯检验技术的意义解决结核杆菌痰检长期存在的技术问题解决结核杆菌痰检长期存在的技术问题1 1细胞学检验方法细胞学检验方法解决抗酸杆菌痰检长期解决抗酸杆菌痰检长期存在的技术问题存在的技术问题存在的存在的问题问题阳性率偏低阳性率偏低安全性安全性标准化标准化其它类型标本其它类型标本工作效率工作效率其它微生物其它微生物检验项目检验项目阳性率偏低问题阳性率偏低问题 痰标本抗酸杆菌检出率低,这是长期困扰痰标本抗酸杆菌检出率低,这是长期困扰检验科的难题,在各级医院都存在临床明确诊检验科的难题,在各级医院
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