实验动物学课45课件.ppt

1、 普通动物 清洁动物 SPF动物 无菌动物及悉生动物第四章第四章 实验动物微生物学分类实验动物微生物学分类 1 1普通动物普通动物conventional animal，CV；一级动物；一级动物 指不携带主要人兽共患病病原和动物烈性传染病病原的动物。仅可用于示教、科研的探索方法、预试之用。新国标中大鼠、小鼠无此级别。2 2清洁动物清洁动物clean animal，CL；二级动物；二级动物 指除普通级动物应排除的病原外，不携带对动物危指除普通级动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原的动物。害大和对科学研究干扰大的病原的动物。饲养于温、湿度恒定的屏障系统中，饲养于温、湿度恒

2、定的屏障系统中，饲料、垫料、笼具等都要经过消毒处理，饲料、垫料、笼具等都要经过消毒处理，饮水应用高压灭菌或用饮水应用高压灭菌或用pHpH为为2.52.52.82.8的酸化水，的酸化水，工作人员应换灭菌工作服、鞋、帽、口罩等进入动物工作人员应换灭菌工作服、鞋、帽、口罩等进入动物室进行操作。室进行操作。国际上此级动物仅适合于短期或部分科研实验；我国国际上此级动物仅适合于短期或部分科研实验；我国作为科研工作的主要要求的标准实验动物。作为科研工作的主要要求的标准实验动物。3 3无特定病原体动物无特定病原体动物specific pathogen free animal，SPF；三级动物；三级动物 指除普

3、通、清洁级动物应排除的病原外，还不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的动物。国际上公认SPF动物适用于所有科研实验，是目前国际标准级别的实验动物。各种疫苗生产所采用的动物应为SPF级动物。4 4无菌动物无菌动物germ free animal，GF；四级动物；四级动物 指无可检出一切生命体的动物。种种 类类 培育者及育成时间培育者及育成时间小小 鼠鼠 Pleasants,1959Pleasants,1959大鼠大鼠 Reyniers1946Reyniers1946；Gustafsson,1948Gustafsson,1948豚鼠豚鼠 Miyakawa1958;Tanami,19

4、59;Miyakawa1958;Tanami,1959;兔兔 Wostmann1959;Luckey,1963Wostmann1959;Luckey,1963狗狗 Glimsedt,1946Glimsedt,1946猫猫 Bleby,1969Bleby,1969山羊、绵羊山羊、绵羊 Smith,1961,1966Smith,1961,1966猪猪 Whitenair,1960Whitenair,1960马马 DrummondDrummond等等,1973,1973猴猴 Reyniers,1942Reyniers,1942鸡鸡 Reyniers,1943Reyniers,1943鹌鹑鹌鹑 Woo

5、dardWoodard等等,1965;Miles,1966,1965;Miles,19664.1 4.1 无菌动物的特点无菌动物的特点 （一）形态学改变（一）形态学改变1 1消化系统消化系统 主要变化在肠道上。肠道肌层薄，更为特异的是盲肠肥大 2 2血液循环系统血液循环系统 无菌动物白细胞数值恒定 3 3免疫系统免疫系统 免疫功能基本上处于原始状态4 4泌尿系统泌尿系统 肾脏较小，如无菌豚鼠。(二二)生理学改变生理学改变1免疫功能 2生长率 3生殖 4代谢5营养4.2 4.2 无菌动物技术无菌动物技术 无菌动物的理论基础和实践依据在于胎盘屏障和屏障观念，根据这个基础开展了无菌动物工作。在无菌条

6、件下取仔，一切操作在无菌隔离器内进行。临产前动物麻醉或颈椎脱臼处死临产前动物麻醉或颈椎脱臼处死浸泡在浸泡在3737灭菌液中，送进无菌室（或无菌隔离灭菌液中，送进无菌室（或无菌隔离器）器）剖腹，切除带胎子宫（子宫内首先应无菌）剖腹，切除带胎子宫（子宫内首先应无菌）浸入消毒液浸入消毒液输送到另一只隔离器中，切开子宫取胎输送到另一只隔离器中，切开子宫取胎仔体并断脐（电刀切断）仔体并断脐（电刀切断）隔离器内人工喂乳或其他品系的无菌动物作保姆隔离器内人工喂乳或其他品系的无菌动物作保姆代养代养（1 1）哺乳类无菌动物技术）哺乳类无菌动物技术小动物小动物-子宫切除子宫切除大动物大动物-子宫切开子宫切开取仔程

7、序如下：取仔程序如下：1.1.腹部剃毛或用硫化钡脱毛剂脱毛腹部剃毛或用硫化钡脱毛剂脱毛2.2.处死妊娠雌鼠处死妊娠雌鼠3.3.浸泡于浸泡于3737灭菌液中灭菌液中2min2min4.4.固定，并于腹部粘上灭菌胶布固定，并于腹部粘上灭菌胶布5.5.剖腹剖腹6.6.取出子宫取出子宫7.7.剪开子宫壁，取出胎鼠，呼吸正常时切断脐带剪开子宫壁，取出胎鼠，呼吸正常时切断脐带8.8.分开胎盘，放到代乳母鼠身边分开胎盘，放到代乳母鼠身边9.9.剖腹取胎的时限。小鼠、大鼠：剖腹取胎的时限。小鼠、大鼠：9 910min10min。豚鼠：。豚鼠：5min5min（2 2）鸟类无菌动物技术）鸟类无菌动物技术常用鹌鹑

8、，也用鸡。常用鹌鹑，也用鸡。无菌鸡，要选育无白血病的鸡群。无菌鸡，要选育无白血病的鸡群。培育关键在于消毒卵壳：培育关键在于消毒卵壳：首先选外壳干净的受精卵首先选外壳干净的受精卵将受精卵放到湿润剂中。将受精卵放到湿润剂中。再放入再放入2 2升汞中浸升汞中浸12min12min将浸泡过的受精卵放入隔离器中孵育。将浸泡过的受精卵放入隔离器中孵育。建立无白血病鸡群先从母鸡选起。建立无白血病鸡群先从母鸡选起。5.5.悉生动物悉生动物gnotobiotic animal，GN；四级动物；四级动物又称已知菌（丛）动物又称已知菌（丛）动物（animal with known bacterialuflora）。

9、）。饲养于隔离系统。饲养于隔离系统。向无菌动物体内植入一种或几种已知细菌。向无菌动物体内植入一种或几种已知细菌。单菌（单菌（monoxenicmonoxenic）、双菌（）、双菌（dixeniedixenie）、三菌）、三菌（trixenietrixenie）、多菌（）、多菌（polyxeniepolyxenie）。）。更强的生活力和抵抗力，更易于饲养管理更强的生活力和抵抗力，更易于饲养管理6.洁净动物与普通动物的比较等等 级级饲养环境饲养环境空气洁净空气洁净度度要要 求求无菌动物无菌动物(四级四级)隔离隔离100级级以封闭的无菌技术取得，用现有方法不以封闭的无菌技术取得，用现有方法不能检出任

10、何微生物、寄生虫等任何能检出任何微生物、寄生虫等任何生命体的动物生命体的动物悉生动物悉生动物(四级四级)隔离隔离100级级经特殊饲养，确知所带微生物菌丛等寄经特殊饲养，确知所带微生物菌丛等寄生物的动物。生物的动物。SPF动物动物(三级三级)屏障屏障l万级万级无特定致病性微生物和寄生虫，确知不无特定致病性微生物和寄生虫，确知不带有病原微生物的动物带有病原微生物的动物清洁动物清洁动物(二级二级)屏障屏障10万级万级不携带对动物危害大和对科研干扰大病不携带对动物危害大和对科研干扰大病原，确知不带有病原微生物的动物原，确知不带有病原微生物的动物普通动物普通动物(级级)开放开放不带主要人畜共患和动物烈性

11、传染病原不带主要人畜共患和动物烈性传染病原体，对微生物带有情况不明确的动体，对微生物带有情况不明确的动物物对科研结果影响的比较对科研结果影响的比较 实验项目实验项目 无菌动物无菌动物 无特殊病原体动物无特殊病原体动物 普通动物普通动物传染病传染病 无无 无无 有或可能有有或可能有寄生虫寄生虫 无无 无无 有或可能有有或可能有实验结果实验结果 明确明确 明确明确 有疑问有疑问应用动物数应用动物数 少数少数 少数少数 多或大量多或大量统计价值统计价值 很好很好 可能好可能好 不准确不准确长期实验长期实验 可能好可能好 可能好可能好 困难困难自然死亡率自然死亡率 很少很少 少少 高高长期实验存活率长

12、期实验存活率 约约 100 约约 90 约约 40实验的准确设计实验的准确设计 可能可能 可能可能 不可能不可能实验结果讨论价值实验结果讨论价值 高高 中中 低低第五章第五章 实验动物的环境与设施实验动物的环境与设施 主要介绍了各种环境因素对实验动主要介绍了各种环境因素对实验动物和动物实验的影响，实验动物设施物和动物实验的影响，实验动物设施的分类和实验动物设施的组成，重点的分类和实验动物设施的组成，重点讨论开放环境、屏障环境和隔离环境讨论开放环境、屏障环境和隔离环境的结构特点和实验动物设施使用特点，的结构特点和实验动物设施使用特点，以及生物安全和感染实验设施的使用以及生物安全和感染实验设施的使

13、用特点。特点。第一节第一节 环境因素对实验动物的影响环境因素对实验动物的影响一、环境因素的重要性一、环境因素的重要性动物实验处理的反应可用下式表示：R=（A十十BC）DE式中：R-实验动物的总反应；A-实验动物种的共同反应；B-动物品种及品系特有的反应；C-动物个体反应（个体差异）；D-环境的影响（包括实验处理），E-实验误差。实验动物环境因素：实验动物环境因素：自然因素（包括物理、化学和生物学因素）人为因素二、环境因素对实验动物动物实验结果的影响二、环境因素对实验动物动物实验结果的影响 气候因素（温度、湿度、气流速度等）理化因素（照明、声音、气味等）居住因素（房屋、笼具、垫料等）同种动物间因

14、素（饲养密度、社会地位、势力范围等）一）一）温度温度 温度的影响可表现在以下几个方面：1.动物的新陈代谢 2.动物的脏器重量 3.动物的生殖机能 4.动物机体的抵抗力 5.动物实验的反应性 屏障环境内啮齿类动物实验设施（设备）屏障环境内啮齿类动物实验设施（设备）内温度应控制在内温度应控制在20202626 二）二）湿度湿度 动物在相对湿度为动物在相对湿度为40407070之间生活最适应之间生活最适应,以以50505 5为最佳。为最佳。对动物的散热有显著影响 对病原微生物和寄生虫的生长繁殖与发育影响 导致动物一些疾病的发生 粉尘的影响三）三）气流、气流速度及换气次数气流、气流速度及换气次数 实验

15、动物的体表面积与单位体重的比值较大 气流速度 控制在0.1m/s-0.2m/s 动物室内气流方向 清洁走廊饲育室污染走廊设施外 换气次数，一般屏障设施以1020次/h为宜 四)噪声 来源：外界传入；室内机器产生，如空调机、排风机等；动物自身产生，如跑动、争斗、鸣叫等。环境噪声的影响环境噪声的影响 影响动物的繁殖生长 影响动物的神经系统 影响动物其他生理状态噪声应控制在60dB以下 五）五）照明照明 照明因素包括照度、波长和照明时间照明因素包括照度、波长和照明时间 1.照度对动物的角膜会产生影响 150-300lx2.照明时间影响动物的繁殖 12:12 10:143.光的波长也影响动物的生长和繁

16、殖 六）空气洁净度 动物饲养室空气中颗粒物污染的来源：1.室外空气未经过滤处理直接进入；2.动物体表被毛、皮屑、饲料和垫料等。5m5m以下的粉尘以下的粉尘 我们国家洁净室的标准是洁净厂房设计规范（GB50073-2001），标准中规定的空气洁净度等级等同采用国际标准ISO1466-1中的有关规定。洁净室及洁净区空气中悬浮粒子洁净度等级见下表：七）七）有害气体有害气体 主要有害气体：氨、甲基硫醇、硫化氢、氨、甲基硫醇、硫化氢、硫化甲基、甲基丁烷、三甲胺、苯乙烯、乙醛和硫化二甲基 信息素（pheromone）或叫引物信息素（primer pheromone）Lee-Boot效应，是指小鼠群养时常常

17、发生假性妊娠和发情周期混乱的现象。Whitten效应，是指由于雄性动物分泌的信息素促使雌性动物的发情周期出现有规律的现象。Bruce效应，是指怀孕初期的雌性小鼠与交配对象以外的雄性接近或同居时产生的中止妊娠反应。八）八）动物设施建筑动物设施建筑 建筑物之间应保持一定的距离，以防疾病的传播 动物居住的建筑物与周围社会的关系 九）九）动物设施设备动物设施设备 空调系统 通风系统 给排水系统 照明系统 清洗消毒系统 十）十）笼具和铺垫物笼具和铺垫物 饲养笼具的材质和构造 垫料 十一）十一）饲养密度饲养密度 动物在一定环境条件下（一定的空间、定量的食物）饲养时，群体增殖的情况呈S型曲线。十二）十二）社

18、会因素和势力范围社会因素和势力范围 动物的社会地位大致分为直线型与专制型。直线型直线型指可用直线表示优劣关系的类型。第1位的为首领，可统治第2位，第2位统治第3位，以此类推。猴、兔、鸡属此类。专制型专制型指一个动物为首领，首领以下的动物之间不发生争斗。这种类型存在于小鼠、大鼠、猫之间。动物社会结构中的势力范围 势力范围势力范围是指某个个体保卫某个地区不允许其他个体侵入。即使是地位低劣的个体，出自保卫自己势力范围的目的，面对最强的个体也有防卫的习性。第二节第二节 实验动物的设施分类实验动物的设施分类 一、实验动物设施的概念一、实验动物设施的概念 实验动物设施是指实验动物和动物实验设施的总和。一个

19、设施可以大到动物中心或生产繁殖机构，小至某一实验动物室。总体的原则是提供实验动物最适宜的环境，保障实验动物的质量和为动物实验的准确性提供可靠保障。二、二、实验动物设施分类实验动物设施分类（一）、按其功能分类（一）、按其功能分类 1动物生产设施动物生产设施（Animal Production Facility）指用于实验动物的饲育繁殖、生产的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。2动物实验设施动物实验设施（Animal Experimental Facility）指用于研究、试验、教学、生物制品、药品生产、检定等为目的进行实验动物饲育、试验的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。3特殊动物实验设施特

20、殊动物实验设施（Special Animal Experimental Facility）指用于感染、毒理动物实验、病原微生物和细胞培养、重组DNA、转基因动物实验、克隆和胚胎干细胞、细胞实验和应用特殊化学物质等进行实验的建筑物、设备以及包括运营管理在内的总和。（二）按微生物控制程度分类（二）按微生物控制程度分类 1普通环境普通环境（Open System）直接与外界大气相通，是饲养普通级实验动物的场所。饲料、饮水要符合卫生要求，垫料要消毒，饲养室内要有防鼠、防昆虫等措施。2屏障环境屏障环境（Barrier System）与外界隔离，是饲养清洁级动物和SPF级动物的设施。进入实验动物生存环境的

21、空气须经过滤净化处理，其洁净度相对于10000级，进入屏障内的人、动物和物品如饲料、水、垫料及实验用品等均需有严格的微生物控制。3 3隔离环境隔离环境(Isolation System)与外界环境完全隔离的环境内。工作人员通过隔离器上组装的无菌手套进行操作，不直接接触动物。饲料、饮水，垫料，笼具等都应高压、高温灭菌。进入隔离器内的一切物品均需通过传递舱灭菌。适合饲养SPF、无菌动物、动物的保种育种或同等级的动物实验。（三）按设施的平面布局分类（三）按设施的平面布局分类 1 1无走廊式无走廊式(No Corridors)用于饲养品种单一或以实验为主的设施。一般饲养普通级动物 2 2单走廊式（单走

22、廊式（Single Corridors）一般的研究机构在进行中、短期动物实验。相对于双走廊其优点是占用空间小，设施利用率较高，维护费用低。缺点为清洁笼具和污染材料之间常常存在污染的危险，走廊相对拥挤。3 3 双走廊式双走廊式（Double Corridors）常用的一种实验动物屏障设施类型。可以有效分割为清洁区和污染区。作为屏障设施使用，比较容易控制微生物污染。缺点是有效利用面积减少。4 4三走廊式三走廊式（Three CorridorsThree Corridors）三走廊式压力梯度从中间的洁净走廊、前室、动物饲养室、污物走廊逐渐降低，是目前常用的动物实验设施。第三节第三节 实验动物设施的建

23、筑要求实验动物设施的建筑要求 一、选一、选 址址 为新建实验动物设施选址，可参照GBJ7384洁净厂房的规范要求。考虑外部环境如下因素：（1）大气含尘浓度及化学污染程度低，自然环境好的区域。（2）空气含菌水平低。（3）应能保证水电供应，并应有道路到达，交通方便。（4）应远离有严重震动和噪声干扰的铁路、码头、飞机场、交通要道。（5）设施应布置在院区内环境清洁、人流、货流不穿越或少穿越的地段。（6）选址应避开自然疫源地。二、设施面积的分配和布局原则二、设施面积的分配和布局原则（1）繁育饲养区和动物实验区分开，各成独立系统，专区（室）专用。（2）在规模较大的实验动物楼，从微生物控制及实验动物使用管理

24、方便考虑，应将低级别实验动物与高级别动物所在的楼层尽量分开。（3）同等级、且性情亦较温顺的动物可安排在同一套设施或同一楼层内，但对环境易造成较大影响的动物，如犬会制造巨大噪声，应作特别处理。(4)洁净设施布局设计时，应保证人员、物品和净化空气单向移动，以避免交叉污染。(5)实施布局要方便日常工作和实验操作，并有足够的空间放置必需物品。三、实验动物设施的布局三、实验动物设施的布局 （一）区域布局（一）区域布局 1 1前区的设置前区的设置 包括办公室、维修室、库房、饲料室和一般走廊。2 2饲育区的设置饲育区的设置 （1 1）繁育、生产区）繁育、生产区。包括隔离检疫室、缓冲间、育种室、扩大群饲育室、

25、生产群饲育室、待发室、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物走廊。（2 2）动物实验区）动物实验区。包括缓冲间、实验饲育间、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物走廊。（3 3）辅助区）辅助区。包括仓库、洗刷间、废弃物品存放处理间（设备）、密闭式实验动物尸体冷藏存放间（设备）、机械设备室、沐浴间、工作人员休息室。（二）其它设施设置（二）其它设施设置 屏障环境和隔离环境均应在压力变化相交接处设有缓冲设置。动物实验区的设施应与饲养繁育系统分开设置。有关放射性实验操作应参照GB4792实施。带烈性传染性、致癌、使用剧毒物质的动物实验，均应在负压隔离设施或有严格防护的设备内操作。排出气体和废物须经无害化处理 应体现“

26、人、动物、环境”的三保护原则。（三）各个分区设施的功能（三）各个分区设施的功能 1饲养室 应分设有育种室、扩大群饲育室、生产群饲育室、待发室等。2隔离检疫室 外部引进的动物需隔离1-2周。3动物实验室 供作动物实验用，如手术室，实验处理室，实验观察室，动物监测室等。4洗刷消毒室 一般使用双扉高压灭菌器，其洗刷消毒后室与动物室相连，物品经灭菌后直接移入屏障5库房 屏障设施内应设清洁库房。6工作人员用房 包括办公室、休息室、淋浴室、厕所等。屏障设施内一般不设卫生间以减少废物。7废物处理间 污染垫料应密封运送至专门堆集场所，做到日清日洗。尸体装于塑料袋中密封，可先暂存在冰柜内，然后送焚尸炉焚烧。（四

27、）屏障环境的人流和物流控制（四）屏障环境的人流和物流控制 洁净区压力梯度一般遵守：洁净区压力梯度一般遵守：洁净走廊洁净走廊 动物生产（实验）区动物生产（实验）区 非洁净区非洁净区人的移动路向：人的移动路向：更衣更衣淋浴淋浴二次更衣二次更衣清洁走廊清洁走廊饲养室或饲养室或动物实验室动物实验室污染走廊污染走廊外部区域。外部区域。物品的移动路向：物品的移动路向：物品物品高压蒸汽消毒锅（已包装的消毒物品可高压蒸汽消毒锅（已包装的消毒物品可经传递窗，笼具经泡有消毒液的渡槽）经传递窗，笼具经泡有消毒液的渡槽）清洁清洁准备室准备室清洁物品储存室清洁物品储存室饲养室或动物实验饲养室或动物实验室室污物走廊污物走

28、廊外部区域。外部区域。实验动物的移动路向：实验动物的移动路向：外来实验动物外来实验动物传递窗传递窗检疫室（经检疫后）检疫室（经检疫后）清洁走廊清洁走廊饲养室或动物实验室饲养室或动物实验室污染走廊污染走廊（包装）（包装）外部区域。外部区域。屏障设施内必须安装空气净化器初、中效过滤器控温、控湿装置每个饲养室设立独立的高效过滤器将调控好温、湿度的洁净空气送入动物室。室内排风口也应装有初效过滤器。四、实验动物设施的建筑要求四、实验动物设施的建筑要求 （一）房间面积（一）房间面积 地面面积：15-20m2 最小宽度：3m左右 天花板高度：至少2.5m。墙、地表面平滑、耐磨、耐压、耐酸、碱、盐、化学溶剂,

29、无渗漏，自流平厚3mm,有一定弹性,使用年限为15 年。（二）地面（二）地面 拐角处做成圆角弧面设计。地面可采用聚氨酯自流地坪，司米克地板砖拼缝镶嵌深色环氧树脂涂料，高级环氧树脂加优质固化剂自流坪。（三）墙面（三）墙面 外墙首选混凝土、钢筋和砖（四）天花板（四）天花板 优质彩钢板制成。金属圆踢脚，隔墙与隔墙之间、隔墙与吊顶之间均有金属圆弧连接件。（五）无菌水池和地漏（五）无菌水池和地漏 设不锈钢密封式水池,防污染。地漏为不锈钢特制,可水封,防堵,防回水、回气。（六）门和窗（六）门和窗 门一般情况向内开 在屏障内，门向压力高的方向开（即正压）上面设计观察窗 门宽不小于1m 门采用特制铝合金净化门

30、型材制作,耐腐蚀,易清洗。不设门槛,门下装密封条,气密性好,安装闭门器。屏障区一般不设窗。（七）传递窗和内走廊（七）传递窗和内走廊 传递窗为不锈钢板制作,耐消毒液,内设4个紫外线灯,双门互锁。走廊宽度不应小于1.5m。（八）药液渡槽（八）药液渡槽 用3mm 厚不锈钢制作,下设排水开关,上盖可用水密封。（九）配电及通讯 设施内的配电线暗装,由非洁净区进入洁净区的电气管线、管口应严格密封。电源插座带盖,开关均有防水膜。（十）野鸟和昆虫控制 在门、窗等部位，要有防止野鸟和昆虫进入的设施。包括纱窗、过滤器或风门片等,同时在管道系统使用风门片或隔栅，在地面排水口覆盖纱网。（十一）噪声控制 实验动物对声波

31、的灵敏度和范围比人高,噪音引起动物躁动和惊恐,影响正常生活规律,影响实验结果。因此,一是防止外界干扰,远离噪音源;二是对空调及送风设备进行隔音和消音处理。第四节 实验动物与动物实验环境国家标准 一、国家标准的制定一、国家标准的制定 技术监督局1994年批准颁布了动物实验环境及设施标准（GB/T14925-94）。2001年又进行了重新修订。一、空气净化系统设备第五节第五节 动物设施中的主要设备动物设施中的主要设备 二、电源、照明、通讯设备 三、安全和报警系统 四、消毒与灭菌设备（一）压力蒸气灭菌器（二）渡槽（三）无菌水生产系统 五、微生物控制设备与饲养设备（一）隔离器（二）独立通风换气笼盒（I

32、ndividually Ventilated Cages，IVC）（三）层流架（柜）（四）生物安全柜 第六节第六节 生物危害特殊实验动物设施生物危害特殊实验动物设施 生物危害的种类包括：生物危害的种类包括：实验动物所产生的危害 病原微生物感染所造成的危害 转基因、克隆和重组基因等的危害 生物危害特殊实验设施目的就是最大限度减少对人类的侵害。一、感染实验微生物危害的分级一、感染实验微生物危害的分级 1 1、生物危害、生物危害1 1级级：对个体和群体危害程度低，不能对健康成年人和动物致病的微生物。2 2、生物危害、生物危害2 2级级：对个体危害程度为中度，对群体危害较低，主要通过皮肤、黏膜、消化道

33、传播。对人和动物有致病性，但对实验人员、动物和环境不会造成严重危害的动物致病微生物，具有有效的预防和治疗措施。3 3、生物危害、生物危害3 3级级：对个体危害程度高，对群体危害程度较高。能通过气溶胶传播，引起严重或致死性疫病，导致严重经济损失的动物致病微生物，或外来的动物致病微生物。对人引发的疾病具有有效的预防和治疗措施。4 4、生物危害、生物危害4 4级级：对个体和群体的危害程度高，通常引起严重疫病的、暂无有效预防和治疗措施的动物致病微生物。通过气溶胶传播、高度传染性、致死性的动物致病微生物；或未知的危险的动物致病微生物。二、生物安全实验室的设施和使用要求二、生物安全实验室的设施和使用要求

34、1、生物安全-1级实验室（BSL-1）一级生物安全水平（Basic Laboratory-Biosafety Level，BSL-1）是指能够安全操作，对实验室工作人员和动物无明显致病性的，对环境危害程度微小的，特性清楚的病原微生物的生物安全水平，也称基础生物实验室。实验室无需与一般区域隔离。设施要求如下：实验室有控制进出的门；每个实验室应有一个洗手池；室内装饰便于打扫卫生，不用地毯和垫子；工作台面不漏水、耐酸碱和中等热度、抗化学物质的腐蚀；实验室内器具安放稳妥,器具之间留有一定的距离,方便清扫；实验室的窗户,必须安纱窗。2、生物安全度-2实验室（BSL-2）二级生物安全水平（Basic La

35、boratory-Biosafety Level,BSL-2）是指能够安全操作，对实验室工作人员和动物致病性低的，对环境有轻微危害的病原微生物的生物安全水平。也称为基础生物实验室。实验室无需与一般区域隔离。要求设施门要加锁，限制人员进入；实验设施地点离开公共区每个实验室设一个洗手池；要求设置非手动或自动开关；建立冲洗眼睛的紧急救护点。级生物安全柜：能产生传染物外溢、溅出和气溶胶的操作,包括离心、研磨、搅拌、强力震荡混合、超声波破碎、打开装有传染性材料的容器、动物鼻腔注射、收取感染动物和孵化卵的组织等（三）生物安全度（三）生物安全度-3-3实验室（实验室（BSL-3BSL-3）三级生物安全水平（

36、Basic Laboratory-Biosafety Level,BSL-3）是指能够安全地从事来自国内和国外的，可能通过呼吸道感染，引起严重或致死性疾病的病原微生物工作的生物安全水平。BSL-3BSL-3实验室设施的要求：实验室设施的要求：1建筑结构和平面布局 进入设施的通道设带闭门器的双扇门,更衣室（一更室-清洁区、二更室-半污染区），后室或称缓冲室（半污染区），实验室。实验室应有安全通道和紧急出口，并有明显标识半污染区与清洁区之间必须设置传递窗。2密闭性和内表面 一切设施、设备外表无毛刺、无锐利棱角，尽量减少水平表面面积，便于清洁和消毒。各种管道通过的孔洞必须密封。墙和顶棚的表面要光滑，

37、不刺眼、不积尘、不受化学物和常用消毒剂的腐蚀，无渗水、不凝集蒸气。3消毒灭菌设施 必须安装双扉式高压蒸汽灭菌器4净化空调 采用负压单向流全新风净化空调系统。污染区和半污染区不允许安装暖气、分体空调，不可用电风扇。温度23.020.0、相对湿度40%70%。室内噪声不超过60dB。气流方向由清洁区向污染区，由低污染区流向高污染区。供气需过滤,排出的气体必须经过至少两级过滤排放，不允许在任何区域循环使用。室内洁净度高于万级。5水的净化处理6污染物和废弃物处理 7实验室监控系统 8备用电源 9通讯(四四)生物安全度生物安全度-4-4实验室实验室(BSL-4)(BSL-4)四级生物安全水平是指能够安全

38、地从事来自国内和国外的，能通过气溶胶传播，实验室感染高度危险，严重危害人、动物生命和环境的、没有特效预防和治疗方法的微生物工作的生物安全水平。BSL-4（P4）级实验室也称为最高级安全实验室。适用于从事未知的或能引起致命疾病的，对个人有高度风险的病原体的工作。采用独立的建筑物，内为隔离区和外部隔断的构造。根据相应的隔离等级使室内保持负压。在密封型（即级）生物安全柜内进行实验，工作人员需穿上通过维持生命装置换气的整体式正压个人防护服。实验室设施的要求 BSL-4实验室有两种类型：1.1.安全柜型安全柜型，即所有病原微生物的操作均在级生物安全柜内或隔离器进行；2.2.防护服型防护服型，即工作人员穿

39、正压防护服工作，操作可在级生物安全柜内进行。也可以在同一设施内穿正压防护服，并使用级生物安全柜。三、特殊动物实验设施的建筑要求三、特殊动物实验设施的建筑要求 （一）空气调节系统的建筑要求（二）给、排水系统的建筑要求（三）电气系统的建筑要求 第七节第七节 放放(辐辐)射污染动物实验设施射污染动物实验设施 在设计、建筑放射（辐射）污染防护动物实验设施时，必须严格遵守GB792-84GB792-84放射卫生防护基本标准放射卫生防护基本标准、GB703-88GB703-88辐射防护规定辐射防护规定、GB 188712-2002)GB 188712-2002)电离辐射防护与辐射源安全电离辐射防护与辐射源

40、安全基本标准基本标准 GB14925-2001GB14925-2001实验动物环境与设施实验动物环境与设施等要求，增强放射（辐射）卫生防护意识。一、放（辐）射性污染动物实验设施的设计一、放（辐）射性污染动物实验设施的设计（一）选址（一）选址（1）大型防放（辐）射行危害的动物实验设施应考虑区域地质构造、是否为危险地带；不宜在地震、海啸、湖震频繁、崩塌、岩堆、滑坡区、山洪、泥石流区、活动沙丘区、高压缩性淤泥及软土区、坡度陡的地区选址建筑。（2）小型放（辐）射性危害动物实验设施选址远离其它动物实验室，不能毗邻居民密集区、闹市区、易燃易爆品生产区。（二）动物设施防护（二）动物设施防护 （1）动物实验设

41、施中有放（辐）射性物质的存放区域，必须在实验室某一区域设置有混凝土屏蔽室或有足够屏蔽厚度和作用的装置。（2）防护门咬合严密，机房门内所镶铅板对接处无空隙,操作室观察窗铅玻璃、四周木框镶铅板、传片箱包铅板、电源插座等凹槽处设置放射防护标志。（3）凡能产生放（辐）射性固体废物的动物实验活动区域，都应设计有相应的废物暂时贮存设施，并保证暂时贮存的废物必须在包装和贮存方式上，在贮存期内可完整回取，并要求经济、安全、方便。动物实验设施中贮存放（辐）射性物质的区域暂存期应设计为5年。（4）设施内应将非放（辐）射性工作区与有辐照工作区分开设置。操作放射性物质的工作区，应设计通过间，人员全天时间在此工作也无危

42、险，即使有出现表面沾污和气溶胶污染的可能，也能及时发现并清除。（5）放射性物质存放区，应设计通过缓冲间或卫生缓冲间，人员不经常停留，人员须经允许才能进入该区域。二二.放（辐）射污染防护实验设施的安全监放（辐）射污染防护实验设施的安全监测测 （1）放射工作场所设置电离辐射标志、工作指示灯及通风设施等。工作人员配置使用铅制衣帽等防护用品，增强防护等措施，减少对人的辐射。（2）在实验人员污染停留的工作区域设置必要的固定式监测装置和自动报警系统,未设固定监测点的场所也应能用便携式仪表监测.（3）在实验区设置固定空气微尘取样系统,定期取样监测。（4）必须在实验区设置放射性气溶胶监测仪。（5）应设置事故备

43、用电源，保证放射设施内不间断电源供给。第八节第八节 环境监测环境监测 新建或改建的实验动物和动物实验设施在启用前必须进行环境险测。即使是使用过程中也有必要对有关环境指标进行检测。环境检测-般分为内环境检监测和外环境监测1 1噪声测定噪声测定 （1）测定仪器：普通噪音计、积分型噪音计。（2）测定方法：在洁净室无人、无动物、空调净化系统运行的情况下测试洁净室的噪声，一般测点应选在被测环境的中央区，如房间大于15m2可选两个或两个以上的测点，测点应距地面lm。2照度测定 （1）仪器：便携式照度计 （2）测定万法：采用照度计法测定洁净环境的照度，测定前必须将所有照明设备在开启状态，测点应分布在房间的各

44、个部位，选在距地面0.8-lm高的位置测定，测定时光敏面与光源呈水平位置，待显示数字稳定后再记录。3.3.空气中落下菌的测定空气中落下菌的测定 （1）仪器和试剂：直径为9cm的玻璃培养皿和血液琼脂培养基。（2）测定方法：在不饲养动物的状态下，每5-10m2，放置一个9cm的培养皿，敞开盖，暴露于空气中30min，然后盖上盖，将培养皿放到37保温箱内培养40h后计算菌落数。4.4.空气颗粒物测定空气颗粒物测定 （1）仪器：粒子计数器 （2）测定方法：垂直层流式或乱流式测定应布置在距地面1m高的工作区平面上，测点间距为0.5-2.0m，乱流式动物室面积不大于50m2的布置5个测点，每增加20-50m2增置3-5个测点，每个测点连续测定3次，测定过程中不得调整测定次数。测定时100级净化室的采样量每分钟不少于1L，1000级以上净化室的采样量每分钟不小于0.3L。5.5.各相邻洁净区静压差测定各相邻洁净区静压差测定思考题：思考题：1.环境因素有哪些？其对实验动物和动物实验的重要性及其影响如何？2.实验动物和动物实验设施分为哪几类？3.简述屏障设施的环境标准。4.实验动物屏障设施的功能分区有那些？5.生物安全实验室设计和建设的基本原则是什么？6.微生物危害分级标准是什么？