显微摄影技术全套课件.ppt

1、显微摄影技术显微摄影技术nnnnn 显微镜的有效放大率为所用物镜数值孔径的5001000倍。目镜与物镜组合前提是使放大倍数在有效放大率范围内。在有效放大率前提下，要提高对物像细节的分辩能力和清晰度，必须使用高数值孔径的物镜和低倍目镜的组合。照像目镜的选择：在物镜的有效放大倍率内，尽量优选低倍照像目镜。物镜有效数值孔径物镜有效数值孔径(物镜物镜NA+聚光镜聚光镜NA)/2n根据不同倍率物镜给予不同直径的光束；n避免散射光，增加图像反差；n适度：视场光阑像恰在取景框的外缘。过于接近或超过则会将图像的四角切掉。nBF：追求分辨率、色彩还原nFL:追求敏感度n定量分析定量分析：图像可比性环境要求环境要

2、求n无尘、无振动；n避免强光照射-影响对焦准确性；n房间照度不能过强，散射光、照明的眩光透过物镜、聚光镜等会反射到光路中，干扰正常成像；n无腐蚀性气、物；n防潮、防霉。n选定条件、清理光路相关部件选定条件、清理光路相关部件n调整光轴中心灯丝、聚光镜对中调整光轴中心灯丝、聚光镜对中n调整聚光镜位置、电压、光阑、滤光片达调整聚光镜位置、电压、光阑、滤光片达到最佳照度和色温到最佳照度和色温n调整载物台、焦距，选择摄影区域调整载物台、焦距，选择摄影区域n拉动分光棱镜推杆，切换显微镜光路拉动分光棱镜推杆，切换显微镜光路组化图像背景偏黄组化图像背景偏黄 解决方法：用淡青色滤光片滤除黄光解决方法：用淡青色滤

3、光片滤除黄光；若效果仍不满意或无淡青色滤光片，则适当调高电压；若效果仍不满意或无淡青色滤光片，则适当调高电压(约约高于高于9V)，以图像分辨率不受影响、画面对比度适宜为度。电压，以图像分辨率不受影响、画面对比度适宜为度。电压过高则背景偏青。过高则背景偏青。照明光源采用汞灯或高能氙灯，通过不同的滤光片组合获得不同波段的激发/发射光，用于荧光染色标本的观察。视场光阑过小，视野亮度不足，影像不清晰；具有多种图像特征的选取工具（矩形框、圆形框和自画任意框等），不限制多层彩色分割，图像数学运算。畸变（Distortion）：前面所说各种相差除场曲外，都影响像的清晰度。17mm，常以170mm/0.避免强

4、光照射-影响对焦准确性；孔径光阑小于物镜的数值孔径时，物镜的分辩力的亮度降低，但影像反差和焦点深度提高，使影像更加清晰。轴外物点以大孔径光束成像时，发出的光束通过透镜后，不再相交一点，则一光点的像便会得到一逗点壮，型如慧星，故称“慧差”。17mm表示，载玻片厚小于1.这种物镜纠正了以上三种物镜的缺陷，校正了像场弯曲，不存在视野中心与边缘不能同时准焦的现像。物镜有效数值孔径(物镜NA+聚光镜NA)/2这样在镜检时不能同时看清整个相面，给观察和照相造成困难。它是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率(Eta)和孔径角(u(upsilon)半数的正弦之乘积。显微摄影系统的基本构成提供多种的测量参数，如面积、周长、长轴、短轴、形态因子、异型指数、圆形度、平均灰度、平均光密度、积分光密度、绝对光密度、光密方差度、核浆比等。从目镜中透出来的光线在目镜外相交，这个相交点称为眼点（eyepoint）。Thank you!谢谢观看谢谢观看