血细胞分析仪分解课件.ppt

1、fl100 200 300 400 血液分析仪血液分析仪 1912 1912 年出生在美国阿肯色州年出生在美国阿肯色州 ,1948,1948年他在年他在芝加哥一间地下室建立了自己的实验室芝加哥一间地下室建立了自己的实验室 ,并发并发现库尔特原理，现库尔特原理，1953 1953 年获得美国发明专利。年获得美国发明专利。通过电子放大器，将微伏讯通过电子放大器，将微伏讯 号放大为脉冲讯号；号放大为脉冲讯号；调节参考电平的大小；调节参考电平的大小；根据阈值调节器提供的参考根据阈值调节器提供的参考 电平，去掉假信号，提高准确性；电平，去掉假信号，提高准确性；将放大的甄别后不一致的细将放大的甄别后不一致

2、的细 胞讯号波形形成标准的平顶波；胞讯号波形形成标准的平顶波；送入计数系统，以细胞大小送入计数系统，以细胞大小 为横座标，以纵座标表示体积相对为横座标，以纵座标表示体积相对 频率，绘制直方图。频率，绘制直方图。红细胞、白细胞、血小板直径不同，产生红细胞、白细胞、血小板直径不同，产生的脉冲幅度也不同，以白细胞最大，红细的脉冲幅度也不同，以白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。胞次之，血小板最小。先利用脉冲幅度甄别器将幅度较小的血小先利用脉冲幅度甄别器将幅度较小的血小板脉冲去掉，保留红细胞和白细胞脉冲。板脉冲去掉，保留红细胞和白细胞脉冲。因为白细胞数量小于红细胞数量的因为白细胞数量小于红细胞数量的1

3、 1500500，故其总数即可代表红细胞数量。故其总数即可代表红细胞数量。在计数白细胞时，先利用溶血剂将红细胞在计数白细胞时，先利用溶血剂将红细胞破碎，然后再对剩下的白细胞进行计数。破碎，然后再对剩下的白细胞进行计数。在计数血小板时，将脉冲幅度甄别器的域在计数血小板时，将脉冲幅度甄别器的域值调低，计出红细胞、白细胞和血小板的值调低，计出红细胞、白细胞和血小板的总数，再减去先前测出的红细胞数，便得总数，再减去先前测出的红细胞数，便得出血小板数。出血小板数。高频电磁波可通过细胞膜，利用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层，测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、胞核、颗粒等信息，以区别大小相当但内部结构不

4、一致的细胞或颗粒。利用流式细胞术使单个细胞随着流体利用流式细胞术使单个细胞随着流体动力聚集的鞘流液在通过激光照射的检测动力聚集的鞘流液在通过激光照射的检测区时，使光束发生折射、衍射和散射，散区时，使光束发生折射、衍射和散射，散射光由光检测器接受后产生脉冲，脉冲大射光由光检测器接受后产生脉冲，脉冲大小与被照细胞的大小成正比，数量代表了小与被照细胞的大小成正比，数量代表了细胞的数量。细胞的数量。主要用于血红蛋白测定。使用含有溶血剂的稀释液，使红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白再与溶血剂中的某些成分结合，形成稳定的血红蛋白衍生物，于特定波长内比色，根据吸光度得到血红蛋白浓度。仪器将体积为仪器将体积

5、为3535450fL450fL的血细胞，的血细胞，分为分为256256个通道（个通道（channelchannel）。根据细胞）。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图细胞体积分布直方图(Histogram)(Histogram)。根据。根据细胞大小将白细胞初步分为三个细胞群。细胞大小将白细胞初步分为三个细胞群。淋巴细胞（体积淋巴细胞（体积最小）。最小）。，（中间细，（中间细胞）：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。嗜中性粒细胞嗜中性粒细

6、胞（体积最大）。（体积最大）。%35 90 160 300 400 450(fl)八千多个白细胞逐个、八千多个白细胞逐个、直接、同时地在流式通直接、同时地在流式通道内接受道内接受VCSVCS三重检测，三重检测，得到各自的三维座标值得到各自的三维座标值VCSFluorescenceSide ScatterBlasts/Atypical LymphImmature GranMonoLymphEOLeftShiftNeutNRBC少）少）聚亚早基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，使DNARNA和细胞器着色，荧光强度代表了不同成熟度的细胞，三者联合得到4DIFF白细胞散点图。嗜碱性粒细胞则使用专门检测通道，

7、嗜碱性溶血剂仅使嗜碱性粒细胞保持形态，经流式细胞术计数。FluorescenceSide ScatterBlasts/Atypical LymphImmature GranMonoLymphEOLeftShiftNeutNRBC 嗜酸性粒细胞与其他细胞。嗜酸性粒细胞与其他细胞。红细胞通过小孔，产生相应大小的红细胞通过小孔，产生相应大小的脉冲，脉冲的高低代表每个红细胞的体脉冲，脉冲的高低代表每个红细胞的体积，脉冲的多少即为红细胞数目，脉冲积，脉冲的多少即为红细胞数目，脉冲高度叠中经换算得出血细胞比容。高度叠中经换算得出血细胞比容。100 200 300 400(fl)%当稀释血液中加入溶血剂后，

8、红细当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定的波长下进行比色，蛋白衍生物，在特定的波长下进行比色，计算得出血红蛋白浓度。计算得出血红蛋白浓度。红细胞平均体积、红细胞平均血红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度及红红蛋白含量、平均血红蛋白浓度及红细胞体积分布宽度，均根据仪器检测细胞体积分布宽度，均根据仪器检测的的RBC、HCT和和Hb的结果计算得来。的结果计算得来。低角度低角度(2(23 3)：测量红细胞体积。：测量红细胞体积。高角度高

9、角度(5(51515)：测定红细胞血红蛋白：测定红细胞血红蛋白浓度。浓度。血小板随红细胞在一个系血小板随红细胞在一个系统中进行检测，血小板分别储存在统中进行检测，血小板分别储存在6464个通道，直方图范围在个通道，直方图范围在2 228fl28fl，血小，血小板平均体积（板平均体积（MPVMPV）是血小板体积分布）是血小板体积分布的直方图的产物。的直方图的产物。血小板计数（血小板计数（platelet,PLTplatelet,PLT）：）：随红细胞在一个系统中进行检测随红细胞在一个系统中进行检测。10 20 30(fl)10 20 30(fl)%用新亚甲蓝染色使红细胞用新亚甲蓝染色使红细胞RN

10、ARNA着色着色或用荧光染料对或用荧光染料对RNARNA进行染色。进行染色。核酸染色和信号分析核酸染色和信号分析激光束激光束(=633nm)侧向荧光：侧向荧光：DNA/RNA信息信息侧向散射光：侧向散射光：细胞内结构信息细胞内结构信息前向散射光：前向散射光：细胞体积信息细胞体积信息 仪器双通道，容易仪器双通道，容易操作，有异常结果预操作，有异常结果预警，仪器可自动监测警，仪器可自动监测吸样异常、气泡堵孔吸样异常、气泡堵孔等现象，可检测等现象，可检测8 81515项参数及项参数及3 3个直方图。个直方图。SYSMEX K-4500 使用两种溶血使用两种溶血素，仪器线性范围更素，仪器线性范围更宽，

11、准确性更好，自宽，准确性更好，自动化程度高，对污染、动化程度高，对污染、气泡干扰、异物阻塞气泡干扰、异物阻塞有监控系统，有质控有监控系统，有质控软件。可检测软件。可检测1818项参项参数及数及3 3个直方图。个直方图。速度快，能检测包括幼稚细胞在内的速度快，能检测包括幼稚细胞在内的1010余种异余种异常细胞，常细胞，半导体激光技术、荧光染色及流式技术等多种半导体激光技术、荧光染色及流式技术等多种检测技术综合运用。检测技术综合运用。强大的网络功能和完善的数据管理系统。强大的网络功能和完善的数据管理系统。无错进样管理，条形码技术应用。无错进样管理，条形码技术应用。可与其他检测仪联机，组成自动化模块

12、。可与其他检测仪联机，组成自动化模块。3030个参数，个参数，1010项白细胞分类，项白细胞分类，7 7个分布图，个分布图，7 7个个散射表示图散射表示图 HST-330 SE-9000/R-3000/SP-100 从血球计数、白血球分类到网织红细胞测定从血球计数、白血球分类到网织红细胞测定以及标本的推片、染色，全面实现了自动化。以及标本的推片、染色，全面实现了自动化。实现了高效率的检测。实现了高效率的检测。小细胞中间细胞大细胞flRELNOR1R2R3R4WBCL1L2X轴上的68.28%(可信区间)RDW-CV100%20%RDW-SD中高档仪器检测参数：中高档仪器检测参数：2020项左右

13、或超过项左右或超过4040多项多项(WBC(WBC、RBCRBC、PLTPLT、HCTHCT、MCVMCV、MCHCMCHC、MCHMCH等等)横坐标为血细胞体积大小横坐标为血细胞体积大小 纵坐标为不同体积细胞的相对频率纵坐标为不同体积细胞的相对频率 反映外周血红细胞体积大小异反映外周血红细胞体积大小异质性的参数，用红细胞体积的变异质性的参数，用红细胞体积的变异系数来表示。系数来表示。11.6%-14.0%11.6%-14.0%100 200 flRBCbNfl100 200 a 鉴别缺铁性贫血和鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血珠蛋白生成障碍性贫血 诊断缺铁性贫血诊断缺铁性贫血 进行贫血

14、的形态学分类（进行贫血的形态学分类（MCV/RDWMCV/RDW）指血液中血小板的平均体积，用fl表示。参考值：6.8-13.6fl102030flPLT 1）MPV增大：外周血中血小板破坏增多，骨髓代偿生成增加；骨髓造血功能恢复的早期指标等 2）MPV减少：骨髓造血功能衰竭，严重感染伴败血症等。反映外周血血小板体积异质性的参数，用反映外周血血小板体积异质性的参数，用血小板体积的变异系数来表示。血小板体积的变异系数来表示。15.5%-18.1%1）PDW增高：急性白血病化疗后、巨幼增高：急性白血病化疗后、巨幼细胞性贫血、慢粒等；细胞性贫血、慢粒等；2）原发性血小板增多时增高，反应性血）原发性血

15、小板增多时增高，反应性血小板增多时减低；小板增多时减低；3）再障时）再障时MPV减低，减低，PDW增高。增高。1 1）初步估计细胞群体的变化）初步估计细胞群体的变化100 200 300 400 flfl100 200 300 400 要注意观察图形峰的位置、峰底的宽度、峰顶要注意观察图形峰的位置、峰底的宽度、峰顶的形状及有无双峰现象。的形状及有无双峰现象。1 1）缺铁性贫血）缺铁性贫血2 2）轻型）轻型HbHb合成障碍合成障碍3 3）铁粒幼细胞性贫血）铁粒幼细胞性贫血4 4）叶酸缺乏的巨幼细胞性贫血）叶酸缺乏的巨幼细胞性贫血5 5）其他）其他100200fl 当血小板计数和血小板体积直方图呈

16、现异常现当血小板计数和血小板体积直方图呈现异常现象时，均应检查血液是否有血小板凝聚和微小血块，象时，均应检查血液是否有血小板凝聚和微小血块，必要时作血涂片检查，观察是否有小红细胞、红细胞必要时作血涂片检查，观察是否有小红细胞、红细胞碎片或大血小板增多现象。碎片或大血小板增多现象。10 20 30 fl10 指血液分析仪测定结果，与常规方法所指血液分析仪测定结果，与常规方法所 测测结果相比较。显微镜法是血细胞检验基础。结果相比较。显微镜法是血细胞检验基础。P P0.050.05有可比性；有可比性；P P0.050.05无可比性。无可比性。结论：结论：计数细胞越多、选用吸管、计数盘越多，计数细胞越

17、多、选用吸管、计数盘越多，计数结果接近真值。计数结果接近真值。实际工作中，镜检法很难达到此要求。实际工作中，镜检法很难达到此要求。准确性是指测定结果与真值一致性的准确性是指测定结果与真值一致性的程度。程度。指同一份标本多次测量的结果接近的程度。重复测定1份抗凝静脉血10次，计算CV值。四、精密度四、精密度(precision)）同一同一批样本重复测定结果的评价。批样本重复测定结果的评价。对两对两批或两批以上样本重复测定结果的评价。批或两批以上样本重复测定结果的评价。连续测定连续测定1 1份高值样本份高值样本3 3次（次（i1i1、i2i2、i3i3）再测定再测定1 1份低值样本份低值样本3 3

18、次（次（j1j1、j2j2、j3j3）携带污染率（携带污染率（%）（）（j1-j3j1-j3）/（i3-J3i3-J3）六、稀释效果六、稀释效果 指测定值与稀释倍数是否呈比例指测定值与稀释倍数是否呈比例关系。关系。线性关系范围越宽越理想。线性关系范围越宽越理想。P P 0.01,0.01,非线性相关；非线性相关；P P 0.050.05，未偏离线性。，未偏离线性。MCH MCV MCHC RBC 1、每天开机时的检查、每天开机时的检查 2、试剂、试剂 3、标本要求、标本要求 4、严格执行操作规程、严格执行操作规程 5、受检者生理状态对实验结果的影响、受检者生理状态对实验结果的影响 6、注意仪器

19、的报警、提示、注意仪器的报警、提示 1、保留标本备查、保留标本备查 2、重视室内质控、重视室内质控 3、加强质控小组的责任、加强质控小组的责任 4、分析实验结果各参数间关系、分析实验结果各参数间关系 5、加强与临床联系、加强与临床联系 6、积极参加室间质量控制、积极参加室间质量控制(四四)质量控制体系的构建质量控制体系的构建 SOP SOP 质量手册质量手册 室内质量控制室内质量控制 室间质量评价室间质量评价 人员培训人员培训2、红细胞直方图的应用3 3、血小板直方图的意义、血小板直方图的意义1 1、白细胞直方图、白细胞直方图正常白细胞直方图正常白细胞直方图异常白细胞直方图异常白细胞直方图2 2、红细胞直方图、红细胞直方图（1 1）正常红细胞分布：）正常红细胞分布：5050200fl 200fl（2 2）异常红细胞直方图）异常红细胞直方图3 3、血小板直方图、血小板直方图正常血小板直方图呈左偏态分布：正常血小板直方图呈左偏态分布：2 230fl30fl分布，主要在分布，主要在2 215fl15fl。异常血小板直方图