植物组织培养的基本知识及操作技术课件.ppt

1、 一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发育后，一般不会再回复到未分化状态，但在组织育后，一般不会再回复到未分化状态，但在组织培养条件下，可能发生脱分化和再分化。培养条件下，可能发生脱分化和再分化。脱分化脱分化-再分化再分化-器官发生器官发生胚胎发生胚胎发生n离体的植物组织在组培条件下形成吴根苗、根、离体的植物组织在组培条件下形成吴根苗、根、芽等器官的过程称为器官发生。芽等器官的过程称为器官发生。直接途径直接途径间接途径间接途径先芽后根先芽后根先根后芽先根后芽根芽同时发生根芽同时发生比较容易实现细胞全能性的细胞：受精卵、分生比较容易实现细胞全能性的细胞：受精

2、卵、分生组织细胞、雌雄等。组织细胞、雌雄等。组织培养实验室布局的总体要求：组织培养实验室布局的总体要求：便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察基本实验室辅助实验室实验室组成准备室缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温 室生化分析实验室基本实验室布局平面图实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁 架水槽电炉门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室准备室缓冲室缓冲室无菌室无菌室培养室培养室组织培养准备实验室缓冲室培养室无菌室（一）无菌室（二）10、细胞学鉴定设备光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜光学显微镜培养皿三角瓶培养瓶镊子接种针解剖刀n2.外植体的选择和处

3、理外植体的选择和处理 植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：a、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；b、构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的新陈代谢；c、元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳 定、电荷平衡等点化学方面的作用；d、发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。培养基组成培养基组成1、无机营养元素、无机营养元素(inorganic element)椰乳椰乳香蕉香蕉马铃薯马铃薯酵母提取液酵母提取液IAA(吲哚乙酸吲哚乙酸)NAA(萘乙酸萘乙酸)IBA(吲哚丁酸吲哚丁酸)2,4D(2,4二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸)强强弱

4、弱 Kt(激动素激动素)6BA(6苄基腺嘌呤苄基腺嘌呤)Zt(玉米素玉米素)强强弱弱固体培养固体培养液体培养液体培养1、MS培养基 无机盐浓度高 高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐 含有一定数量的铵盐 营养丰富 不需要添加更多的有机附加物2、White培养基 1943年由White为培养番茄根尖而设计 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 无机盐浓度较低 使用广泛 在生根培养、胚胎培养中有良好的效果附表：White培养基3、B5培养基 1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计 含有较低的铵盐 较高的硝酸盐和盐酸硫胺素B5培养基的组成和配方4、N6培养基 1974年朱至清等为

5、水稻等禾谷类作物花药培养设计 KNO3和含量高，不含钼N6培养基组成及配方母液名称母液名称 药品药品 名称名称 原配方量原配方量(mg)/L大量元素母大量元素母液液 NH4NO31650KNO31900CaCl2H2O440MgSO4 7H2O370KH2PO4170微量元素母微量元素母液液 MnSO4H2O22.3ZnSO47H2O8.6CoCl6H2O0.025CuSO45H2O0.02H3BO36.2Na2MO42H2O0.25KI0.83铁盐母液铁盐母液 FeSO47H2O28.7Na2-EDTA37.3有机物母液有机物母液 烟酸烟酸(Vpp)0.5盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇 0.5盐酸硫胺素盐酸硫胺素 0.1肌醇肌醇 100甘氨酸甘氨酸 2