血液检验课件.ppt
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- 血液 检验 课件
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1、第一章第一章 血液检验血液检验 BLOOD ROUTINE TEST 1、血液的组成、血液的组成 有血细胞有血细胞(45%)和血浆和血浆(55%)两部分组成。两部分组成。2、血液的主要理化性质、血液的主要理化性质(1)血量)血量 占体重的占体重的7-9%,成人约,成人约4-5L;(2)颜色)颜色 来自血红蛋白来自血红蛋白(3)PH值值:7.357.453、血液的功能:参加机体呼吸、运输、防御、血液的功能:参加机体呼吸、运输、防御、协调体液渗透量和维护内环境。协调体液渗透量和维护内环境。血液常规检验项目中最基础及最常用的检验血液常规检验项目中最基础及最常用的检验,除了除了检查红细胞、白细胞、血小
2、板外,还要检查如:检查红细胞、白细胞、血小板外,还要检查如:血细胞其他相关参数测定;血细胞其他相关参数测定;红细胞沉降率的检查;红细胞沉降率的检查;血细胞形态学检查;血细胞形态学检查;各种凝血试验;各种凝血试验;血型检查和交叉配血;血型检查和交叉配血;一、标本采集及抗凝剂应用一、标本采集及抗凝剂应用静脉采血法静脉采血法动脉采血法动脉采血法毛细血管采血法毛细血管采血法适用于绝大多数临床检验适用于绝大多数临床检验体表的浅静脉均可体表的浅静脉均可肘部静脉肘部静脉最常用最常用手背静脉手背静脉内踝静脉内踝静脉股股 静静 脉脉颈外静脉颈外静脉静脉采血部位静脉采血部位不同型号(不同型号(510ml)硅化处理
3、玻璃试管或者塑料试管硅化处理玻璃试管或者塑料试管注射器和容器必须干燥注射器和容器必须干燥抽血不宜过快,以免产生气泡或溶血抽血不宜过快,以免产生气泡或溶血要拔掉针头再徐徐注入容器要拔掉针头再徐徐注入容器若遇病人晕厥时勿惊慌,可采取:若遇病人晕厥时勿惊慌,可采取:平卧休息平卧休息 嗅芳香氨酊嗅芳香氨酊 指按指按“人中人中”“”“合谷合谷”等穴位等穴位(负压采血法)(负压采血法)减少医务人员感染减少医务人员感染 减少容器间转移减少容器间转移 减少交叉污染减少交叉污染 保护环境保护环境需血微量的检查需血微量的检查手指、耳垂、拇指、足跟手指、耳垂、拇指、足跟WHO推荐:推荐:采血针:采血针:一次性采血针
4、一次性采血针 三棱针三棱针 专用采血针专用采血针75%酒精棉球和消毒干棉球酒精棉球和消毒干棉球微量吸管微量吸管(20微升微升)末梢循环受多种因素影响末梢循环受多种因素影响标本混有组织液标本混有组织液采血量受限采血量受限疼痛明显疼痛明显穿刺部位消毒酒精干后方可穿刺穿刺部位消毒酒精干后方可穿刺烧伤病人应选择皮肤完整处采血烧伤病人应选择皮肤完整处采血必须一人一针必须一人一针用于血气分析用于血气分析股动脉等股动脉等专用采血器专用采血器采血后立即封闭针头,避免与采血后立即封闭针头,避免与 空气接触,及时送检,最好在空气接触,及时送检,最好在 10分钟内检测。分钟内检测。抗抗 凝凝用物理或化学方法除去或抑
5、制血液中的某用物理或化学方法除去或抑制血液中的某 些凝血因子的活性,阻止血液凝固。些凝血因子的活性,阻止血液凝固。抗凝剂抗凝剂能够阻止血液凝固的物质。能够阻止血液凝固的物质。常用的抗凝剂常用的抗凝剂与血中钙离子与血中钙离子结合成螯合物,结合成螯合物,使使失去凝失去凝血作用,从而血作用,从而阻止血液凝固。阻止血液凝固。1 1、乙二胺四乙酸盐、乙二胺四乙酸盐(EDTA-NaEDTA-Na2 2,EDTA-K,EDTA-K2 2)多项血液学检查,多项血液学检查,n 尤其是血小板计数尤其是血小板计数n 特别适用于特别适用于 全血细胞分析全血细胞分析n 血细胞比容测定血细胞比容测定凝血象检查和血小板功能
6、检查凝血象检查和血小板功能检查n 因为:因为:EDTA影响血小板聚集影响血小板聚集n EDTA-K3可使可使RBC皱缩,皱缩,ICSH建议用建议用作血细胞计数抗凝剂作血细胞计数抗凝剂n2、肝素、肝素n 与与T-结合抑制凝血活酶的形成结合抑制凝血活酶的形成n 抑制血小板聚集与释放反应抑制血小板聚集与释放反应 n 灭活丝氨酸蛋白酶灭活丝氨酸蛋白酶,抑制凝血酶形成抑制凝血酶形成 适用于绝大多数检查适用于绝大多数检查n (不影响细胞体积(不影响细胞体积,不易溶血)不易溶血)n 尤其是细胞培养和红细胞渗透脆性实验尤其是细胞培养和红细胞渗透脆性实验不适合血液学一般检查不适合血液学一般检查n 因为:因为:易
7、引起白细胞聚集易引起白细胞聚集n 血涂片罗氏染色有蓝色背景血涂片罗氏染色有蓝色背景152.5 IU/ml血血n3、枸橼酸盐、枸橼酸盐n与钙离子结合成螯合物,从而阻止血液凝固。与钙离子结合成螯合物,从而阻止血液凝固。血沉测定血沉测定n 凝血功能测定凝血功能测定n 输血保养液输血保养液0.105M枸橼酸钠,比例枸橼酸钠,比例9:1。引起血涂片分布不均的主要原因:引起血涂片分布不均的主要原因:推片边缘不整齐,推片边缘不整齐,用力不均匀,用力不均匀,载片不清洁。载片不清洁。n二、血细胞染色二、血细胞染色n(一一)(Wrights stain)n 1 瑞氏染料(复合染料)瑞氏染料(复合染料)n 酸性染料
8、酸性染料伊红伊红(E-)n 碱性染料亚甲蓝碱性染料亚甲蓝(M+,又名,又名美蓝美蓝)n 美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青即天青),n 甲醇的作用:甲醇的作用:溶解美蓝和伊红,解离为溶解美蓝和伊红,解离为 M+和和E-;n脱水作用,固定细胞形态,增强染色效果。脱水作用,固定细胞形态,增强染色效果。(一一三、外周血白细胞分类计数三、外周血白细胞分类计数(一)、白细胞计数(一)、白细胞计数(white blood cell count,WBC):指测定单位容积的外周血各种白细胞的总数。指测定单位容积的外周血各种白细胞的总数。显微镜计数法显微
9、镜计数法检测原理检测原理 用白细胞计数稀释液用白细胞计数稀释液(稀乙酸稀乙酸),将血液稀释一定倍数并破坏成熟红细胞和固定白细胞将血液稀释一定倍数并破坏成熟红细胞和固定白细胞 充入改良牛鲍充入改良牛鲍(Neubauer)计数板,计数板,在显微镜下计数一定范围内的白细胞数在显微镜下计数一定范围内的白细胞数 经换算求得每升血液中各种白细胞的总数。经换算求得每升血液中各种白细胞的总数。1.1.中性粒细胞中性粒细胞 胞体圆形,直径胞体圆形,直径10-15m10-15m,为,为红细胞的两倍。胞质丰富,粉红色,含较多红细胞的两倍。胞质丰富,粉红色,含较多细小均匀的紫红色中性颗粒。细胞核染色质细小均匀的紫红色
10、中性颗粒。细胞核染色质粗糙不匀,排列紧密,为深紫红色。粗糙不匀,排列紧密,为深紫红色。根据核形状分类:中性杆状核粒细胞根据核形状分类:中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞 标准:核径最窄处小于最宽处标准:核径最窄处小于最宽处1/31/3为分叶核为分叶核 核径最窄处大于最宽处核径最窄处大于最宽处1/31/3为杆状核为杆状核(二)外周血正常白细胞形态(二)外周血正常白细胞形态嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 细胞圆形,直径细胞圆形,直径13-15um13-15um,略大于中性,略大于中性粒细胞。胞浆内充满粗大、整齐、均匀、粒细胞。胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗
11、粒,排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗粒,偶见少许淡蓝或无色胞浆。嗜酸性粒细胞偶见少许淡蓝或无色胞浆。嗜酸性粒细胞容易破碎,颗粒可分散于细胞周围。容易破碎,颗粒可分散于细胞周围。嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞 细胞圆形,直径细胞圆形,直径10-12um10-12um,略小于中性,略小于中性粒细胞。胞浆少,常呈淡红或淡紫红色,粒细胞。胞浆少,常呈淡红或淡紫红色,含少量粗大、不均匀、排列不规则的紫黑含少量粗大、不均匀、排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒,常盖于核上,及细胞边缘。色嗜碱性颗粒,常盖于核上,及细胞边缘。单核细胞单核细胞 细胞圆形或不规则形,为外周血中最细胞圆形或不规则形,为外周血中最大的细胞,直径
12、大的细胞,直径15-25um15-25um,胞浆丰富,染,胞浆丰富,染淡蓝或灰蓝色,呈毛玻璃样半透明,含有淡蓝或灰蓝色,呈毛玻璃样半透明,含有大量细小、灰尘样嗜天青颗粒,可见空泡。大量细小、灰尘样嗜天青颗粒,可见空泡。细胞核大,呈不规则圆形、肾形、马蹄形细胞核大,呈不规则圆形、肾形、马蹄形或不规则分叶,有时折叠扭曲。染色质细或不规则分叶,有时折叠扭曲。染色质细致、疏松如网状。致、疏松如网状。淋巴细胞淋巴细胞 大淋巴细胞大淋巴细胞:体积较大,直径:体积较大,直径10-15um,胞浆丰富,呈透明蓝色,常有少量粗大、胞浆丰富,呈透明蓝色,常有少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。细胞核染大小不均的紫
13、红色嗜天青颗粒。细胞核染色质疏松。色质疏松。小淋巴细胞小淋巴细胞:细胞圆形,直径:细胞圆形,直径6-10um,胞浆很少,有的仅在核的一侧出现一线蓝胞浆很少,有的仅在核的一侧出现一线蓝色胞浆,甚至完全没有。细胞核圆形,偶色胞浆,甚至完全没有。细胞核圆形,偶见凹陷,染色质粗糙致密,可有块状。见凹陷,染色质粗糙致密,可有块状。1 1、中性粒细胞核象左移、中性粒细胞核象左移 外周血中中性杆状核粒细胞增多和杆状核外周血中中性杆状核粒细胞增多和杆状核阶段以前的幼稚阶段细胞出现称为核象左移,阶段以前的幼稚阶段细胞出现称为核象左移,又称为类白血病反应。又称为类白血病反应。(1)轻度核象左移)轻度核象左移 6%
14、,只有杆状核粒细胞。,只有杆状核粒细胞。(2)中度核象左移)中度核象左移 10%,有少量的晚、中,有少量的晚、中 幼粒细胞。幼粒细胞。(3)重度核象左移)重度核象左移 25%,可见早幼粒、原,可见早幼粒、原 始粒,伴有中毒颗粒等质变化。始粒,伴有中毒颗粒等质变化。核左移常见于化脓性感染、急性中毒、急性溶核左移常见于化脓性感染、急性中毒、急性溶血、急性失血等。血、急性失血等。2 2、中性粒细胞核象右移、中性粒细胞核象右移 外周血中中性分叶核粒细胞增多伴多分叶,外周血中中性分叶核粒细胞增多伴多分叶,同时分同时分5 5叶核以上的细胞叶核以上的细胞3%3%时称为核象右移。时称为核象右移。常见于造血功能
15、衰退或造血物质缺乏、常见于造血功能衰退或造血物质缺乏、DNADNA减少的表现。如:恶性贫血、应用抗代谢药物减少的表现。如:恶性贫血、应用抗代谢药物等。在疾病的进行期突然出现核象右移的变化,等。在疾病的进行期突然出现核象右移的变化,则表示预后不良。则表示预后不良。q中性粒细胞的毒性变化中性粒细胞的毒性变化1 1、大小不等、大小不等2 2、中毒颗粒、中毒颗粒3 3、空泡变性、空泡变性4 4、杜勒小体、杜勒小体(Dhle body)5 5、退行性变、退行性变1、大小不等2、中毒颗粒、中毒颗粒3、空泡变性、空泡变性4、杜勒小体(、杜勒小体(Dhle body)5、退行性变、退行性变 1 1、空泡型、空
16、泡型 2 2、不规则型、不规则型 3 3、幼稚型、幼稚型五、血细胞分析仪的原理、直方图分析方法及仪器使用的注意事项电阻抗型电阻抗型:利用血细胞的电阻大于电解质溶液:利用血细胞的电阻大于电解质溶液(稀释液稀释液)的电阻,细胞通过微孔时两电极之间的电阻,细胞通过微孔时两电极之间的阻抗值增大,产生电压脉冲信号而进行血细的阻抗值增大,产生电压脉冲信号而进行血细胞计数和体积测定。胞计数和体积测定。检测原理检测原理 血细胞与等渗电解质溶液相比为相对的不良导体,血细胞与等渗电解质溶液相比为相对的不良导体,其电阻值大于稀释液的电阻值。当血细胞通过检测器小其电阻值大于稀释液的电阻值。当血细胞通过检测器小孔管微孔
17、的孔径感受区时,检测器内外电极之间的恒流孔管微孔的孔径感受区时,检测器内外电极之间的恒流源电路上电阻值瞬间增大,造成两极之间电压的变化,源电路上电阻值瞬间增大,造成两极之间电压的变化,产生一个电压脉冲信号。每次检测中产生的脉冲信号数,产生一个电压脉冲信号。每次检测中产生的脉冲信号数,即相当于检测出的细胞数。即相当于检测出的细胞数。直方图 操作时,位于小孔两侧的电操作时,位于小孔两侧的电极产生恒定电流。根据欧姆定极产生恒定电流。根据欧姆定律电压变化与电阻变化成正比,律电压变化与电阻变化成正比,电阻值又同细胞体积成正比,电阻值又同细胞体积成正比,血细胞体积越大,电压越高,血细胞体积越大,电压越高,
18、在甄别器上的在甄别器上的脉冲幅度就越大脉冲幅度就越大,各种大小不同细胞产生的脉冲各种大小不同细胞产生的脉冲信号分别送入仪器内电脑的各信号分别送入仪器内电脑的各个通道,经运算得出各种细胞个通道,经运算得出各种细胞参数。目前,多数仪器在给出参数。目前,多数仪器在给出细胞数据结果的同时还提供细细胞数据结果的同时还提供细胞群体大小分布情况图形,称胞群体大小分布情况图形,称之为之为细胞体积直方图细胞体积直方图。白细胞直方图及分类计数方法 血细胞分析仪在进行细胞分析时,将每个血细胞分析仪在进行细胞分析时,将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并存储在相应细胞的脉冲根据其体积大小分配并存储在相应的体积通道中,每
19、个通道收集的数据被统计出的体积通道中,每个通道收集的数据被统计出相对数,表示在相对数,表示在Y Y轴上,体积数据以飞升轴上,体积数据以飞升(fl)(fl)为单位,表示在为单位,表示在X X轴上。轴上。1、正常白细胞直方图、正常白细胞直方图 第一群是小细胞区,主要是淋巴细胞,体积第一群是小细胞区,主要是淋巴细胞,体积在在353590fl90fl之间;第二群是中间细胞群,主要是之间;第二群是中间细胞群,主要是单核细胞,体积在单核细胞,体积在9090160fl160fl;第三群为大细胞;第三群为大细胞区,主要是中性粒细胞,体积可大至区,主要是中性粒细胞,体积可大至160fl160fl以上。以上。2
20、2、异常白细胞直方图、异常白细胞直方图 红细胞直方图红细胞直方图 红细胞直方图呈光滑的正态曲线,红细胞直方图呈光滑的正态曲线,峰值为红细胞平均体积,曲线底部宽度峰值为红细胞平均体积,曲线底部宽度为红细胞体积分布宽度;红细胞大小检为红细胞体积分布宽度;红细胞大小检测范围一般在测范围一般在3535250fl250fl。血小板直方图血小板直方图 血小板直方图是光滑、峰偏左的偏血小板直方图是光滑、峰偏左的偏态曲线,分布态曲线,分布2 230fl30fl。血红蛋白血红蛋白(hemoglobin,Hb)测定测定氰化高铁血红蛋白法由国际血液学标准化氰化高铁血红蛋白法由国际血液学标准化委员会(委员会(ICSH
21、ICSH)推荐,并经)推荐,并经WHOWHO确认为血确认为血红蛋白测定的参考方法。红蛋白测定的参考方法。主要优点:操作简单,结果稳定可靠,试主要优点:操作简单,结果稳定可靠,试剂容易保存,能测定除剂容易保存,能测定除SHbSHb以外的所有血以外的所有血红蛋白,并易于建立质控。红蛋白,并易于建立质控。检测原理 Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,再与白,再与CN-结合,生成稳定的棕红色结合,生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白HiCN,在波长为,在波长为540nm测量吸光度值,即可求得血红蛋测量吸光度值,即可求得血红蛋白总量。白总量。参考值参考值:成年男性
22、成年男性 120-160g/L 成年女性成年女性 110-150g/L 新生儿新生儿 170-200g/L血细胞比容(HCT)的测定血细胞比容是指一定体积的全血血细胞比容是指一定体积的全血(毛细血管毛细血管或静脉血或静脉血)中红细胞所占容积的相对比例。中红细胞所占容积的相对比例。参考值:参考值:n男性:男性:0.3800.508;n女性:女性:0.3350.450检测原理常量法常量法(Wintrobe法法)和微量法和微量法(microhematocrit)将抗凝血液标本置于孔径统一的温氏管或将抗凝血液标本置于孔径统一的温氏管或毛细玻璃管中,以一定转速离心一定时间后,毛细玻璃管中,以一定转速离心
23、一定时间后,计算红细胞层占全血的体积比。计算红细胞层占全血的体积比。5层:血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还层:血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。原红细胞层和氧合红细胞层。2.血液分析仪法血液分析仪法 由红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出,由红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出,Hct红细胞计数红细胞计数红细胞平均体积。红细胞平均体积。红细胞平均指数红细胞平均指数红细胞血平均红蛋白含量红细胞血平均红蛋白含量(mean corpuscular he-moglobin,MCH),指每个红细胞内平均所含血红蛋白的量,以皮克,指每个红细胞内平均所含血
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