荧光分析一节课件.ppt
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- 荧光 分析 一节 课件
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1、荧光分析技术荧光分析技术在生物领域中的应用在生物领域中的应用 卢建忠药学院药物分析教研室分子发光包括荧光、磷光、化学发光、分子发光包括荧光、磷光、化学发光、生物发光和散射光谱等。生物发光和散射光谱等。理论课部分 荧光分析导论)荧光与结构的关系 环境因素对荧光光谱和强度的影响 溶液荧光的淬灭 荧光仪器 荧光分析法 荧光在环境和生物中的应用 荧光在免疫和细胞分析中的应用 单细胞纳米荧光分析 基因芯片荧光分析实验部分 稀土离子铕的测定 荧光仿生膜技术研究中药活性成分跨膜 荧光共振能量转移 氨基酸HPLC荧光分析 荧光免疫分析或DNA分析 室温下,大多数分子处于基态的最低振动能级,处于基态的分子吸收能
2、量(光能、化学能、电能或热能)后,被激发至激发态。激发态不稳定,将很快衰变到基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射,这种现象称为“发光发光”。概述概述 光的现象早已为人们所认识:某些化合物受到太阳光的照射,会发光;一些昆虫会发光。文献记载:1500-1000 B.C.,萤火虫发光。1605年,Francis Bacon,比较详细地:只有萤火虫活着时,才会发光 固体发光文献记载,意大利文艺复兴时期,大约1600年,Bolonian鞋匠炼金术士(Vincencio casciarolo),经炭火煅烧过的高粘度砖石(Monte Paterno),若太阳照射,放置于暗处,会发红光。Called as“B
3、olonian stones”or“Moonstones”(月长石)-让人们着迷两个世纪,calledas“Phosphore”-第一块无机人工磷光石。月长石的发现首先吸引了Galileo(1564-1642年)和他的同事们的兴趣。因为磷光石在光照射之前不会发光,他们认为只有光进入石头之后才会发光,类似于海绵吸水,所以他们把这种现象称为“光海绵”,磷光石的行为就意味着时间光保存在某种物质中的时间。1652年,意大利数学家ucchi发现强光照射后的磷光石发强光,而且发射光的颜色不随照射光的颜色改变而改变。因此ucchi认为:物质吸收光并不象海绵吸水一样,仅仅将光储存在物质中,然后毫无改变的释放出
4、来。是砖石中的某些物质“灵魂”,在光照射的过程中发生了改变,当光照射停止后,这些物质产生的光逐渐衰减。这种延迟的发光现象,现在已被证实为磷光。发光本质:BaSO4-Bi-Mn 硫酸钡 铋 锰 煅烧石SO42-S 碱土金属的化合物中掺杂了重金属离子后,引起晶体结构的变化,致使发光加强。amburg的一位化学家ennigrand用“Phosphor”这个单词来描述化学元素“磷”。rand一直在寻找“点金石”,发现砂子与尿的蒸馏物中有一种物质能够在暗处发光,他将这种物质命名为“randsphosphor”,其实这就是单质“”,这并不同于以往的“Phosphor”,这是因为2化学发光 著名科学家tok
5、es提出“fluorescence”概念,描述荧光是一种光的发射过程,并发明一项技术,使用滤光片观察到了硫酸奎宁的荧光,而且阐述了“tokesaw”,也就是发射光的波长大于激发光的波长。他最先阐明荧光强度与浓度在一定范围之内成正比。浓度高时荧光会发生自淬灭;外来离子的存在也会引起荧光的淬灭。19世纪五十年代,由英国皇家学会的Stocks院士才真正阐述清楚荧光是怎样发生的。硫酸奎宁溶解在稀硫酸里,放到一个瓶子里,然后用太阳光来照这个溶液,但不是直接照射,而是在当中用一块教堂窗上蓝色的玻璃(能透过400纳米以下的短波长的光紫外光),也就是说,用太阳光中的紫外光或者近紫外光来照射奎宁硫酸溶液,中间还
6、放置一个黄色的葡萄酒,这杯酒起到的作用是能把400纳米以上的光都滤掉,只允许400纳米以下的光透过,他就在90度的角度上来观察,这样他就能很清楚地看到,奎宁在用400纳米以下的光照射时,或者讲在激发时,发出的是蓝色的光,蓝色光的波长要比紫外光的波长长。因此Stocks就第一个把荧光发生的过程的道理很清楚的讲出来了,而且发射波长要比激发波长长,我们把波长之间的差叫作Stocks位移(Stocks shift),以次纪念他的贡献。实际上这个装置就是最原始的荧光仪器,这就是原始创新。硫酸奎宁-用于治疗耐氯喹和耐多种药物虫株所致的恶性疟。也可用于治疗间日疟。硫酸奎宁硫酸奎宁:本品为白色细微的针状结晶,
7、轻柔,易压缩;无臭,味极苦;遇光渐变色;水溶液显中性反应。本品在氯仿无水乙醇(2:1)的混合液中易溶,在水、乙醇、氯仿或乙醚中微溶。比旋度为-237至-244。金鸡纳霜(Quinine):是防治热病,尤其是内疟疾的特效药,为热带地区的必需品。金鸡纳霜是用金鸡纳树的树皮研磨而成的。硫酸奎宁和硫酸依替米星区分 原理原理:硫酸奎宁加水溶解后,加稀硫酸使成酸性,即显蓝色荧光。而硫酸依替米星无此特性。现象现象:肉眼即可见硫酸奎宁溶液有较弱的蓝色荧光,而硫酸依替米星为无色透明液体。左瓶:硫酸依替米星右瓶:硫酸奎宁紫外灯下可看见硫酸奎宁溶液的强烈蓝色荧光。硫酸奎宁的鉴别实验绿奎宁反应NH3COHOHNHCH
8、HCH2Br2NHCHHNHOHOOCH2BrBrNHCHHNHOHHNHNCH2OHOHNH3H2O取本品约20mg,加水20ml溶解后,加溴试液3滴与氨试液1ml,即显翠绿色。Fluorescence 早在十六世纪就在一种萤石的石头上被人们发现了,萤石主要是氟化钙,Ca常被Y和Ce等元素替代,此外还含有少量的Fe2O3,SiO2等,当光照射到石头上时它会发出绿色的光,因为萤石的英语是fluorite,因此当时英文把它改为fluorescence,就是荧光。有人讲我国古代的夜明珠就是萤石?1864年,Stokes首先提出荧光作为一种分析手段 测荧光一定要有仪器,Stocks发明的是第一台最原
9、始的仪器。我们现在用氙灯代替太阳,氙灯会发出非常强大的宽光谱光源,然后通过一个单色仪,把氙灯发出的光分成一束一束的单色光。这里的氙灯就好比是太阳,而单色仪就好比是教堂的玻璃片。现在虽然仪器现代化了,但还是脱离不了Stock设计的模式,只不过装置复杂了一点。能用好的仪器出好文章和成果,当然是好事情。如果你能用一般的仪器做,而不是最先进仪器,研究出漂亮成果,那才是真正的成就。2002年诺贝尔化学奖得主Koichi Tanaka(田中耕一),在岛津公司中居然也只是一个排在晋升阶梯的倒数第二层的普通职员。2008年12月10日,日本理论物理学家益川敏英,:“I am sorry I cant spea
10、k English”,开始用日语讲述。几乎从来不说英语,与外国同行的交流需要翻译的帮助,而他和妻子来到斯德哥尔摩领奖竟然是他们有生之年的第一次出国旅行!绝大多数论文都发表在日本自办的英文专业期刊理论物理学进展(Progress of Theoretical Physics)荧光发展历程 第一次记录荧光现象:1575年,西班牙内科医生、植物学家,N.Monardes,一种称为“Lignum Nephriticum”的木头切片的水溶液,呈现“天蓝色”。荧光是光发射概念、引入荧光术语:1852年,Stokes,观察奎宁、叶绿素。提出用荧光作为分析手段:1864年,Stokes 第一个实际应用、铝一桑
11、色素荧光测定铝:1867年。荧光发展历程 1880年,Liebeman提出最早的关于荧光与化学结构关系的经验法则。19世纪末,已知包括荧光素、曙红、多环芳烃等600种以上的荧光化合物。20世纪以来,荧光现象被研究的更多了。如:1905年Wood发现了共振荧光;1914年Frank和Hertz利用电子冲击发光进行定量研究;1922年Frank和 Cario发现了增感荧光;1924年Wawillous进行了荧光产率的绝对测定;1926年Gaviola进行了荧光寿命的直接测定等。荧光发展历程 19世纪以前,肉眼观察。1928年,Jette和West提出了第一台光电荧光计,灵敏度很低。1939年Zwo
12、rykin和Rajchman发明光电倍增管。1943年Dutton和Bailey提出了一种荧光光谱的手工校正步骤。1948年Studer推出了第一台自动光谱校正装置。1952年:商品化的荧光校正光谱仪器。荧光发展历程 随着激光、微处理机和电子学等科学的发展,促进了荧光分析理论的发展,许多新技术如:同步荧光测定、导数荧光测定、时间分辨荧光测定、相分辨荧光测定、荧光偏振测定、荧光免疫测定、低温荧光测定、固体表面荧光测定、荧光反应速率法、三维荧光光谱技术、荧光传感器.荧光分析仪器 高效、痕量、微观和自动化发展。应用在工业、农业、医药卫生、环境保护、公安情报和科学研究等领域。中国荧光发展历程 50年代
13、初期仅有极少数的分析化学工作者从事荧光分析的研究。70年代后期,引起广泛重视,第一本荧光专著荧光分析法,陈国珍教授主编,1975年4月科学出版社出版。1990年第二版荧光分析法,陈国珍、黄贤智、许金钩等教授主编,科学出版社出版。2006 年7月,许金钩,王尊本,第三版荧光分析法,科学出版社出版。陈国珍教授(1916-2000)福建厦门人,1938年毕业于厦门大学化学系,1951年获英国伦敦大学哲学博士学位。历任厦门大学化学系主任、教授、校长助理,第二机械工业部生产局总工程师、副局长,国家海洋局副局长。提供质量符合要求的铀235材料,解决铀-235中含量低至百万分之一或亿分之一级的杂质的分析问题
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