甲型肝炎病毒IgM抗体测定ppt课件.ppt

1、甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法)酶联免疫吸附试验（ELISA法）?将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同的步骤加入待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)，充分反应后用洗涤的方法，使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗去游离的酶标抗体(抗原)，最后加入底物，根据酶对底物催化的显色反应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定性或定量。ELISA类型?夹心法?间接法测抗体?竞争法?捕获法 捕获法测IgM抗体 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法。?（1）包被抗体：用抗人 链抗体包被固相载体上,形成固相抗人 链;?（

2、2）加入病人的血清标本;?（3）加入特异性抗原试剂;，?（4）加入针对特异性抗原的酶标抗体，?（5）加底物显色 免疫球蛋白的结构 一、基本结构：四肽链结构 由两条相同的轻链（Light Chain）和两条相同的重链（Heavy chain）通过链间二硫键连结形成。分子式为：H2L2 四条肽链两端游离的NH2和COOH 方向一致分别命名为N端和C端（一）轻链和重链（一）轻链和重链 轻链（L链）链 链 轻链决定型别 型 型 正常人：2 ：1 重链（H链）:根据其抗原性的差异，人类 Ig 的H链分为?链?链?链?链?链 重链决定Ig 类别 IgG IgA IgM IgD IgE 捕获法?主要用于 血

3、清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。实验原理实验原理?用抗人链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IgM类抗体，然后用特异性 HAVAg与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体，最后加底物显色，显色深浅与 HAVIgM的含量成正相关。试剂盒组成?1 抗-链包被干板条 412 孔?2 抗-HAVIgM 阴性对照 1 ml1 瓶?3 抗-HAVIgM 阳性对照 1 ml1 瓶?4 HA-Ag 2.6 ml1 瓶?5 酶结合物 2.6 ml1 瓶?6浓缩洗涤液 20 ml1 瓶（用蒸馏水 1：20 稀释）?7 显色剂 A 3 ml1 瓶?8 显色剂 B 3 ml1 瓶?9 终止液 3 ml1瓶 操作步骤

4、操作步骤?1将微孔条固定在支架上，按顺序编号。?2分别将待测标本，阴、阳性对照100l（2滴）加入相应的孔中，设空白对照孔。置3720分钟。?3洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。?4每孔加HAAg50l，酶结合物50l（空白对照除外），振荡混匀，置 3720分钟。?5洗涤：重复上述3?6显色：每孔加显色剂 A液50l，再加显色剂B液50l，振荡混匀，置3715分钟。?7.每孔加终止液50l 结果判定结果判定?酶标仪读数：450nm波长630nm副波长读数，?临界值=阴性对照孔 OD 均值 2.1(阴性对照 OD 小于 0.05 以 0.05 计算)?结果

5、判定:S/CO1 为 HAV-IgM 阳性，?S/CO1，为阳性；S/CO值1，为阴性；竞争抑制法：若S/CO值1，为阴性。HAV HBV 肝炎病毒-HCV HDV HEV 其他（HGV、TTV）（SEN、TLMV）甲型肝炎急性期血清标志物出现过程 要点：1.HAV的传播途径(粪口)2.HAV的潜伏期(30天2周)3.血清标志物出现的规律 4.免疫学检测指标HAV Ag 抗HAV总抗体 抗HAV-IgM 临床意义?血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数日),抗体的效价很快升到峰值并持续较长时间(2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明显不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其是效价较高时,表明处于感染的早期,被公认为早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染还是慢性感染的有力佐证。思考题思考题?血清的类风湿因子及其它非特异IGM是影响捕获法检测中的主要物质，如何避免这些物质的影响？