药物分析课件第五章.ppt

1、 巴比妥类药物是环状酰脲类的镇静催眠药，巴比妥类药物是环状酰脲类的镇静催眠药，我们知道巴比妥类药物剂量由小到大，中枢我们知道巴比妥类药物剂量由小到大，中枢抑制作用相继表现为镇静、催眠、抗惊厥和抑制作用相继表现为镇静、催眠、抗惊厥和麻醉作用，其中苯巴比妥还具有抗癫痫的作麻醉作用，其中苯巴比妥还具有抗癫痫的作用用。基本要求 一、掌握我国药典中巴比妥类药物的一、掌握我国药典中巴比妥类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉国外药典本类药物鉴别和含二、熟悉国外药典本类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。量测定的基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了

2、解本类药物的体内分析方法。一、结构特征与典型药物一、结构特征与典型药物n 巴比妥类药物是巴比妥酸的衍巴比妥类药物是巴比妥酸的衍生物，结构通式如下生物，结构通式如下CCCONONC OR1R2R3543216HH5,55,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5,55,5取代的硫代巴比妥类药物取代的硫代巴比妥类药物1,5,51,5,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物本类药物的结构可大致分为两个部分：本类药物的结构可大致分为两个部分：1.1.环状丙二酰脲环状丙二酰脲、1,31,3二酰亚胺基团二酰亚胺基团决定巴比妥类药物的特性决定巴比妥类药物的特性2.2.取代基部分取代基部分区别各种巴比妥类药物

3、区别各种巴比妥类药物CCCONONC OH5C2H5C2HH巴比妥CCCONONC OH5C2HH苯巴比妥CCCONONC ONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥钠CCCONONC ONaC2H5CHCH2CH2CH3CH3H异戊巴比妥钠NHNOOOHC2H5CH3CH2CH2CHCH3戊巴比妥戊巴比妥NNOOHSNaC2H5CH3CH2CH2CHCH3硫喷妥钠硫喷妥钠二、理化特征二、理化特征 1.1.性状性状 巴比妥类药物通常为白色结晶或者巴比妥类药物通常为白色结晶或者为结晶性粉末，具有一定的熔点。在空为结晶性粉末，具有一定的熔点。在空气中未定，加热都能升华。一般微溶或气中未定

4、，加热都能升华。一般微溶或极微溶于水，易溶于乙醇；其钠盐易溶极微溶于水，易溶于乙醇；其钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂。于水，难溶于有机溶剂。2.2.弱酸性弱酸性 巴比妥类药物的母核环状结构中含有巴比妥类药物的母核环状结构中含有1 1，3-3-二酰亚胺基团，能使其分子发生酮二酰亚胺基团，能使其分子发生酮式式-烯醇式互变异构，在水溶液中发生二烯醇式互变异构，在水溶液中发生二级电离，其反应式为：级电离，其反应式为：OR2R1HOONHNOR2R1HONNOR2R1HOONNOR2R1HOONNOH+H-H-H+pK1=8 pK2=12 由于本类药物具有由于本类药物具有弱酸性弱酸性（pKpKa a 值值

5、为为7.37.38.48.4）故可与强碱反应生成）故可与强碱反应生成水溶性的盐类，一般为钠盐。成盐水溶性的盐类，一般为钠盐。成盐反应为：反应为：CO NHCNCOOHR1R2+NaOHCO NHCNCOONaR1R2+H2O 由弱酸与强碱形成的巴比妥钠盐，其水由弱酸与强碱形成的巴比妥钠盐，其水溶液呈碱性，加酸酸化后，则析出结晶溶液呈碱性，加酸酸化后，则析出结晶性的游离巴比妥类药物，可用有机溶剂性的游离巴比妥类药物，可用有机溶剂将其提取出来。上述这些性质可用于巴将其提取出来。上述这些性质可用于巴比妥类药物的分离、鉴别、检查和含量比妥类药物的分离、鉴别、检查和含量测定。测定。3.3.水解反应水解反

6、应 巴比妥类药物及其钠盐的六元环状巴比妥类药物及其钠盐的六元环状结构比较稳定，遇酸、氧化剂、还原剂结构比较稳定，遇酸、氧化剂、还原剂时，一般情况下不会破裂，但与碱共沸时，一般情况下不会破裂，但与碱共沸时则水解开环，并产生时则水解开环，并产生氨气氨气。n(1)(1)巴比妥类药物的水解巴比妥类药物的水解 主要是酰亚胺基团的性质，与碱溶主要是酰亚胺基团的性质，与碱溶液共沸就可以水解生成氨气，生成的氨液共沸就可以水解生成氨气，生成的氨气可使红色石蕊试纸变蓝。反应式如下：气可使红色石蕊试纸变蓝。反应式如下：CONHCNCOOHR1R2+5NaOH+2Na2CO3COONaR1R2+2NH3 JP(14)

7、JP(14)采用这一反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥。采用这一反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥。(2)2)巴比妥类药物钠盐的水解巴比妥类药物钠盐的水解 本类药物钠盐的水溶性比较大，在本类药物钠盐的水溶性比较大，在吸湿的情况下也能水解。水解的速度与吸湿的情况下也能水解。水解的速度与温度和温度和pHpH值有关。室温和值有关。室温和pH10pH10以下以下时水时水解较慢，解较慢，pH11pH11以上以上随着碱度的增加水解随着碱度的增加水解速度也随之加快。速度也随之加快。OR2R1HONNONaR2R1R2R1CCOONaCONHCONH2CHCOONa+2NH3H2OH2O 4.4.与重金属反应与重金属反应 (

8、1)(1)与与AgAg+的反应的反应可溶性的可溶性的白色白色CONHCNCOCR1R2ONa+AgNO3+Na2CO3CONCNCOCR1R2ONaAg+NaHCO3NaNO3+NaNO3+CONCNCOCR1R2OAgAgAgNO3+CONCNCOCR1R2ONaAg(2)(2)与与CuCu2+2+的反应的反应巴比妥类药物巴比妥类药物 +铜吡啶试液铜吡啶试液吡啶吡啶紫色或紫紫色或紫色沉淀色沉淀硫喷妥钠硫喷妥钠 +铜吡啶试液铜吡啶试液吡啶吡啶绿色绿色CR1R2COCONHNHCO水吡啶CR1R2COCONNHC OH部分离子化CR1R2COCONNHCO-+H+N+CuSO42NNCu2+SO

9、42-CR1R2COCONNHC O-2+NNCu2+CR1R2COCONNHCOCR1R2COCONNHCOCuNN (3)(3)与与CoCo2+2+的反应的反应 这一反应的现象与铜盐反应的现象相这一反应的现象与铜盐反应的现象相似，均生成紫堇色配位化合物。本反应要似，均生成紫堇色配位化合物。本反应要求在求在无水的条件下进行无水的条件下进行，所用试剂均应不，所用试剂均应不含水分，以使反应灵敏，而且形成的有色含水分，以使反应灵敏，而且形成的有色产物也比较稳定，常用无水乙醇或甲醇；产物也比较稳定，常用无水乙醇或甲醇；钴盐为醋酸钴、硝酸钴或氧化钴；碱以有钴盐为醋酸钴、硝酸钴或氧化钴；碱以有机碱为好，

10、一般采用机碱为好，一般采用异丙胺异丙胺。CO NHCONHCOR1R22+Co2+4(CH3)2CHNH2+CoR2R1CONHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2(CH3)2CHN+H32(4)(4)与与HgHg2+2+的反应的反应NHNOOHR1R2OOR2R1HOONNOR2R1ONN+Hg(NO3)2-HNO3HgNO3HgNO3HgNO3NNOR1R2O+NH3 +H2OHgOHNNOR1R2OOHOHO NH4-+HNO3白色白色 5.5.与香草醛的反应与香草醛的反应 巴比妥类药物分子结构中丙二酰脲巴比妥类药物分子结构中丙二酰脲基团中氢比较活

11、泼，可与香草醛在浓硫基团中氢比较活泼，可与香草醛在浓硫酸存在下发生缩合反应，生成棕红色产酸存在下发生缩合反应，生成棕红色产物。物。BPBP（20002000）戊巴比妥采用此反应进）戊巴比妥采用此反应进行鉴别。行鉴别。加乙醇后，其反应产物可转变为加乙醇后，其反应产物可转变为NHNCH3(CH2)2CHH5C2CH3OOOOOOCH3H5C2CH3(CH2)2CHNNCHOCH3OHCHO+H2OHHHNNOOOCH3CH(CH2)2CH3C2H5OCH3OH棕红色棕红色OOCH3H5C2CH3(CH2)2CHNNCHNNOOCH3CH(CH2)2CH3C2H5OH HOOHOCH3 6.6.紫外

12、吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 主要特点主要特点：随着电离级数的不同，巴比：随着电离级数的不同，巴比妥类药物的紫外光谱会发生显著的变化。妥类药物的紫外光谱会发生显著的变化。也就是说，溶液也就是说，溶液pHpH值的不同以及取代基值的不同以及取代基的不同会对紫外光谱产生影响。的不同会对紫外光谱产生影响。A.H2SO4溶液溶液（0.05mol/L）B.pH9.9缓冲液缓冲液C.NaOH溶液溶液（0.1mol/L）巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱n 在在酸性溶液酸性溶液中，中，5 5，5-5-二取代和二取代和1 1，5 5，5 5三取三取代巴比妥类药物代巴比妥类药物不电离不电离，无明

13、显的紫外吸收峰；，无明显的紫外吸收峰；在在pH10pH10的碱性溶液中，发生一级电离，形成共的碱性溶液中，发生一级电离，形成共轭体系结构，在轭体系结构，在240nm240nm处出现最大吸收峰；在处出现最大吸收峰；在pH13pH13的强碱性溶液中，的强碱性溶液中，5 5，5-5-二取代巴比妥类药二取代巴比妥类药物发生二级电离，引起共轭体系延长，导致吸物发生二级电离，引起共轭体系延长，导致吸收峰向红移至收峰向红移至255nm255nm；1 1，5 5，5-5-三取代巴比妥类三取代巴比妥类药物药物，因，因1 1位取代基的存在，故不发生二级电离，位取代基的存在，故不发生二级电离，最大吸收峰仍位于最大吸

14、收峰仍位于240nm240nm。硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl HCl 溶液溶液 (0.1mol/L)(0.1mol/L)-NaOH NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L)(0.1mol/L)硫代巴比妥类药物硫代巴比妥类药物的紫外吸收光谱则不同，的紫外吸收光谱则不同，在酸性或碱性溶液中均有较明显的紫外吸收在酸性或碱性溶液中均有较明显的紫外吸收。在盐酸溶液（在盐酸溶液（0.1mol/L0.1mol/L）中，两个吸收峰分）中，两个吸收峰分别在别在287nm287nm和和238nm238nm；在氢氧化钠溶液；在氢氧化钠溶液（0.1mol/L0.1mol/L）中，两个吸收峰分别移至）

15、中，两个吸收峰分别移至304nm304nm和和255nm255nm。另外，在。另外，在pH13pH13的强碱性溶液的强碱性溶液中，硫代巴比妥类药物在中，硫代巴比妥类药物在255nm255nm处的吸收峰处的吸收峰消失，只存在消失，只存在304nm304nm处的吸收峰。处的吸收峰。7.7.色谱行为特征（主要用于鉴别）色谱行为特征（主要用于鉴别）（1 1）TLC:TLC:在硅胶在硅胶60F60F254254上点样，氯仿上点样，氯仿-丙酮丙酮（4:14:1）为展开剂，显色，在紫色背景上可观察）为展开剂，显色，在紫色背景上可观察到白色的斑点。一般采用对照品（或标准品）到白色的斑点。一般采用对照品（或标准

16、品）比较法，要求供试品斑点的比较法，要求供试品斑点的R Rf f值应与对照品斑值应与对照品斑点的一致。点的一致。（2 2）HPLC:HPLC:与对照品比较保留行为，主要是比与对照品比较保留行为，主要是比较保留时间和相对保留时间。较保留时间和相对保留时间。8.8.显微结晶显微结晶 巴比妥类药物可根据其本身或与某种试剂的反巴比妥类药物可根据其本身或与某种试剂的反应产物的特殊晶型，进行同类或不同类药物的鉴别。应产物的特殊晶型，进行同类或不同类药物的鉴别。此法亦适用于生物样品中微量巴比妥类药物的检验。此法亦适用于生物样品中微量巴比妥类药物的检验。（1 1）药物本身的晶形药物本身的晶形 取药物或从酸性溶

17、液中，用取药物或从酸性溶液中，用有机溶剂提取、经酸化、提取、纯化后，即生成相有机溶剂提取、经酸化、提取、纯化后，即生成相应巴比妥类药物的特殊结晶。在显微镜下观察结晶应巴比妥类药物的特殊结晶。在显微镜下观察结晶形状：巴比妥为长方形；苯巴比妥在开始时呈球形，形状：巴比妥为长方形；苯巴比妥在开始时呈球形，然后变成花瓣状的结晶。见课本然后变成花瓣状的结晶。见课本P101P101。（2 2）反应产物的晶形反应产物的晶形 鉴于某些巴比妥类药鉴于某些巴比妥类药物可与重金属离子反应，生成具有特殊晶形的物可与重金属离子反应，生成具有特殊晶形的沉淀。因此，可利用此特性进行鉴别。例如，沉淀。因此，可利用此特性进行鉴

18、别。例如，巴比妥可与硫酸铜巴比妥可与硫酸铜-吡啶试液进行反应，生成吡啶试液进行反应，生成十字形紫色结晶，如课本十字形紫色结晶，如课本P101P101图图5-45-4所示；苯所示；苯巴比妥反应后，则形成浅紫色细小不规则的或巴比妥反应后，则形成浅紫色细小不规则的或类似菱形的结晶；其他巴比妥类药物不能形成类似菱形的结晶；其他巴比妥类药物不能形成结晶，可利用这一特性来区分之。结晶，可利用这一特性来区分之。三、鉴别试验三、鉴别试验 1.1.丙二酰脲鉴别反应丙二酰脲鉴别反应 这一鉴别试验已经收载在中国药典这一鉴别试验已经收载在中国药典附录中的附录中的“一般鉴别试验一般鉴别试验”项下。包括项下。包括银盐反应

19、和铜盐反应，分别生成沉淀和银盐反应和铜盐反应，分别生成沉淀和呈色，反应。呈色，反应。1.1.丙二酰脲鉴别反应丙二酰脲鉴别反应 已经收载在中国药典附录中的已经收载在中国药典附录中的“一般鉴一般鉴别试验别试验”项下。包括银盐反应和铜盐反应，项下。包括银盐反应和铜盐反应，分别生成沉淀和呈色，反应的原理前面已经分别生成沉淀和呈色，反应的原理前面已经提到过，在此不再赘述。提到过，在此不再赘述。2.2.测定熔点测定熔点 巴比妥类的钠盐酸巴比妥类的钠盐酸 游离巴比游离巴比妥类药物妥类药物 过滤过滤 洗涤洗涤 干燥干燥 测熔点测熔点 例如：例如：司可巴比妥钠的鉴别司可巴比妥钠的鉴别 取本品取本品1g 1g 溶

20、解溶解 强力强力搅拌搅拌 加水煮沸溶解成澄清溶液加水煮沸溶解成澄清溶液 放冷放冷 过过滤滤 结晶在结晶在7070干燥后，熔点约为干燥后，熔点约为9797。苯巴比妥钠的鉴别苯巴比妥钠的鉴别 中国药典的方法：取本品约中国药典的方法：取本品约0.5g 0.5g 加水溶解加水溶解 加过量稀盐酸加过量稀盐酸 白色结晶白色结晶性沉淀性沉淀 过滤过滤 用水洗净沉淀用水洗净沉淀 105105干燥，干燥，熔点应为熔点应为174174178178。水水稀醋酸稀醋酸 巴比妥的鉴别巴比妥的鉴别 取本品取本品0.5g0.5g，加，加1mol/L1mol/L碳酸钠溶液碳酸钠溶液5ml5ml使溶解，加使溶解，加4.5%4.

21、5%（W/VW/V）对硝基氯苄的乙醇溶液）对硝基氯苄的乙醇溶液10ml10ml，在水浴上加热回流，在水浴上加热回流30min30min，放置，放置1h1h后，滤过，后，滤过，所得沉淀用乙醇进行重结晶后，在所得沉淀用乙醇进行重结晶后，在100105100105干燥，干燥，测定衍生物的熔点，应为测定衍生物的熔点，应为150150左右。巴比妥与对硝左右。巴比妥与对硝基氯苄的衍生化反应为：基氯苄的衍生化反应为：ONHNH5C2OOH5C2H5C2H5C2CH2ClNO2NO2OOCH2HOH+Na2CO3+NaHCO3+NaClNN 3.3.利用特殊取代基或元素的鉴别试验利用特殊取代基或元素的鉴别试验

22、 （1 1）利用不饱和取代基的鉴别试验）利用不饱和取代基的鉴别试验 具有不饱和取代基的巴比妥类药物，中国药典收载了司可巴比妥钠。其分具有不饱和取代基的巴比妥类药物，中国药典收载了司可巴比妥钠。其分子结构中含有烯丙基，可与碘、溴或高锰酸钾作用，发生加成或氧化反应，子结构中含有烯丙基，可与碘、溴或高锰酸钾作用，发生加成或氧化反应，而使碘、溴或高锰酸钾褪色而使碘、溴或高锰酸钾褪色。与与碘试液碘试液反应反应OHONNNaOCH2CH3CH3CH3CH3CH2NaONNOHO+I2II 与与高锰酸钾高锰酸钾的反应的反应 含不饱和取代基的巴比妥含不饱和取代基的巴比妥类药物，具有还原性，在碱性溶液中与高锰酸

23、钾类药物，具有还原性，在碱性溶液中与高锰酸钾反应，使紫色的高锰酸钾还原成棕色的二氧化锰。反应，使紫色的高锰酸钾还原成棕色的二氧化锰。OHONNNaOCH2CH3CH3CH3CH3CH2NaONNOHO+2KMnO4 +4H2OOH OH3+2MnO2 +2KOH3（2 2）利用芳环取代基的鉴别试验）利用芳环取代基的鉴别试验 硝化反应硝化反应 含芳香取代基的巴比妥类药物，如取含芳香取代基的巴比妥类药物，如取苯巴比妥或其钠盐，与苯巴比妥或其钠盐，与硝酸钾和硫酸硝酸钾和硫酸共热，可发生共热，可发生硝化反应，生成黄色硝基化合物。硝化反应，生成黄色硝基化合物。NHNOHOO+H3CH3C+OOHONHN

24、 2KNO3+H2SO4K2SO4+2H2OO2NNO2黄色黄色 与与硫酸硫酸-亚硝酸钠亚硝酸钠的反应的反应 苯巴比妥与硫酸苯巴比妥与硫酸-亚硝酸亚硝酸钠反应生成橙黄色产物，并随即转变为钠反应生成橙黄色产物，并随即转变为橙红色橙红色。本反。本反应确切的原理不清，可能为苯环上的亚硝基反应。此应确切的原理不清，可能为苯环上的亚硝基反应。此鉴别试验为中国药典收载的方法，可用于区别苯巴比鉴别试验为中国药典收载的方法，可用于区别苯巴比妥和其他不含苯环取代基的巴比妥类药物。妥和其他不含苯环取代基的巴比妥类药物。与与甲醛甲醛-硫酸硫酸的反应的反应 苯巴比妥与甲醛苯巴比妥与甲醛-硫酸反应，硫酸反应，生成生成玫

25、瑰红色玫瑰红色产物。此鉴别方法也为中国药典收载，产物。此鉴别方法也为中国药典收载，可用于区别苯巴比妥和其他巴比妥类药物。可用于区别苯巴比妥和其他巴比妥类药物。（3 3）硫元素的鉴别试验）硫元素的鉴别试验 巴比妥类分子结构中含有硫的药物，如硫喷巴比妥类分子结构中含有硫的药物，如硫喷妥钠，可将其硫元素转变为无机硫离子，而显妥钠，可将其硫元素转变为无机硫离子，而显硫化物的反应。如硫喷妥钠在氢氧化钠试液中硫化物的反应。如硫喷妥钠在氢氧化钠试液中与铅离子反应生成白色沉淀；加热后，沉淀转与铅离子反应生成白色沉淀；加热后，沉淀转变成黑色的硫化铅。此鉴别试验可用于硫代巴变成黑色的硫化铅。此鉴别试验可用于硫代巴

26、比妥类与巴比妥类药物的区别比妥类与巴比妥类药物的区别。四、特殊杂质检查四、特殊杂质检查 特殊杂质特殊杂质是指在特定药物的生产和贮存是指在特定药物的生产和贮存过程中引入的杂质。药物中特殊杂质的检过程中引入的杂质。药物中特殊杂质的检查主要是根据药物和杂质在物理化学性质查主要是根据药物和杂质在物理化学性质上的差异来进行的。我们分别以苯巴比妥上的差异来进行的。我们分别以苯巴比妥和司可巴比妥钠为例。和司可巴比妥钠为例。1.1.苯巴比妥的特殊杂质检查苯巴比妥的特殊杂质检查OHCl ONa ,CH3ONaC=OH2NH2N)(I)C2H5-C C2H5BrCOOC2H5COOC2H5COOC2H5COOC2

27、H5-CHHCl ,C2H5ONaOC2H5OC2H5O=CCOOC2H5COOC2H5-C=C-ONa-CH2COOC2H5C2H5OH,H2SO4CH2CONH2 NHNOHOH3CH3COHONN 水解酯化，缩合酸化 ，消除乙酰化环合酸析 （1 1）酸度（指示剂法）酸度（指示剂法）NHNOOOHHC6H5 酸度的检查主要是控制副产物苯基酸度的检查主要是控制副产物苯基丙二酰脲。苯基丙二酰脲是由于中间丙二酰脲。苯基丙二酰脲是由于中间体（体（）的乙基化反应不完全，而与）的乙基化反应不完全，而与脲素缩合生成的。因其分子中脲素缩合生成的。因其分子中5 5 位碳位碳原子上的氢受相邻丙羧基的影响，致原

28、子上的氢受相邻丙羧基的影响，致使酸性比苯巴比妥强，能使甲基橙指使酸性比苯巴比妥强，能使甲基橙指示剂呈红色。示剂呈红色。（2 2）溶液的澄清度）溶液的澄清度 本项检查主要是控制苯巴比妥中本项检查主要是控制苯巴比妥中乙醇不溶乙醇不溶性杂质性杂质，利用苯巴比妥酸这些杂质在乙醇溶，利用苯巴比妥酸这些杂质在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小的特性进行检查液中的溶解度比苯巴比妥小的特性进行检查。（3 3）中性或碱性物质）中性或碱性物质 中性或碱性物质是由中间体（中性或碱性物质是由中间体（）形成的酰胺、）形成的酰胺、酰脲或分解产物等杂质，不溶于氢氧化钠试液酰脲或分解产物等杂质，不溶于氢氧化钠试液但但溶溶于乙醚；

29、而苯巴比妥具有酸性，溶于氢氧化钠试液，于乙醚；而苯巴比妥具有酸性，溶于氢氧化钠试液，故采用提取重量法测定其含量。故采用提取重量法测定其含量。检测方法为：取检测方法为：取本品本品1.0g 1.0g 置分液漏斗中置分液漏斗中 加氢氧化钠试液加氢氧化钠试液10ml10ml溶解溶解 加水加水5ml5ml与乙醚与乙醚25ml 25ml 分取醚层分取醚层 用水振摇洗涤用水振摇洗涤3 3次（每次次（每次5ml5ml）取醚液过滤取醚液过滤 滤滤液于液于105105蒸干，在蒸干，在105105干燥干燥1h1h，遗留残渣不得过，遗留残渣不得过3mg3mg。2.2.司可巴比妥钠的特殊杂质检查司可巴比妥钠的特殊杂质检

30、查+HBrNaOCH2 NaOH,C2H5ONa,CH3COCH3CH3CHBrCH2Br,NaOH CH3CH3NNOHOCH3CH3NNOHOHOHOHH +HH2NCONH2,C2H5ONaCOOC2H5COOC2H5H CCH3CH3CH2CH2CH CH3CH2CH2CHCH3,C2H5ONaCOOC2H5COOC2H5CH2 OHONNCH3CH3CH3CH3CH2NaONNOHO缩合环合丙烯化成盐（1 1）溶液的澄清度）溶液的澄清度 此项检查主要是控制水不溶性杂质，巴比妥类此项检查主要是控制水不溶性杂质，巴比妥类药物的钠盐极易溶于水，因此本品的水溶液应澄清，药物的钠盐极易溶于水，

31、因此本品的水溶液应澄清，否则表明含有水不溶性杂质。否则表明含有水不溶性杂质。需注意的是需注意的是，因本品的水溶液易与空气中的二，因本品的水溶液易与空气中的二氧化碳作用，而析出司可巴比妥，故进行该项目检氧化碳作用，而析出司可巴比妥，故进行该项目检查时，溶解样品的水应新沸放冷以消除水中二氧化查时，溶解样品的水应新沸放冷以消除水中二氧化碳的干扰。碳的干扰。（2 2）中性或碱性物质）中性或碱性物质 检查的杂质是合成过程中产生的中性或碱性副产检查的杂质是合成过程中产生的中性或碱性副产物以及司可巴比妥钠的分解产物，如酰脲（物以及司可巴比妥钠的分解产物，如酰脲（）、酰）、酰胺（胺（）类化合物。）类化合物。N

32、aOCH2CH3CH3NNOHOCH2=CHCH2CH3CH2CH2CH CONHCONH2COONaH2OCCH3CH2=CHCH2CHCONHCONH2CH3CH2CH2CHCH3CH3CH3CH2CH2CHCH2=CHCH2CHCONH2()()五、含量测定五、含量测定 银量法银量法 溴量法溴量法 巴比妥类药物的含巴比妥类药物的含 酸碱滴定法酸碱滴定法 量测定方法量测定方法 紫外分光光度紫外分光光度 提取重量法提取重量法 HPLCHPLC法、法、GCGC法法 （一）（一）银量法银量法 基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，可与银离子定量成盐，可采用银量法

33、测定本可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。中国药典均采用银量法测定其含量。优点优点：操作简便，专属性较强。：操作简便，专属性较强。缺点缺点：受温度影响较大；滴定终点以溶液出：受温度影响较大；滴定终点以溶液出现浑浊为终点指示难以观察。现浑浊为终点指示难以观察。1.1.原理原理 反应摩尔比：反应摩尔比：1:11:1 溶剂系统：甲醇溶剂系统：甲醇3 3无水碳酸钠无水碳酸钠 终点指示：电位法指示（终点指示：电位法指示（

34、AgAg玻璃电极系统）玻璃电极系统）自身指示法自身指示法 2.2.测定方法与计算测定方法与计算 例如例如:异戊巴比妥及其钠盐的测定：异戊巴比妥及其钠盐的测定：取本品约取本品约0.2g 0.2g 加甲醇加甲醇40ml40ml使溶解使溶解 新鲜配制的新鲜配制的3%3%无无水碳酸钠溶液水碳酸钠溶液15ml15ml，照电位法，用硝酸银滴定液，照电位法，用硝酸银滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，即得。每）滴定，即得。每1ml1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3（或

35、（或24.83mg24.83mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO3 3）。）。原料药：直接滴定法（容量分析法）原料药：直接滴定法（容量分析法）D%=%100%WTfVD 3.3.注意事项注意事项 （1 1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制 （2 2）硝酸银滴定液应新鲜配制）硝酸银滴定液应新鲜配制 （二）（二）溴量法溴量法 凡在凡在5 5位取代基含有不饱和键的巴比妥类药物，位取代基含有不饱和键的巴比妥类药物，其不饱和键能与溴定量地发生加成反应，故可采用其不饱和键能与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法测定其含量。中国药典收载的溴量法测定其含量。中国药典收载的司可

36、巴比妥钠司可巴比妥钠采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示：采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示：NaOCH2CH3CH3NNOHOOHONNCH3CH3CH2NaO+Br2Br Br（定量过量）（定量过量）Br2 +2KI 2KBr +I2（剩余）（剩余）I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6 溴滴定液的配制：溴滴定液的配制：取溴酸钾取溴酸钾3.0g3.0g与溴化钾与溴化钾15g15g，加水适量使，加水适量使之溶解成之溶解成1000ml1000ml，摇匀。，摇匀。反应的摩尔比：反应的摩尔比：1:21:2 司可巴比妥钠的测定方法：取本品约司可巴比妥钠的测定方法：取本品约

37、0.1g 0.1g 加加水水 1 0 m l1 0 m l 振 摇 使 溶 解振 摇 使 溶 解 精 密 加 溴 滴 定 液精 密 加 溴 滴 定 液（0.1mol/L0.1mol/L）25ml 25ml 盐酸盐酸5ml5ml，立即密塞并振摇，立即密塞并振摇1min1min，在暗处静置，在暗处静置15min 15min 加加KIKI试液试液10ml 10ml 摇摇匀匀 用硫代硫酸钠滴定液（用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每失，并将滴定的结果用

38、空白试验校正。每1ml1ml溴溴滴 定 液（滴 定 液（0.1 m o l/L0.1 m o l/L）相 当 于）相 当 于 1 3.0 1 m g1 3.0 1 m g 的的C C1212H H1717N N2 2NaONaO3 3。原料药原料药 剩余滴定法剩余滴定法%100%WTfVVD样空mlmg01.132molg27.260Lmol1.0ncMT 注意事项：注意事项：（1 1）操作中要防止溴和碘的逸失。）操作中要防止溴和碘的逸失。（2 2）平行条件进行空白试验可以减少）平行条件进行空白试验可以减少溴和碘逸失带来的误差。溴和碘逸失带来的误差。（三）（三）酸碱滴定法（酸量法）酸碱滴定法（

39、酸量法）巴比妥类药物呈弱酸性，可作为一元酸以标巴比妥类药物呈弱酸性，可作为一元酸以标准碱液直接滴定，或在非水溶液中用强碱溶液直准碱液直接滴定，或在非水溶液中用强碱溶液直接滴定。常用的方法如下：接滴定。常用的方法如下：1.1.在在水乙醇混合溶剂水乙醇混合溶剂中滴定中滴定 基于本类药物在水中的溶解度较小，滴定时基于本类药物在水中的溶解度较小，滴定时多在醇溶液或含水的醇溶液中进行，这样可避免多在醇溶液或含水的醇溶液中进行，这样可避免反应中产生的弱酸盐易于水解而影响滴定终点。反应中产生的弱酸盐易于水解而影响滴定终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点

40、。例如例如：异戊巴比妥的含量测定异戊巴比妥的含量测定 取本品约取本品约0.5g0.5g，精密称定，加乙醇，精密称定，加乙醇20ml20ml溶溶解后，加麝香草酚酞指示剂解后，加麝香草酚酞指示剂6 6滴，用氢氧化钠滴，用氢氧化钠滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每白试验校正，即得。每1ml1ml氢氧化钠滴定液氢氧化钠滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3。原料药原料药 直接滴定法（有空白校正）直接滴定法（有空白校正）%

41、100)(%0WfVVTDT T滴定度，每滴定度，每1ml1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mgmg数数 V V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（滴定时，供试品消耗滴定液的体积（mlml）V VO O滴定时，空白消耗滴定液的体积（滴定时，空白消耗滴定液的体积（mlml）f f浓度校正因子浓度校正因子 2.2.在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定 表面活性剂是一种所谓表面活性剂是一种所谓“两亲两亲”分子，即其分子是分子，即其分子是由亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在由亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水溶液中水溶液中浓度很低时浓度很低时，基本上呈，基本上呈单分子

42、单分子状态存在，但状态存在，但当超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活当超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子性剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子组成数的聚集物，称为胶束或胶团。组成数的聚集物，称为胶束或胶团。胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。本法是在有机表面活性剂的胶束水溶液中本法是在有机表面活性剂的胶

43、束水溶液中进行滴定，用指示剂或电位法指示终点。常用进行滴定，用指示剂或电位法指示终点。常用的有机表面活性剂有：溴化十六烷基三甲基苄的有机表面活性剂有：溴化十六烷基三甲基苄铵铵(CTMA)(CTMA)和氯化四癸基二甲基苄铵和氯化四癸基二甲基苄铵(TDBA)(TDBA)。采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的相对标准差（相对标准差（RSDRSD）均小于）均小于0.3%0.3%，并优于在水，并优于在水-乙醇混合溶液中的滴定方法。乙醇混合溶液中的滴定方法。3.3.非水滴定法非水滴定法 巴比妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用巴比妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用碱性标准

44、溶液滴定时，终点较为明显，可获得比碱性标准溶液滴定时，终点较为明显，可获得比较满意的结果。测定时常用的有机溶剂有较满意的结果。测定时常用的有机溶剂有二甲基二甲基甲酰胺甲酰胺、甲醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、苯、吡、甲醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、苯、吡啶、甲醇啶、甲醇-苯（苯（1515?8585）、乙醇）、乙醇-氯仿（氯仿（1 1?1010）等；）等；常用的滴定剂有常用的滴定剂有甲醇钾甲醇钾（钠）的甲醇（或乙醇）（钠）的甲醇（或乙醇）溶液、氢氧化四丁基铵的氯苯溶液等；常用的指溶液、氢氧化四丁基铵的氯苯溶液等；常用的指示剂为示剂为麝香草酚蓝麝香草酚蓝等，也可用玻璃等，也可用玻璃-甘汞电极系甘汞电极系统，

45、以电位法指示终点。统，以电位法指示终点。（四）紫外分光光度法（四）紫外分光光度法 巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明显的紫外吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸显的紫外吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其收特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其含量。本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比含量。本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比妥类药物的妥类药物的原料及其制剂的含量测定原料及其制剂的含量测定，以及固体制，以及固体制剂的溶出度和含量均匀度检查，也常用于体内巴比剂的溶出度和含量均匀度检查，也常用于体内巴

46、比妥类药物的检测。妥类药物的检测。1.1.直接测定的紫外分光光度法直接测定的紫外分光光度法 本法是将供试品溶解后，根据溶液的本法是将供试品溶解后，根据溶液的pHpH，在最大吸收波长（在最大吸收波长（maxmax）处，直接测定对照）处，直接测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，再计算药物品溶液和供试品溶液的吸收度，再计算药物的含量。中国药典对注射用硫喷妥钠的含量的含量。中国药典对注射用硫喷妥钠的含量测定采用本法。测定采用本法。Beer-LambertBeer-Lambert定律定律 A=-A=-T=ElC ACT=ElC AC 单组分定量的方法单组分定量的方法：1.1.吸收系数法（绝对法）吸收系数

47、法（绝对法）clEA%1cm1lEAc1%1cm)g/100ml(100)g/ml(1%1cmlEAc 2.2.标准曲线法标准曲线法 3.3.对照法对照法lcElcEAA对供对供%1cm1%1cm1供对供对CCAA对对供供CAAC 教材中以注射用硫喷妥钠的含量测定为例：教材中以注射用硫喷妥钠的含量测定为例：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠（约相当于硫喷妥钠0.25g0.25g），置），置500ml500ml量瓶中，加水稀释量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%0.4%氢氧化钠溶液

48、定量稀释氢氧化钠溶液定量稀释制成每制成每1ml1ml中约含中约含5g5g的溶液；另取硫喷妥对照品，加的溶液；另取硫喷妥对照品，加0.4%0.4%氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml1ml中约含中约含5g5g的溶液。照分光光度法，在的溶液。照分光光度法，在304nm304nm波长处测定吸收度，根波长处测定吸收度，根据每支的平均装量计算。每据每支的平均装量计算。每1mg1mg硫喷妥相当于硫喷妥相当于1.091mg1.091mg的的C C1111H H1717N N2 2NaSNaS。091.110)3DCAAmg对对样硫喷妥钠（2.2.提取分离后的紫外分光光度法提

49、取分离后的紫外分光光度法 提取分离的提取分离的主要目的主要目的是消除干扰物质对测定的影响。根据是消除干扰物质对测定的影响。根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点。测定时取供试液适量，加酸酸化后，钠盐在水中易溶的特点。测定时取供试液适量，加酸酸化后，用氯仿提取巴比妥类药物。氯仿提取液加用氯仿提取巴比妥类药物。氯仿提取液加pH7.2pH7.27.57.5缓冲溶缓冲溶液，振摇，分离弃去水相缓冲液层。再用液，振摇，分离弃去水相缓冲液层。再用0.45mol/L0.45mol/L氢氧化钠氢氧化钠溶液提取氯仿层中的巴比

50、妥类药物，将碱提取液调节至适宜溶液提取氯仿层中的巴比妥类药物，将碱提取液调节至适宜pHpH，然后选择相应的吸收波长进行测定。，然后选择相应的吸收波长进行测定。USP USP（2424）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法 样品样品 溶解溶解 酸化酸化 氯仿提取氯仿提取 精密量取适量精密量取适量氯仿液氯仿液 蒸气浴上挥干蒸气浴上挥干 乙醇、乙醇、pH9.6pH9.6缓冲液缓冲液 供试品溶液（样品液）供试品溶液（样品液）苯巴比妥对照品苯巴比妥对照品 乙醇、乙醇、pH9.6pH9.6缓冲液缓冲液 标准溶液标准溶液（对照液）（对照液）240nm240nm为测定波长为测定波长对