需氧革兰阳性杆菌及检验1课件.ppt
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- 需氧革兰 阳性 杆菌 检验 课件
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1、需氧革兰阳性杆菌及需氧革兰阳性杆菌及检检验验华中科技大学同济医学院附属协和医院华中科技大学同济医学院附属协和医院熊熊 艳艳革兰阳性杆菌菌属间的鉴别革兰阳性杆菌菌属间的鉴别棒状杆菌棒状杆菌属属芽胞杆菌芽胞杆菌属属李斯特菌李斯特菌属属丹毒丝菌丹毒丝菌属属加特纳菌加特纳菌属属形态形态棒状棒状杆菌有芽杆菌有芽胞胞短杆、链短杆、链或丝状或丝状细杆或丝细杆或丝状状杆菌、多杆菌、多形性形性触酶触酶+ + + +- - -动力动力- -V V+ +- - -对氧对氧需氧,兼需氧,兼性厌氧性厌氧需氧,兼需氧,兼性厌氧性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧V V:炭疽芽胞杆菌阴性,其它芽胞杆菌阳性
2、。炭疽芽胞杆菌阴性,其它芽胞杆菌阳性。 第一节第一节棒状杆菌属棒状杆菌属棒状杆菌属的共同特征棒状杆菌属的共同特征1)革兰阳性多形态杆菌革兰阳性多形态杆菌2)无荚膜、无鞭毛、无芽胞无荚膜、无鞭毛、无芽胞3)细菌呈不规则栅栏状排列细菌呈不规则栅栏状排列4)需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧5)触酶试验阳性触酶试验阳性6)细胞壁结构和血清学分析,证实与分枝细胞壁结构和血清学分析,证实与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。一一白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌(一)生物学特性(一)生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抗原构造抗原构造l
3、抵抗力抵抗力2022-7-12形态与染色形态与染色 细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在列呈散在L L、V V、Y Y字形及不规则栅栏状。字形及不规则栅栏状。 用美蓝、用美蓝、NeisserNeisser法、法、AlbertAlbert法等染色时,法等染色时,在细菌的一端或两端有浓染的颗粒,此颗粒与在细菌的一端或两端有浓染的颗粒,此颗粒与菌体着色不同,称为菌体着色不同,称为异染颗粒异染颗粒,为本菌重要形,为本菌重要形态学特征,对鉴别细菌有重要意义。态学特征,对鉴别细菌
4、有重要意义。 2022-7-12培养特性培养特性 v需氧或兼性厌氧,生长温度为需氧或兼性厌氧,生长温度为1540,最适,最适生长温度为生长温度为3537,pH7.27.8。 v营养要求高,营养要求高,在普通培养基上虽能生长,但在普通培养基上虽能生长,但生长不良,形态不典型,大多需要特殊氨基酸。生长不良,形态不典型,大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速,在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速,形态典型,异染颗粒明显。形态典型,异染颗粒明显。 菌落特征菌落特征l血平板:灰白、狭窄血平板:灰白、狭窄溶血环。溶血环。l鸡蛋斜面和血清斜面:生长迅速,灰白色有光鸡蛋斜面和血清斜面
5、:生长迅速,灰白色有光泽菌落。泽菌落。l亚碲酸钾血平板:为选择培养基,菌落呈黑色。亚碲酸钾血平板:为选择培养基,菌落呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。菌落分为重型、轻型或中间型。2022-7-12生化反应生化反应触酶(触酶(+ +),氧化酶(),氧化酶(- -)能分解葡萄糖、麦芽糖、能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等果糖等,产酸不产气。,产酸不产气。不分解乳糖不分解乳糖、多数不分解蔗糖、多数不分解蔗糖。靛基质试验、明胶液化、尿素分解靛基质试验、明胶液化、尿素分解抗原构造抗原构造l菌体菌体O O抗原:与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。抗原:与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。lK K抗原:型特异性抗原,不耐热
6、。抗原:型特异性抗原,不耐热。抵抗力抵抗力l对湿热和一般消毒剂敏感。对湿热和一般消毒剂敏感。l对冷和干燥有一定抵抗力对冷和干燥有一定抵抗力。(二)致病性(二)致病性l致病物质:白喉外毒素致病物质:白喉外毒素l由携带由携带-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。l作用机制:抑制细胞内蛋白质的合成。作用机制:抑制细胞内蛋白质的合成。l经呼吸道飞沫传播,引起白喉。经呼吸道飞沫传播,引起白喉。l假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。l中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。(三)免疫性(三)免疫
7、性l抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。l成人绝大多数具有免疫性,主要由于隐性感成人绝大多数具有免疫性,主要由于隐性感染所获得的免疫力。染所获得的免疫力。l锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存在。存在。(四)微生物学检验(四)微生物学检验 l标本采集标本采集 l检验程序检验程序 l检验方法检验方法l生化反应生化反应l毒力试验毒力试验标本采集标本采集l用无菌长棉拭子,从疑为假膜的边缘用无菌长棉拭子,从疑为假膜的边缘采集分泌物。采集分泌物。 l未见假膜的疑似患者或带菌者可采集未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部
8、或扁桃体粘膜上的分泌物。鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。检验程序检验程序咽拭标本咽拭标本亚碲酸钾亚碲酸钾 血平板血平板观察菌落特征观察菌落特征 直接涂片直接涂片 革兰染色革兰染色异染颗粒染色异染颗粒染色血平板血平板 吕氏血清斜面吕氏血清斜面 直接涂片直接涂片 革兰染色革兰染色异染颗粒染色异染颗粒染色涂片染色镜检涂片染色镜检 生化反应生化反应 毒力试验毒力试验检验方法检验方法l标本直接涂片标本直接涂片 革兰染色:观察形态、染色性革兰染色:观察形态、染色性 异染颗粒染色:观察异染颗粒异染颗粒染色:观察异染颗粒 初步报告:检出形似白喉棒状杆菌初步报告:检出形似白喉棒状杆菌l分离培养分离培养 吕氏斜面:
9、生长迅速,涂片镜检异染颗粒明显吕氏斜面:生长迅速,涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板:黑色菌落亚碲酸钾血平板:黑色菌落生化反应生化反应根据根据糖发酵是否产酸糖发酵是否产酸可鉴别棒状杆菌可鉴别棒状杆菌中的不同种。中的不同种。白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产酸,不分解蔗糖;尿素酶(酸,不分解蔗糖;尿素酶()、硝酸盐)、硝酸盐还原试验(还原试验(+)等可用于与其他棒状杆菌)等可用于与其他棒状杆菌的鉴别。的鉴别。 毒力试验毒力试验l意义:是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据意义:是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据l方法方法 艾立克平板毒力试验艾立克平板毒力试验 对流电泳
10、法对流电泳法 协同凝集试验协同凝集试验 动物实验动物实验二二其他棒状杆菌其他棒状杆菌第二节第二节需氧芽胞杆菌属需氧芽胞杆菌属芽胞杆菌属共同特点芽胞杆菌属共同特点1)1)绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞菌体横径的芽胞2)2)除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力3)3)非抗酸性非抗酸性4)4)营养要求不高,在普通培养基上生长良营养要求不高,在普通培养基上生长良好好 一一炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌(一)生物学特性(一)生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抗原构造抗原构造
11、l抵抗力抵抗力2022-7-12形态与染色形态与染色 为致病菌中最大的革兰阳性杆菌,两端齐平为致病菌中最大的革兰阳性杆菌,两端齐平或凹陷,呈竹节状,单个或呈短链状排列。或凹陷,呈竹节状,单个或呈短链状排列。 无鞭毛,形成芽胞,有毒菌株可形成荚膜。无鞭毛,形成芽胞,有毒菌株可形成荚膜。 人工培养或在外界环境中易产生芽胞,在人工培养或在外界环境中易产生芽胞,在活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞,所活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞,所以以炭疽病尸体严禁解剖炭疽病尸体严禁解剖。2022-7-12培养特性培养特性 l需氧或兼性厌氧。需氧或兼性厌氧。l营养要求不高,营养要求不高,普通培养基上生长良好
12、普通培养基上生长良好。2022-7-12菌落特征菌落特征l普通琼脂平板:菌落扁平、粗糙,不透明灰白色,普通琼脂平板:菌落扁平、粗糙,不透明灰白色,无光泽,边缘不整齐,在低倍镜下可见到菌落边缘无光泽,边缘不整齐,在低倍镜下可见到菌落边缘呈呈卷发状卷发状。 l血液琼脂平板:培养血液琼脂平板:培养12121515h h,菌落周围菌落周围无溶血环无溶血环,18182424h h后可有后可有轻微溶血轻微溶血,而其他需氧芽胞杆菌大多,而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显而快速。数溶血明显而快速。l液体培养基中呈絮状生长液体培养基中呈絮状生长l明胶培养基中呈倒置的杉树明胶培养基中呈倒置的杉树l有毒株在有毒株在N
13、aHCONaHCO3 3培养基中形成荚膜,菌落呈粘液状,培养基中形成荚膜,菌落呈粘液状,有拉丝。有拉丝。 有毒株有毒株在在NaHCONaHCO3 3血琼脂平板上置血琼脂平板上置5%5%COCO2 2环境中培养环境中培养18182424h h,可产生荚膜,菌落由可产生荚膜,菌落由粗糙型变为粗糙型变为粘液型粘液型,而呈现半圆形,突起,而呈现半圆形,突起,有光泽的菌落。以接种针挑取时有光泽的菌落。以接种针挑取时呈拉丝状呈拉丝状,此为鉴别菌落要点,而无毒株则形成粗糙此为鉴别菌落要点,而无毒株则形成粗糙型菌落。型菌落。 生化反应生化反应分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,产酸不产分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,产酸不产
14、气。不分解乳糖。触酶(气。不分解乳糖。触酶(+),),VP(),),吲哚(吲哚(),尿素(),尿素()。抗原结构抗原结构1) 炭疽毒素炭疽毒素:由保护性抗原、致死因子、水肿因:由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成的蛋白质复合物,后两者单独不能发挥子组成的蛋白质复合物,后两者单独不能发挥生物活性作用,都必须与保护性抗原组合才能生物活性作用,都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。引起实验动物的水肿致死。具有抗吞噬作用和具有抗吞噬作用和免疫原性,故患炭疽后有免疫力。免疫原性,故患炭疽后有免疫力。2) 荚膜抗原荚膜抗原:与细菌毒力有关,失去荚膜后毒力:与细菌毒力有关,失去荚膜后毒力也就消失
15、。该抗原具有高度特异性,在临床诊也就消失。该抗原具有高度特异性,在临床诊断中有鉴别诊断价值。断中有鉴别诊断价值。2022-7-123)3)菌体抗原菌体抗原:耐热、耐腐败,耐热、耐腐败,无毒性,有种特异性。无毒性,有种特异性。4)4)芽胞抗原芽胞抗原:芽胞的外膜含有抗原决定簇,与皮质层:芽胞的外膜含有抗原决定簇,与皮质层一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原,此抗原一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原,此抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。具有免疫原性和血清学诊断价值。 Ascoli热沉淀反应热沉淀反应:感染动物尸体组织浸出液煮:感染动物尸体组织浸出液煮沸半小时后,耐热的菌体抗原不被破坏,能与特沸半
16、小时后,耐热的菌体抗原不被破坏,能与特异性抗体发生环状沉淀反应,称异性抗体发生环状沉淀反应,称Ascoli热沉淀反热沉淀反应,对炭疽病具有一定的诊断价值。应,对炭疽病具有一定的诊断价值。 抵抗力抵抗力 本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同,本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同,芽胞抵芽胞抵抗力很强抗力很强。在干燥的土壤或者皮毛中可存活。在干燥的土壤或者皮毛中可存活2020余余年。年。 芽胞对碘和氧化剂敏感。芽胞对碘和氧化剂敏感。 耐药性:本菌对磺胺类、青霉素、四环素、耐药性:本菌对磺胺类、青霉素、四环素、环丙沙星敏感。环丙沙星敏感。(二)致病性与免疫性(二)致病性与免疫性l致病物质:炭疽毒素、荚膜致病物质
17、:炭疽毒素、荚膜l所致疾病所致疾病经多途径感染,引起炭疽病。经多途径感染,引起炭疽病。临床类型:肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。临床类型:肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。属人畜共患传染病,死亡率高。属人畜共患传染病,死亡率高。l免疫性:病后可获得持久性免疫力,再次感染者免疫性:病后可获得持久性免疫力,再次感染者甚少。甚少。(三三)微生物学检验)微生物学检验l标本采集标本采集l检验程序检验程序l检验方法检验方法标本采集标本采集l标本采集标本采集病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。死亡病畜标本:死亡病畜标本:死于败血症的动物,严禁宰杀、死于败血症的动物,
18、严禁宰杀、解剖解剖,可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集,可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。少量血液。污染物品:皮革、兽毛、土壤等。污染物品:皮革、兽毛、土壤等。l标本处理标本处理:无杂菌污染标本直接接种,有杂菌:无杂菌污染标本直接接种,有杂菌污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。已处理标本已处理标本直接涂片直接涂片增菌培养增菌培养分离培养分离培养Ascoli试验试验革兰染色革兰染色荚膜染色荚膜染色初步报告初步报告血平板血平板戊烷脒琼脂平板戊烷脒琼脂平板可疑菌落可疑菌落菌落涂片菌落涂片染色镜检染色镜检鉴定试验鉴定试验肉汤培养肉汤培养动物实验动物实验
19、动物死亡动物死亡分离培养分离培养噬菌体裂解噬菌体裂解串珠试验串珠试验青霉素抑制试验青霉素抑制试验检验方法检验方法l涂片染色镜检涂片染色镜检革兰染色:涂片后升汞固定,革兰染色发现革革兰染色:涂片后升汞固定,革兰染色发现革兰阳性粗大杆菌、有荚膜,呈竹节样排列可初兰阳性粗大杆菌、有荚膜,呈竹节样排列可初步报告。步报告。l分离培养:分离培养:一般接种血平板,一般接种血平板,3737培养培养2424h h后后观察菌落特点。观察菌落特点。污染的标本先加热处理再接种。污染的标本先加热处理再接种。l动物试验:注射部位胶样水肿,肝脾肿大,出动物试验:注射部位胶样水肿,肝脾肿大,出血等。血等。在芽胞杆菌属中,除蜡
20、样芽胞杆菌毒素在芽胞杆菌属中,除蜡样芽胞杆菌毒素对动物有致病作用外,炭疽芽胞杆菌是唯一具对动物有致病作用外,炭疽芽胞杆菌是唯一具有致病力者。有致病力者。鉴定试验鉴定试验i.i. 青霉素抑制试验青霉素抑制试验 炭疽芽胞杆菌在含炭疽芽胞杆菌在含5 5 IU/mlIU/ml的青霉素培养基的青霉素培养基上能生长,而在含上能生长,而在含1010、100 100 IU/mlIU/ml的青霉素培的青霉素培养基上受到抑制不生长。养基上受到抑制不生长。鉴定试验鉴定试验ii.ii.串珠试验串珠试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别与类炭疽芽胞杆菌鉴别 炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后,在炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后,在形
21、态上发生明显的变化。形态上发生明显的变化。如将本菌幼稚培养物如将本菌幼稚培养物接种于含接种于含0.050.050.50.5U/mlU/ml青霉素的培养基上,青霉素的培养基上,376376h h,菌体肿大呈圆珠状,称串珠反应。菌体肿大呈圆珠状,称串珠反应。 此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成作用有关,为炭疽杆菌所特有,可用于与其他作用有关,为炭疽杆菌所特有,可用于与其他类炭疽类炭疽芽胞杆菌的鉴别。芽胞杆菌的鉴别。 鉴定试验鉴定试验iii.iii.青霉素和串珠联合试验青霉素和串珠联合试验iv.iv. 噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别与类炭疽芽
22、胞杆菌鉴别v.v. NaHCO NaHCO3 3毒力试验毒力试验 有毒力的炭疽杆菌形成荚膜,菌落呈粘液型,有毒力的炭疽杆菌形成荚膜,菌落呈粘液型,无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜,菌落呈粗糙型。无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜,菌落呈粗糙型。2022-7-12鉴定试验鉴定试验vi.vi.植物凝集素试验植物凝集素试验 根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受体的原理。体的原理。vii.vii.AscoliAscoli热沉淀试验热沉淀试验 用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的抗原。炭疽杆菌沉淀原具有耐高热特征,在尸抗原。炭疽杆菌沉淀原
23、具有耐高热特征,在尸体组织和皮毛中数年仍能检出,故可作追溯性体组织和皮毛中数年仍能检出,故可作追溯性诊断。诊断。炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别鉴别项目鉴别项目炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌及其蜡样芽胞杆菌及其它需氧芽胞杆菌它需氧芽胞杆菌形态形态菌体两端平整或凹陷菌体两端平整或凹陷两端钝圆两端钝圆两端钝圆两端钝圆荚膜荚膜+ +- - -动力动力- -+ + +菌落菌落有小突起,边缘呈卷有小突起,边缘呈卷发状,粘稠菌落发状,粘稠菌落锯齿状粗糙菌落锯齿状粗糙菌落蜡样或粗糙不粘稠蜡样或粗糙不粘稠菌落菌落肉汤肉汤絮状沉淀,上层清晰絮
24、状沉淀,上层清晰均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜AscoliAscoli+ +- - -溶血溶血不溶血或微溶血不溶血或微溶血+ + +串珠试验串珠试验+ +- - -二二蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌(一)生物学特性(一)生物学特性l形态与染色形态与染色l培养特性培养特性l菌落特征菌落特征l生化反应生化反应l抵抗力抵抗力形态与染色形态与染色 革兰阳性大杆菌,两端较钝、链杆状,革兰阳性大杆菌,两端较钝、链杆状,长短不一,有鞭毛,无荚膜,可形成芽长短不一,有鞭毛,无荚膜,可形成芽胞。胞。 2022-7-12培养特性培养特性 v需氧或兼性厌氧,营养要求不高。需氧或兼性厌氧,营养要求
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