免疫检测技术-ppt课件.ppt

1、网格学说网格学说（lattice theory）抗体过剩抗体过剩抗原过剩抗原过剩抗体抗体比例合适抗体抗体比例合适抗原抗原抗体抗体1.沉淀反应沉淀反应2.凝集反应凝集反应3.补体参与的反应补体参与的反应4.中和反应中和反应5.免疫标记技术免疫标记技术絮状沉淀絮状沉淀环状沉淀环状沉淀免疫浊度沉淀免疫浊度沉淀絮状沉淀试验絮状沉淀试验操作步骤：操作步骤：（1） 将可溶性抗原作一系列倍比稀释。将可溶性抗原作一系列倍比稀释。（2） 各管加入一定浓度的适量抗血清。各管加入一定浓度的适量抗血清。（3） 振摇使抗原、抗体充分混匀，置振摇使抗原、抗体充分混匀，置37孵育。孵育。（4） 产生沉淀量随抗原量而不同，以

2、出现沉淀物最多的管产生沉淀量随抗原量而不同，以出现沉淀物最多的管为最适比例管。为最适比例管。 絮状沉淀试验方法简单，设备要求低，敏感度较低，絮状沉淀试验方法简单，设备要求低，敏感度较低，目前目前多用以测定抗原抗体反应的最适比多用以测定抗原抗体反应的最适比。环状沉淀试验环状沉淀试验免疫电泳原理图解免疫电泳原理图解 颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块称为凝集反应。称为凝集反应。 加入标准量补体加入标准量补体 加入包被抗体的红细胞加入包被抗体的

3、红细胞 检测红细胞溶解情况检测红细胞溶解情况AgPatientsserum AbNo AbAg常见标记免疫技术常见标记免疫技术放射免疫技术放射免疫技术酶免疫技术酶免疫技术荧光免疫技术荧光免疫技术 30PPT课件放射免疫分析基本原理放射免疫分析基本原理竞争性结合反应的经竞争性结合反应的经典标记抗原（典标记抗原（AgAg* *）和）和非标记抗原（非标记抗原（AgAg）与限）与限量抗体量抗体(Ab(Ab) )竞争性结合竞争性结合AgAg* *和和AgAg具有等同的具有等同的与与AbAb结合能力结合能力32PPT课件 Ag* Ab Ag 标记抗原标记抗原 特异性抗体特异性抗体 待测抗原待测抗原( Ag

4、*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物抗原抗体复合物分离分离Ag*-Ab 和游离和游离Ag*从标准曲线上读知含量从标准曲线上读知含量 测定测定Ag*-Ab和游离和游离Ag*放射性放射性 放射免疫测定法放射免疫测定法(RIA)示意图示意图 7550 30 100110100 1000未标记抗原浓度（未标记抗原浓度（ng/mL)结合结合/未结合的放射活性（未结合的放射活性（%）Ag*-AbAg*Ag荧光素标记的荧光素标记的特异性抗体特异性抗体组织切片组织切片Ag荧光素标记荧光素标记的抗抗体的抗抗体组织切片组织切片待测抗体待测抗体免免 疫疫 荧荧 光光 染染 色色 显显 示示 细细 胞胞 骨骨

5、 架架 免疫荧光染色是利用抗原抗体特异性结免疫荧光染色是利用抗原抗体特异性结合的原理，用经合的原理，用经荧光染料标记的抗体荧光染料标记的抗体对细胞对细胞或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。该技术与荧光显微镜观察相结合，可对法。该技术与荧光显微镜观察相结合，可对特定的蛋白质进行细胞或组织内的精确定位。特定的蛋白质进行细胞或组织内的精确定位。常用于抗原、抗体标记的荧光染料有以下几种常用于抗原、抗体标记的荧光染料有以下几种显示绿色荧光：Fluorescein isothocyancie(FITC),Alexa-488显示红色荧光：Rhodamine B,

6、Texas Red, Alexa-546,568,594显示蓝色荧光：Alexa350 用Alexa488标记的抗人-tubulin抗体染色显示微管 ( 绿 色 ) ; 细 胞 核 : 红 色 , D A P I 染 色人皮肤角化细胞免疫荧光染色人皮肤角化细胞免疫荧光染色用抗-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色(激光共聚焦显微镜照片)PtK1细胞免疫荧光染色细胞免疫荧光染色固相的抗原或抗体（固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）免疫吸附剂）酶标记的抗原或抗体（酶标记的抗原或抗体（标记物）标记物）酶作用的底物（酶作用的底物（显色剂）显色剂）底物显色底物显色定性或定量

7、的分析定性或定量的分析原理原理包被包被反应反应加入待测抗体或加入待测抗体或抗原和酶标抗原抗原和酶标抗原或抗体或抗体洗涤洗涤使结合在固相上使结合在固相上的抗原抗体复合物的抗原抗体复合物与未结合的分离与未结合的分离1234基本步骤基本步骤适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心 46PPT课件47PPT课件020,00040,00060,00080,000100,000试剂盒试剂盒仪器仪器特殊防护特殊防护治理污染治理污染人民

8、币人民币人民币人民币三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用48PPT课件A. 将将Ab吸附在固相载体表面吸附在固相载体表面; B. 加入酶标加入酶标Ag和待测和待测Ag，竞争结合，竞争结合Ab； 对照只加入酶标对照只加入酶标Ag； C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差未知加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差未知Ag量。量。3 竞争法测定抗原竞争法测定抗原原理：原理：抗人抗人IgMIgM链抗体包被链抗体包被捕获待测标本中捕获待测标本中IgMIgM类抗体类抗体加入特异性抗原和酶标记特加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体异性抗原的抗体 底物显色底物显色 ABS-ELISA法法 ：固相支持物固相支持物；：样品；：样品；：特异性：特异性IgGIgG；：生物素化抗小鼠：生物素化抗小鼠IgG IgG （BiotinBiotin）；）；：辣根过氧化物酶：辣根过氧化物酶HRP-HRP-酶标链亲和素（酶标链亲和素（AvidinAvidin）；）；：DABDAB显色液；显色液；：显色；：显色；