免疫学应用-PPT课件.ppt

1、 ( (一一) )人工主动免疫：人工主动免疫： 是给机体接种疫苗或类毒素等抗原物是给机体接种疫苗或类毒素等抗原物质，刺激机体产生特异性免疫应答而获得质，刺激机体产生特异性免疫应答而获得免疫力的方法，也称预防接种。免疫力的方法，也称预防接种。 是给机体输入抗体，使机体获得特异性免疫力。可立即获得，但免疫维持时间短，2-3周，多用于治疗或紧急预防。 1、抗毒素 是抗细菌外毒素的抗体。多为马血清制剂。 具有双重性 （1 1）人丙种球蛋白人丙种球蛋白：从正常人血浆：从正常人血浆或健康产妇胎盘中提取制成。或健康产妇胎盘中提取制成。 （2 2）人特异性免疫球蛋白人特异性免疫球蛋白：来源于：来源于恢复期病人

2、及含高价特异性抗体供血恢复期病人及含高价特异性抗体供血者血浆，或接受类毒素和疫苗免疫者者血浆，或接受类毒素和疫苗免疫者的血浆。的血浆。1、免疫增强剂（免疫增强剂（IPAIPA）：）：是增强、促进和调节是增强、促进和调节机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。 免疫增强剂只对免疫功能低下者起作用免疫增强剂只对免疫功能低下者起作用免疫增强剂分类免疫增强剂分类2 2、免疫抑制剂、免疫抑制剂：是一类抑制机体免疫功：是一类抑制机体免疫功能的生物或非生物制剂。能的生物或非生物制剂。常见免

3、疫抑制剂种类常见免疫抑制剂种类第二节第二节 免疫学诊断免疫学诊断一、检测抗原和抗体的体外实验一、检测抗原和抗体的体外实验（一）体液免疫检测（血清学反应）（一）体液免疫检测（血清学反应）1、抗原抗体反应的特点：、抗原抗体反应的特点：特异性可逆性比例性阶段性抗体过剩抗体过剩比例适当比例适当抗原过剩抗原过剩抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系可逆性可逆性： 抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应的影响因素1 1、电解质浓度（多用生理盐水）电解质浓度（多用生理盐水）2 2、酸碱度（、酸碱度（pH: 6pH: 68 8）3 3、温度（、温度（3737）颗粒性抗

4、原颗粒性抗原( (细菌、红细胞等细菌、红细胞等) )与相应与相应抗体结合后形成凝集团块，这一类反应称抗体结合后形成凝集团块，这一类反应称为凝集反应为凝集反应(agglutination)(agglutination)。该类反应。该类反应可检测到可检测到ugug/ml/ml水平的抗体。水平的抗体。 1. 1. 直接凝集反应直接凝集反应细菌或红细菌或红细胞等颗细胞等颗粒性抗原粒性抗原 抗体抗体间接凝集和间接凝集抑制试验血清蛋白质、细胞裂解液等血清蛋白质、细胞裂解液等可溶性抗可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，原与相应抗体结合后出现沉淀物，此类反此类反应称为沉淀反应应称为沉淀反应(precipit

5、ation)(precipitation)。 沉淀反应：沉淀反应：单向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验用于用于Ig、C3等的定量测定等的定量测定沉淀反应：沉淀反应：双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验沉淀反应沉淀反应对流免疫电泳对流免疫电泳-+补体结合反应补体结合反应补体结合反应补体结合反应免疫标记技术免疫标记技术(immunolabelling(immunolabelling technique)technique) 是指用是指用荧光素、放射性核素、酶、荧光素、放射性核素、酶、发光剂或电子致密物质发光剂或电子致密物质( (胶体金、铁胶体金、铁蛋白蛋白) )作为示踪剂标记抗体或抗原进作为示踪剂标记抗体

6、或抗原进行的抗原抗体反应。行的抗原抗体反应。n 此类方法具有灵敏、特异、快此类方法具有灵敏、特异、快速，能够定性、定量甚至定位测定，速，能够定性、定量甚至定位测定，结果易于观察、适合自动化检测等结果易于观察、适合自动化检测等很多优点。广泛用于各种生物活性很多优点。广泛用于各种生物活性物质的分析鉴定与定量检测。物质的分析鉴定与定量检测。免疫标记技术：免疫标记技术： 免疫荧光技术免疫荧光技术免疫荧光直接法免疫荧光直接法免疫荧光间接法免疫荧光间接法免疫标记技术：免疫标记技术：免疫酶技术免疫酶技术1、包被抗体、包被抗体 洗洗2、加抗原、加抗原 洗洗3、加酶标抗体、加酶标抗体 洗洗4、加底物显色、加底物

7、显色1、包被抗原、包被抗原 洗洗2、加抗体、加抗体 洗洗3、加酶标抗球、加酶标抗球 蛋白蛋白 洗洗4、加底物显色、加底物显色ELISA双抗体夹心法双抗体夹心法ELISA间接法间接法免疫标记技术：免疫标记技术：放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIARIA） 放射免疫测定法（放射免疫测定法（RIARIA）是将放射性核）是将放射性核素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫标记技术。标记技术。免疫标记技术：免疫标

8、记技术：金免疫技术（金标法）金免疫技术（金标法） 金免疫技术是一处以胶体金作为标记物金免疫技术是一处以胶体金作为标记物的免疫标记技术。是目前应用广泛、简便、的免疫标记技术。是目前应用广泛、简便、快速的检验方法。快速的检验方法。细胞免疫检测细胞免疫检测T细胞总数测定细胞总数测定（1 1）E E花环试验：花环试验：正常情况下，外周正常情况下，外周血淋巴细胞中能形血淋巴细胞中能形成花环的细胞（即成花环的细胞（即T T细胞）约细胞）约60%-80%60%-80%。（2）荧光抗体染色）荧光抗体染色 从外周血分离单个从外周血分离单个核细胞（核细胞（PBM）后，用）后，用鼠抗人鼠抗人CD3的单克隆抗的单克隆

9、抗作第一抗体与作第一抗体与PBM结合，结合，再用荧光素（再用荧光素（FITC）标）标记的兔抗鼠记的兔抗鼠IgG抗体作抗体作第二抗体进行间接荧光第二抗体进行间接荧光染色。染色。细胞免疫检测细胞免疫检测T细胞亚群测定细胞亚群测定 用间接荧光法用间接荧光法检测检测CD4和和CD8 T细胞细胞 CD4/CD8正常正常比值为比值为1.7-2.01.7-2.0左左右。右。细胞免疫检测细胞免疫检测淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验-细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验B细胞的检测B B细胞数量的检测细胞数量的检测(1)(1)膜表面免疫球蛋白膜表面免疫球蛋白(SmIg(SmIg) )的检测：的检测：SmIg

10、SmIg是是B B细胞特有的表面标志，因此是鉴定细胞特有的表面标志，因此是鉴定B B细胞的可细胞的可靠指标。用抗靠指标。用抗SmIgSmIg抗体，借助直接免疫荧光法抗体，借助直接免疫荧光法或免疫组织化学法进行检测。或免疫组织化学法进行检测。(2)(2)间接免疫荧光法：间接免疫荧光法：应用针对应用针对B B细胞表面抗细胞表面抗原原(CDl9(CDl9、CD20CD20、CD21CD21、CD22CD22等等) )的特异性的特异性单克隆抗体，以间接免疫荧光法对单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B B细胞进细胞进行鉴定和计数。行鉴定和计数。B B细胞功能测定细胞功能测定B B细胞增生试验细胞增生试验 原

11、理与原理与T T细胞增生试验相同；细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆但刺激物主要为美洲商陆(PWM)(PWM)、富、富含含SPASPA的金葡菌、细菌脂多糖等。的金葡菌、细菌脂多糖等。体内免疫学检测体内免疫学检测（一）体液免疫检测（一）体液免疫检测 1 1、I I型超敏反应皮肤试验型超敏反应皮肤试验 用常见变应原作皮内注用常见变应原作皮内注射或划痕后，在射或划痕后，在2020分钟内引分钟内引起起红斑及丘疹红斑及丘疹。如。如超过超过1cm1cm或或无红肿但注射处有痒感，无红肿但注射处有痒感，或或全身有不适反应者全身有不适反应者均为阳均为阳性，反之为阴性。性，反之为阴性。2 2、中和反应皮肤

12、试验、中和反应皮肤试验 将微量外毒素注射于受试者前臂将微量外毒素注射于受试者前臂屈侧皮内，屈侧皮内，24-4824-48小时局部出现皮肤红小时局部出现皮肤红肿者为阳性反应，表示无免疫力。阴肿者为阳性反应，表示无免疫力。阴性反应为有免疫力。性反应为有免疫力。（二）细胞免疫检测（二）细胞免疫检测 以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，剌激体内致敏剌激体内致敏T T细胞分化增殖，释放淋巴细胞分化增殖，释放淋巴因子，引起局部皮肤的因子，引起局部皮肤的IVIV型超敏反应。型超敏反应。 1 1、特异性抗原皮肤试验：在受试者、特异性抗原皮肤试验：在受试者前臂内侧皮内注入少量可溶性抗原，前臂内侧皮内注入少量可溶性抗原，24-24-4848小时后，观察局部皮肤红肿硬结的大小时后，观察局部皮肤红肿硬结的大小。大于小。大于1cm1cm即为阳性，表示有细胞免疫即为阳性，表示有细胞免疫力。力。 2 2、植物血凝素（、植物血凝素（PHAPHA）皮试：）皮试： 将将PHAPHA注射于受试者前臂屈侧皮内，注射于受试者前臂屈侧皮内，6-126-12小时后局部出现红斑硬结，小时后局部出现红斑硬结，24-4824-48小时达高峰，即为阳性反应，常用于检小时达高峰，即为阳性反应，常用于检测细胞免疫水平。测细胞免疫水平。祝愿同学们前程似锦！