生物医学传感生物传感器课件.ppt
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1、生物传感器生物传感器上次课回顾上次课回顾n生物传感器的概述生物传感器的概述n生物传感器的基本组成和工作原理生物传感器的基本组成和工作原理n生物传感器的分类及特点生物传感器的分类及特点n生物敏感材料的固定化技术生物敏感材料的固定化技术n几种主要的生物传感器几种主要的生物传感器 n最先问世的生物传感器是最先问世的生物传感器是,19621962年年ClarkClark将酶与将酶与ISEISE结合,最先提出组成酶电极的设想。结合,最先提出组成酶电极的设想。n上世纪上世纪7070年代中期,人们注意到酶电极的年代中期,人们注意到酶电极的一般都比一般都比较较,提纯的,提纯的酶价格酶价格也较也较贵贵,而各种酶
2、多数都来自微生,而各种酶多数都来自微生物或动植物组织,因此自然地就启发人们研究物或动植物组织,因此自然地就启发人们研究:、以以及及等新型生物传感器,使生物传感器的类别大等新型生物传感器,使生物传感器的类别大大增多。大增多。n进入上世纪进入上世纪8080年代之后,随着年代之后,随着的不的不断完善,如断完善,如19801980年年CarasCaras和和JanafaJanafa率率先研制成功可测定先研制成功可测定青霉素的青霉素的。上世纪上世纪 生物传感器初期生物传感器初期 酶电极酶电极上世纪上世纪发展时期发展时期 微生物传感器,免疫微生物传感器,免疫传感器,细胞类脂质传传感器,细胞类脂质传感器,组
3、织传感器,生感器,组织传感器,生物亲和传感器物亲和传感器上世纪上世纪进入生物电子学进入生物电子学传感器时期传感器时期酶酶FETFET酶光二极管酶光二极管从整体划分从整体划分: :以以将生物成分截留在膜上或结合在膜将生物成分截留在膜上或结合在膜上上为基础,这类器件由为基础,这类器件由所组成,其实验设备相当简单。所组成,其实验设备相当简单。是指将是指将生物成分直接吸附或共价结合生物成分直接吸附或共价结合在转换器的表面在转换器的表面上,从而可略去非活性的基质膜。上,从而可略去非活性的基质膜。是是把生物成分直接固定在电子元件上把生物成分直接固定在电子元件上,例如例如FETFET的栅极上,它可直接感知和
4、放大界面物质的变的栅极上,它可直接感知和放大界面物质的变化,从而将生物识别和电信号处理集合在一起。这种放化,从而将生物识别和电信号处理集合在一起。这种放大器可采用差分方式以消除干扰。大器可采用差分方式以消除干扰。测定水质的测定水质的BODBOD分析仪分析仪、在市场上有以日本和德国、在市场上有以日本和德国为代表产品供应。为代表产品供应。2 2、采用丝网印刷和微电子技术的、采用丝网印刷和微电子技术的手掌型血糖分析器手掌型血糖分析器,已形成规模化生产,已形成规模化生产,年销售量约为十亿美元年销售量约为十亿美元;3 3、固定化酶传感分析仪固定化酶传感分析仪:国外以美国的:国外以美国的YSIYSI公司和
5、德公司和德国国BSTBST公司为代表,都有系列分析仪产品,它们主要公司为代表,都有系列分析仪产品,它们主要用于环境监测和食品分析,国内到目前为主只有山用于环境监测和食品分析,国内到目前为主只有山东省科学院生物研究所的系列化产品在市场得到应东省科学院生物研究所的系列化产品在市场得到应用。用。4 4、SPRSPR生物传感器生物传感器,在日、美、德、瑞典等国得到了,在日、美、德、瑞典等国得到了开发和初步应用。开发和初步应用。德国研发的环境废水德国研发的环境废水BODBOD分析仪分析仪SBA-60SBA-60型生物传感在线分析系统,为发酵自动型生物传感在线分析系统,为发酵自动控制提供了新的基础平台控制
6、提供了新的基础平台在我国发酵工厂普及应用的在我国发酵工厂普及应用的SBA-40SBA-40型型谷氨酸谷氨酸- -葡萄糖双功能分析仪葡萄糖双功能分析仪工厂发酵车间化验工厂发酵车间化验员正在分析样品员正在分析样品生物敏感膜(生物敏感膜(分子识别元件)分子识别元件)-决定传感器的功能和质量决定传感器的功能和质量物理或化学转换器(物理或化学转换器(换能器换能器)(1 1)生物敏感膜(分子识别元件)生物敏感膜(分子识别元件)由由生物活性材料生物活性材料作为敏感基元构成。作为敏感基元构成。酶、抗体、抗原、细胞、生物组织、酶、抗体、抗原、细胞、生物组织、DNADNA等等酶酶 (Enzyme)(Enzyme)
7、抗体抗体(Antibody)(Antibody)DNADNA几种主要的几种主要的生物活性材料生物活性材料及反应及反应酶膜酶膜全细胞膜全细胞膜组织膜组织膜细胞器膜细胞器膜免疫功能膜免疫功能膜各类酶类各类酶类细菌,真菌,动植物细胞细菌,真菌,动植物细胞动植物组织切片动植物组织切片线粒体,叶绿体线粒体,叶绿体抗体,抗原,酶标抗原等抗体,抗原,酶标抗原等将各种生物的、化学的和物理的信将各种生物的、化学的和物理的信号转换为可输出的有用信号(号转换为可输出的有用信号(电信号)电信号)。当待测物与分子识别元件特异性结合后,当待测物与分子识别元件特异性结合后,所产生的复合物所产生的复合物转变为可输出的电信转变
8、为可输出的电信号、光信号等号、光信号等。 电化学电极、光学检测元件、场效应电化学电极、光学检测元件、场效应晶体管、压电石英晶体、表面等离子共振等。晶体管、压电石英晶体、表面等离子共振等。v将将化学变化化学变化转变成电信号(间接型)转变成电信号(间接型)v将将热变化热变化转换为电信号(间接型)转换为电信号(间接型)v将将光效应光效应转变为电信号(间接型)转变为电信号(间接型)v直按产生电信号方式(直接型)直按产生电信号方式(直接型) 为例,酶催化特定底物发生反应为例,酶催化特定底物发生反应, ,从而从而使特定使特定生成物的量有所增减生成物的量有所增减,用能把这类物质的量的,用能把这类物质的量的改
9、变转换为电信号的装置和固定化酶耦合,即组成酶改变转换为电信号的装置和固定化酶耦合,即组成酶传感器。传感器。 常用转换装置有:常用转换装置有:氧电极、过氧化氢电极氧电极、过氧化氢电极。固定化的生物材料与相应的被测物作用时常固定化的生物材料与相应的被测物作用时常。例如大多数酶反应的热焓变化量在。例如大多数酶反应的热焓变化量在25-25-100kJ/mol100kJ/mol的范围的范围. .这类生物传感器的工作原理是把反应这类生物传感器的工作原理是把反应的的热效应借热敏电阻转换为阻值的变化热效应借热敏电阻转换为阻值的变化,后者通过有放,后者通过有放大器的电桥输入到记录仪中。大器的电桥输入到记录仪中。
10、例如,过氧化氢酶能催化过氧化氢例如,过氧化氢酶能催化过氧化氢/ /鲁米诺体系鲁米诺体系发发光光,如设法将过氧化氢酶膜附着在光纤或光敏二极管的,如设法将过氧化氢酶膜附着在光纤或光敏二极管的前端,再和光电流测定装置相连,即可测定过氧化氢含前端,再和光电流测定装置相连,即可测定过氧化氢含量。还有很多细菌能与特定底物发生反应,产生量。还有很多细菌能与特定底物发生反应,产生荧光荧光,也可以用这种方法测定底物浓度。也可以用这种方法测定底物浓度。上述三原理的生物传感器上述三原理的生物传感器共同点共同点: 都是将分子识别元件中的生物敏感物质与待测物发都是将分子识别元件中的生物敏感物质与待测物发生化学反应,将反
11、应后所产生的生化学反应,将反应后所产生的化学或物理变化化学或物理变化再通过再通过信号信号转换器转变为电信号转换器转变为电信号进行测量,这种方式统称为进行测量,这种方式统称为。 这种方式可以使这种方式可以使酶反应伴随的电子转移酶反应伴随的电子转移、微生微生物细胞的氧化物细胞的氧化直接直接( (或通过电子递体的作用或通过电子递体的作用) )在电极在电极表面上发生。根据所得的表面上发生。根据所得的电流量即可得底物浓度电流量即可得底物浓度。 例:例:CassCass等提出一种测定葡萄糖的传感器,是用等提出一种测定葡萄糖的传感器,是用二二茂络铁茂络铁为电子传递体。为电子传递体。换能器换能器(Transd
12、ucerTransducer)感受器感受器(ReceptorReceptor)测量信号测量信号(Measurable Measurable SignalSignal)= =分析物分析物(AnalyteAnalyte)溶液(溶液(SolutionSolution)选择性膜(选择性膜(Thin selective Thin selective membranemembrane)识别元件(识别元件(RECOGNITIONRECOGNITION)生物传感器工作机理生物传感器工作机理 固定化酶固定化酶 固定化固定化 微生物微生物 固定化免疫物质固定化免疫物质 固定化细胞器固定化细胞器 生物组织切片生物组
13、织切片微生微生物传物传感器感器分子识分子识别元件别元件酶传感器酶传感器免疫传感器免疫传感器细胞器传细胞器传感器感器组织传组织传感器感器 电化学电极电化学电极 光学换能器光学换能器 介体介体 半导体半导体 传递系统传递系统 换能器换能器 热敏电阻热敏电阻 压电晶体压电晶体介体生物传感器介体生物传感器换能器半导体生物半导体生物传感器传感器生物电极生物电极光生物传感器光生物传感器热生物传感器热生物传感器压电晶体生物传感器压电晶体生物传感器1 1) 根据生物反应的特异性和多样性,理论上可以制成测根据生物反应的特异性和多样性,理论上可以制成测定所有生物物质的传感器,因而定所有生物物质的传感器,因而。2
14、2)一般)一般,它利用本身具备的优异选,它利用本身具备的优异选择性把样品中被测组分的分离和检测统一为一体,测定择性把样品中被测组分的分离和检测统一为一体,测定时一般不需另加其他试剂,使测定过程简便迅速,容易时一般不需另加其他试剂,使测定过程简便迅速,容易实现自动分析。实现自动分析。3 3)固定化的目的固定化的目的:将生物敏感物质限制在一定的空间,但:将生物敏感物质限制在一定的空间,但又不妨碍被分析物的自由扩散。又不妨碍被分析物的自由扩散。:把生物活性材料与把生物活性材料与固定化成为生物敏固定化成为生物敏 感膜。感膜。物理方法物理方法:吸附法、夹心法、包埋法;:吸附法、夹心法、包埋法;化学方法化
15、学方法: : 共价连接法、交联法;共价连接法、交联法;1.1. 近年来近年来, , 由于半导体生物传感器迅速发展由于半导体生物传感器迅速发展, , 因而又因而又出现了出现了采用集成电路工艺制膜技术采用集成电路工艺制膜技术。n将生物活性材料封闭在双层滤将生物活性材料封闭在双层滤膜之间,形象地称为夹心法。膜之间,形象地称为夹心法。n特点是:特点是:操作简单,不需要任操作简单,不需要任何化学处理,固定生物量大,何化学处理,固定生物量大,响应速度快,重复性好。响应速度快,重复性好。离子交换吸附法:离子交换吸附法:选用具有离子交换性质的载体,在适宜的选用具有离子交换性质的载体,在适宜的PHPH条件下,使
16、生物分子与离子交换剂通过离子键结合,形成条件下,使生物分子与离子交换剂通过离子键结合,形成固定化层。固定化层。2 2)吸附法)吸附法 用非水溶性载体用非水溶性载体物理吸附物理吸附或或离子离子结合结合,使蛋白质分子固定化的方法。,使蛋白质分子固定化的方法。物理吸附:物理吸附:通过极性键、氢键、疏水力或通过极性键、氢键、疏水力或 电子的相互作电子的相互作用将生物组分吸附在不溶性的惰性载体上用将生物组分吸附在不溶性的惰性载体上。n把生物活性材料包埋并固定在把生物活性材料包埋并固定在高分子聚合物三维空间网状结高分子聚合物三维空间网状结构基质中。构基质中。n特点是:特点是:一般不产生化学修饰,一般不产生
17、化学修饰,对生物分子活性影响较小;缺对生物分子活性影响较小;缺点是分子量大的底物在凝胶网点是分子量大的底物在凝胶网格内扩散较固难。格内扩散较固难。n使生物活性分子通过使生物活性分子通过共价键共价键与固相载体结合固定的方法。与固相载体结合固定的方法。n特点特点是结合牢固,生物活性是结合牢固,生物活性分子不易脱落,载体不易被分子不易脱落,载体不易被生物降解,使用寿命长;生物降解,使用寿命长;n缺点缺点是实现固定化麻烦,酶是实现固定化麻烦,酶活性可能因发生化学修饰而活性可能因发生化学修饰而降低。降低。 借助于双功能试剂的作用,使蛋白质结合到惰性借助于双功能试剂的作用,使蛋白质结合到惰性载体或使蛋白质
18、分子彼此交联,形成不溶性网状结构载体或使蛋白质分子彼此交联,形成不溶性网状结构的方法。的方法。 一种能在低温低压下制成高密度、分子排列方向一种能在低温低压下制成高密度、分子排列方向一致的单分子层或双分子层超薄膜的技术。一致的单分子层或双分子层超薄膜的技术。 酶生物传感器酶生物传感器一、酶的本质和特征一、酶的本质和特征(一)(一) 酶的本质酶的本质酶是生物体内产生的、具有酶是生物体内产生的、具有催化活性催化活性的一类的一类蛋白质蛋白质酶酶纯蛋白酶纯蛋白酶:只含有蛋白质:只含有蛋白质结合蛋白酶结合蛋白酶蛋白质蛋白质+ +非非蛋白质蛋白质辅基辅基:非蛋白部分与酶蛋白结合:非蛋白部分与酶蛋白结合的牢固
19、,不易分离的牢固,不易分离辅酶:辅酶:结合的不牢,可在溶液中结合的不牢,可在溶液中离解离解(组合)(组合)酶(催化反应类型)酶(催化反应类型)氧化还原酶氧化还原酶转移酶转移酶水解酶水解酶异构酶异构酶(二)酶的催化性质(二)酶的催化性质1 1、高效催化性、高效催化性2 2、高度专一性、高度专一性(三)影响酶活性的因素(三)影响酶活性的因素1 1、温度、温度 一方面一方面升高温度增加底物分子的热能,从而增高反升高温度增加底物分子的热能,从而增高反应的速率应的速率040 C 另一方面另一方面温度的升高也会增加酶本身结构的分子热温度的升高也会增加酶本身结构的分子热能,导致酶的变性或催化活性的降低能,导
20、致酶的变性或催化活性的降低多数哺乳动物的酶,最适温度为多数哺乳动物的酶,最适温度为37 37 左右左右C2 2、PHPH 影响酶促反应的速率影响酶促反应的速率每种酶都有一个最适每种酶都有一个最适PH,PH,微小偏差会降低酶的活性,较微小偏差会降低酶的活性,较大偏差会导致酶蛋白自身的变性大偏差会导致酶蛋白自身的变性(最适(最适6.86.8)二、酶生物传感器二、酶生物传感器应用应用固定化酶固定化酶作为敏感元件的生物传感器作为敏感元件的生物传感器酶生物传感器酶生物传感器酶电极传感器酶电极传感器酶场效应管传感器酶场效应管传感器酶热敏电阻传感器酶热敏电阻传感器酶光纤传感器酶光纤传感器( (一一) ) 酶
21、电极传感器酶电极传感器定义:定义:由由固定化酶固定化酶与离子选择电极、气敏电极、氧与离子选择电极、气敏电极、氧化还原电极等化还原电极等电化学电极电化学电极组合而成的生物传感器组合而成的生物传感器酶电极酶电极电流型酶电极电流型酶电极电势型酶电极电势型酶电极1 1、电流型酶电极(固定化酶电流型化学电极)、电流型酶电极(固定化酶电流型化学电极)原理:原理:将酶促反应产生的物质在电极上发生氧化或还原反应将酶促反应产生的物质在电极上发生氧化或还原反应产生的产生的电流电流作为测量信号,在一定条件下,利用测得的作为测量信号,在一定条件下,利用测得的电流电流信号与待测物活度或浓度的函数关系信号与待测物活度或浓
22、度的函数关系,来测定样品中某一生,来测定样品中某一生物组分的活度或浓度物组分的活度或浓度电极电极:氧电极,过氧化氢电极氧电极,过氧化氢电极酶酶氧化酶氧化酶:用氧作受体的酶(常用):用氧作受体的酶(常用)还原酶还原酶222OH O 氧化酶底物产物氧电极:(还原反应)氧电极:(还原反应)22244OH OeOH过氧化氢电极过氧化氢电极:(氧化反应):(氧化反应)2222H OOHe葡萄糖传感器:葡萄糖氧化酶膜电化学电极葡萄糖传感器:葡萄糖氧化酶膜电化学电极61262261272222C H OH OOC H OH O 葡萄糖氧化酶依据反应中消耗的氧依据反应中消耗的氧, ,生成的葡萄糖酸及过氧化氢的
23、量,可生成的葡萄糖酸及过氧化氢的量,可用氧电极,电极,过氧化氢电极来测定葡萄糖的含量用氧电极,电极,过氧化氢电极来测定葡萄糖的含量测定酶促反应所产生的葡萄糖酸的量来计算样品中葡萄糖的含量测定酶促反应所产生的葡萄糖酸的量来计算样品中葡萄糖的含量优点:优点:酶易被分离,贮存较稳定,所以目前被广泛酶易被分离,贮存较稳定,所以目前被广泛 的应的应用。用。缺点:缺点:1.1.酶的特异性不高,如它不能区分结构上稍有差酶的特异性不高,如它不能区分结构上稍有差异的梭曼与沙林。异的梭曼与沙林。 2.2.酶在测试的过程中因被消耗而需要不断的更换。酶在测试的过程中因被消耗而需要不断的更换。 、电势型酶电极(固定化酶
24、电势型化学电极)、电势型酶电极(固定化酶电势型化学电极)原理原理:将酶促反应引起的物质量的变化转变成电势信号的输:将酶促反应引起的物质量的变化转变成电势信号的输出,电势信号大小与底物浓度的对数值呈线性关系出,电势信号大小与底物浓度的对数值呈线性关系微生物微生物的代谢的代谢同化作用同化作用异化作用异化作用微生物微生物好气性微生物好气性微生物:必须在有空气的环境中才易:必须在有空气的环境中才易生长生长厌气性微生物厌气性微生物:必须在无分子氧的环境生长:必须在无分子氧的环境生长繁殖繁殖:细胞将底物摄入通过一系列生化:细胞将底物摄入通过一系列生化 反应转变成自身的组成物质,并储反应转变成自身的组成物质
25、,并储存能量。存能量。:细胞将自身的组成物质分解以:细胞将自身的组成物质分解以释放能量或排出体外。释放能量或排出体外。2 2、微生物传感器的特点及分类、微生物传感器的特点及分类微生物敏感膜:微生物敏感膜:特点特点:(:(1 1)价格低价格低、便于推广普及、便于推广普及 (2 2)微生物细胞内的酶在适当环境下活性不易)微生物细胞内的酶在适当环境下活性不易降低,因此微生物传感器的降低,因此微生物传感器的寿命更长寿命更长 (3 3)即使微生物体内酶的催化活性已经丧失,)即使微生物体内酶的催化活性已经丧失,也还可以因细胞的增值使之产生也还可以因细胞的增值使之产生 (4 4)对于需要辅助因子的复杂的连续
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