淋巴瘤分子诊断临床应用ppt课件.pptx

1、新一代分子诊断技术在淋巴瘤诊断中的应用新一代分子诊断技术在淋巴瘤诊断中的应用1为什么淋巴瘤很复杂?n来源于不同分化阶段细胞形成的恶性克隆性疾病，异质性大 n新的淋巴瘤分类将不同特点的淋巴瘤定义为不同疾病淋巴瘤细胞淋巴瘤细胞2淋巴瘤的诊断及分类历史q早期，淋巴瘤的诊断及分类主要根据组织形态学和自然病程的发展过程q1994 年，“REAL” (The Revised European American Lymphoma Classification)分类将形态学、免疫表型、分子遗传及临床特点结合起来， 从而把淋巴瘤分类为不同的亚型，并通过临床验证q2008 年，WHO 根据细胞免疫学的研究和分子学

2、特征性标志的发现，将分类作了进一步的修订q2016年，进一步进行了修订3WHO淋巴组织肿瘤分类 (2016) 慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤 （CLL/SLL) 单克隆B淋巴细胞增多 (MBL) B细胞前淋巴细胞白血病 脾边缘区淋巴瘤 毛细胞白血病 脾B细胞淋巴瘤/白血病，未分类 淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL) 意义未明的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）， IgM Mu重链病 Alpha重链病 Gamma重链病 意义未明的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）， IgG/A 浆细胞骨髓瘤 孤立性骨浆细胞瘤 髓外浆细胞瘤 单克隆免疫球蛋白沉积病 粘膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤 (MALT淋巴瘤) 结内

3、边缘区淋巴瘤（NMZL） 滤泡性淋巴瘤 （FL） 儿童型滤泡性淋巴瘤 伴有IRF4重组的大B淋巴瘤 原发于皮肤的滤泡中心淋巴瘤 套细胞淋巴瘤 弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL），NOS T细胞/组织细胞丰富的大B细胞淋巴瘤 原发于中枢神经系统的DLBCL 原发于皮肤的DLBCL，腿型 EBV阳性的DLBCL，NOS EBV阳性的粘膜皮肤溃疡 与慢性炎症相关的DLBCL 淋巴样肉芽肿病 原发于纵隔（胸腺）的大B细胞淋巴瘤 血管内大B细胞淋巴瘤 ALK阳性的大B细胞淋巴瘤 浆母细胞性淋巴瘤 原发性渗出性淋巴瘤 HHV8阳性的DLBCL，NOS 伯基特淋巴瘤 伴有11q异常的伯基特样淋巴瘤 高级别B细

4、胞淋巴瘤，伴有MYC和BCL2和/或BCL6重组 高级别B细胞淋巴瘤，NOS B细胞淋巴瘤，不能分类型，具有介于弥漫大B细胞淋巴瘤与典型霍奇金病之间的成熟B细胞淋巴瘤*T细胞前淋巴细胞性白血病*T细胞大颗淋巴细胞性白血病*NK细胞性慢性淋巴细胞增殖性疾病 *侵袭性NK细胞白血病 *儿童系统性EB病毒阳性的T细胞淋巴瘤 *种痘水疱病样淋巴组织增殖性疾病*成人T细胞白血病/淋巴瘤 *结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型 *肠道病相关性T细胞淋巴瘤 *单型性亲上皮肠道T细胞淋巴瘤（原EATL II型）*胃肠道惰性T细胞淋巴组织增殖性疾病*肝脾T细胞淋巴瘤 *皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤 *蕈样真菌病 *Szar

5、y 综合征*原发于皮肤的CD30阳性的T细胞增殖性疾病 *原发于皮肤的gamma-delta- T细胞淋巴瘤 *原发于皮肤的CD8阳性侵袭性嗜表皮的细胞毒性T细胞淋巴瘤 *原发于皮肤的肢端CD8阳性T细胞淋巴瘤 *原发于皮肤的CD4阳性小/中间T细胞增殖性疾病 *外周T细胞淋巴瘤，NOS *血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤 *滤泡性T细胞淋巴瘤*伴有TFH表型的淋巴结外周T细胞淋巴瘤*间变性大细胞性淋巴瘤，ALK阳性*间变性大细胞性淋巴瘤，ALK阴性*隆胸相关间变性大细胞性淋巴瘤*霍奇金淋巴瘤*结节淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤 *典型霍奇金淋巴瘤*结节硬化型典型霍奇金淋巴瘤 *富含淋巴细胞的典型霍奇

6、金淋巴瘤 *混合细胞性典型霍奇金淋巴瘤 *淋巴细胞消减型典型霍奇金淋巴瘤 *移植后淋巴细胞增殖性疾病 (PTLD)*浆细胞增生 *传染性单核细胞增多样PTLD *旺炽型滤泡增生型*多形性 PTLD *单一形态的 PTLD (B- 及T/NK-细胞型) *典型霍奇金淋巴瘤类型PTLD 成熟T/NK细胞HL和PTLD4分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义成熟成熟B成熟成熟T/NKHL/PTLD患者患者化疗化疗靶向治疗靶向治疗免疫治疗免疫治疗HSCT巩固治疗巩固治疗疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)准确、特异、敏

7、感、快速、经济适用准确、特异、敏感、快速、经济适用鉴别诊断鉴别诊断危险度分层危险度分层靶向药物选择靶向药物选择疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)5淋巴瘤检测基因淋巴瘤检测基因检检测测项目项目基因基因基因基因区域区域试试剂剂盒盒B淋巴瘤(IG genes)IGH:(HA,HB,HC,HD,HE)VH-JH和DH-JHIGH：IGHIGK:(KA,KB)V-JIGK：IGIGL:(IGL)V-JIGL:IGT淋巴瘤(TCR genes)TCRB:(BA,BB,BC)V-J和D-JTCRB：TCRTCRG:(GA,GB)V-JTCRG：TCRTCRD:(T

8、CRD)V-J,D-D,D-J,和V-DTCRD:TCR6NHL的各亚型：按发生频率排列的各亚型：按发生频率排列（全球（全球9个医学中心，个医学中心，1400例例) 2%2%2%2%1%2%7DLBCL的发生干细胞前B细胞B1细胞活化的淋巴样母细胞免疫母细胞浆细胞边缘带细胞生发中心生发中心淋巴结淋巴结抗原刺激滤泡母细胞中心母细胞中心细胞生发中心生发中心DLBCL非生发中心非生发中心DLBCL8Semin Hematol. 2015 April ; 52(2): 6776Clin Cancer Res. 2016 Jan 27.DLBCL不同不同亚型存在不同突亚型存在不同突变基变基因因9MYD8

9、8和和CD79B与与DLBCLn在DLBCL患者中， MYD88基因和CD79B基因突变大部分出现在ABC型的患者n伴有该基因突变的DLCBL患者其发病年龄明显高于未突变者，这与ABC型DLBCL患者随着年龄增加该突变发生频率升高一致。Blood Cancer J. 2013 Sep; 3(9): e139.10MYD88 L256P可作为可作为WM/LPL的鉴别诊断标志的鉴别诊断标志nMYD88是一种接头蛋白，在TOLL样受体受到刺激后能够激活NF-KB和JAK-STAT信号通路n淋巴浆细胞淋巴瘤 (LPL)是具有浆细胞样分化特征的小B细胞淋巴瘤， 通常累及骨髓，淋巴结和脾n常伴有单克隆丙种

10、球蛋白血症，多数为IgM型，少数为IgG和IgA，其中95%的LPL累及骨髓，同时伴有IgM型单克隆丙种球蛋白血症，被称为华氏巨球蛋白血症 （WM）。n90以上的WM患者中存在MYD88 L256P位点突变，而其他淋巴增殖性疾病患者以及健康供者中极少出现该突变，因此MYD88-L256P突变有利于WM/LPL与其他淋巴细胞疾病相鉴别N Engl J Med. 2012;367(9):826-83311HCL-Vn占10%的HCLn在WHO2016年分类中，归类于脾B细胞淋巴瘤/白血病，未分类n与HCL不同之处：高血细胞计数Annex-1，CD25阴性BRAF基因野生型约50%的患者出现MAP2

11、K1突变对PA方案容易产生耐药，恶性程度高 Nat Genet. 2014;46(1):8-10中国B细胞慢性淋巴增殖性疾病诊断专家共识(2014年版)MAP2K1突变位点BRAF、MAP2K1可作为可作为HCL-V的鉴别诊断标志的鉴别诊断标志12Clin Cancer Res. 2014;20(20):5240-54T T细胞淋巴细胞淋巴瘤所累及的基因改变瘤所累及的基因改变13中国人群NK/T淋巴瘤常见突变Nat Genet. 2015 Sep;47(9):1061-614儿童T-ALL相关突变基因J Hematol Oncol. 2015 Apr 24;8:4215分子生物学检测在淋巴瘤诊

12、断和治疗中的意义分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义成熟成熟B成熟成熟T/NKHL/PTLD患者患者化疗化疗靶向治疗靶向治疗免疫治疗免疫治疗HSCT巩固治疗巩固治疗疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)准确、特异、敏感、快速、经济适用准确、特异、敏感、快速、经济适用鉴别诊断鉴别诊断危险度分层危险度分层靶向药物选择靶向药物选择疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)16突变基因与突变基因与DLBCLDLBCL预后的关系预后的关系Semin Hematol. 2015 April ; 52(2): 6776Clin

13、Cancer Res. 2016 Jan 27.17滤泡淋巴瘤q淋巴瘤国际预后指数（FLIPI）年龄60岁Ann Arbor 期；Hb120g/L；乳酸脱氢酶(LDH)正常上限；受累淋巴结枚。 每个特征一分，根据得到的总分，将患者分为低危（分）、中危（分）和高危组（分）q7个基因的突变状态和临床风险因素的整合可改善接受一线免疫化疗法的滤泡淋巴瘤患者的预后，并且是一种鉴定治疗失败高危风险亚组的有效方法。q相关的工具：http:/www.glsg.de/m7-FLIPILancet Oncol. 2015;16(9):1111-1122基基因因突突变可以帮助变可以帮助FL鉴别诊断和预后分期鉴别诊断

14、和预后分期MLL2(89%)， EZH2 (7.2%), CREBBP (32.6%)，突变在FL中是早期事件RRAGC只存在于FL，可以与DLBCL鉴别EBF1、MYD88、TNFAIP3突变是晚期事件，发生于FL转化期Nature GeNetics 2014 46：176-181Nature GeNetics 2016 48：183-189J Clin Invest. 2012;122(10):3424-3431.19MYD88 L256P与与MGUSnMYD88-L256P也是IgM型MGUS较为常见的基因突变（55%）n高MYD88-L256P表达量容易向WM转化nMYD88-L256

15、P与临床特征、预后具有相关性，可作为疾病的目标监测分子，评估疾病的残留程度、疗效反应。Blood. 2013 Sep 26;122(13):2284-520CXCR4可作为可作为WM/LPL的鉴别诊断和治疗预测标志的鉴别诊断和治疗预测标志n趋化因子受体-4 (chemokine receptor-4，CXCR4)属趋化因子家族，为G蛋白偶联的7次跨膜受体蛋白，基质细胞衍生因子-12是该受体的唯一配体nCXCR4突变出现30以上的LPL和20%以上的伴有IgM的MGUS患者中，但不存在伴有IgA或者IgG的MGUS患者中，因此CXCR4突变可作为此类疾病的鉴别诊断标志。nIbrutinib可用于

16、治疗WM患者。MYD88和CXCR4突变影响患者对这种药物的缓解。MYD88L265PCXCR4WT患者的效果最好（总缓解率100%，主要缓解率91.2%），MYD88L265PCXCR4WHIM患者总缓解率和主要缓解率分别为85.7%和61.9%，MYD88WTCXCR4WT患者分别为71.4%和28.6%。Blood. 2014 Mar 13;123(11):1637-46N Engl J Med 2015;372:1430-4021TP53, NOTCH1, SF3B1, and BIRC3突变可作为CLL/SLL预后标志nCLL/小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）是主要发生在中老年人群的一种成

17、熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤，以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为特征。n CLL与SLL的主要区别在于前者主要累及外周血和骨髓，而后者则主要累及淋巴结和骨髓。n该类患者的中位生存期约10年，但不同患者的预后呈高度异质性。n具有del（17p）和（或）p53 基因突变的患者预后最差；ndel（11q）是另一个预后不良标志，但免疫化疗可以改善其预后。治疗预测：SF3B1突变或BIRC3异常与氟达拉滨耐药相关；NOTCH1突变的患者不能从新的CD20单抗Ofatumumab中获益；抗CD52单抗联合FC（氟达拉滨+环磷酰胺）方案可克服TP53突变对CLL的不良影响；伴有SF3B1突变的患者可

18、能与BTK抑制剂耐药相关，但却可从抗CD52单抗中获益。Blood. 2013;121(8):1403-141222NOTCH1/2可作为MCL治疗预测标志nNotch基因编码一类高度保守的细胞表面受体nNotch信号影响细胞正常形态发生的多个过程，包括多能祖细胞的分化、细胞凋亡、细胞增殖及细胞边界的形成。nNOTCH1/2突变出现10左右的MCL。n具有NOTCH1/2突变的肿瘤细胞表现出更强的侵袭性，并且与总生存期较差相关。Proc Natl Acad Sci U S A. 2013;110(45):18250-18255 Blood. 2012;119(9):1963-1971.NOTC

19、H1突变位点NOTCH2突变位点NOTCH1突变与MCL预后NOTCH2突变与MCL预后23PTCL-NOS中的突变基因和预后组蛋白甲基化通路（组蛋白甲基化通路（MLL2、KDM6A）基因突变预后差）基因突变预后差突变基因分布和频率 Leukemia. 2015;29(1):237-241分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义成熟成熟B成熟成熟T/NKHL/PTLD患者患者化疗化疗靶向治疗靶向治疗免疫治疗免疫治疗HSCT巩固治疗巩固治疗疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)准确、特异、敏感、快速、经济适用准确、特

20、异、敏感、快速、经济适用鉴别诊断鉴别诊断危险度分层危险度分层靶向药物选择靶向药物选择疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)25与淋巴与淋巴瘤靶向治瘤靶向治疗相关的基因突变疗相关的基因突变 Nat. Rev. Clin. Oncol. 11, 585596 (2014).26目前已通过目前已通过FDA批准的靶向治疗药物批准的靶向治疗药物27套餐套餐检测平台检测平台临床意义临床意义T细胞淋巴瘤热点30基因NGS辅助临床诊断，进行疾病分型，临床预后判断，指导靶向用药B细胞淋巴瘤热点47基因NGSNK/T细胞淋巴瘤热点9基因NGS弥漫大B细胞淋巴瘤热点55基因N

21、GS淋巴瘤热点53基因NGS28淋巴瘤热点53基因序号序号检测基因检测基因序号序号检测基因检测基因序号序号检测基因检测基因序号序号检测基因检测基因1ARIDAARIDA15CREBBPCREBBP29LYNLYN43PtenPten2ATMATM16CRLF2CRLF230MEF2BMEF2B44PTPN1PTPN13BCL2BCL217CXCR4CXCR431MYCMYC45RHOARHOA4BCL6BCL618EP300EP30032MYD88MYD8846SOCS1SOCS15BIRC3BIRC319EPHA7EPHA733MYOM2MYOM247TAL1TAL16BTG1BTG120E

22、ZH2EZH234NOTCH1NOTCH148TELTEL7CARD11CARD1121FAT1FAT135NOTCH2NOTCH249TET2TET28CCND1CCND122FBXW7FBXW736PAX5PAX550TNFAIP3TNFAIP39CD20(KRT20)CD20(KRT20)23IDH2IDH237PDGFRBPDGFRB51TP53TP5310CD58CD5824IKZF1IKZF138PHF6PHF652TRAF2TRAF211CD79ACD79A25JAK1JAK139PIK3CAPIK3CA53WHSC1WHSC112CD79BCD79B26JAK2JAK240PI

23、M1PIM113CDKN1ACDKN1A27KITKIT41PRDM1PRDM114CDKN2ACDKN2A28KMT2DKMT2D42Ps6kPs6k29与治疗相关的基因 ATMATM在Mantle细胞淋巴瘤中有41%的突变率，在生发中心B 细胞淋巴瘤突变率为13.64%，突变和失活可以导致基因不稳定性的增加、DNA双链断裂修复障碍， 从而出现对放射的高度敏感。因此ATM 基因突变可作为预测放疗敏感性的分子标志物之一。BCL2BCL2基因是一种原癌基因，具有抑制凋亡的作用。BCL2抑制剂obatoclax(GX15-070)可以与许多BCL2家族成员结合，包括BCL2、BCL-XL和MCL-

24、1。期试验中，GX15-070联合氟达拉滨、利妥昔单抗治疗复发CLL，有54患者达部分缓解。Navitoclax（ABT-263）与BCL家族蛋白均有较高的亲和性，并与蛋白酶抑制剂、抗CD20抗体有协同抗肿瘤作用。BCL6BCL6编码一个锌指蛋白, 属于一种转录抑制因子。BCL6抑制剂可能对携带此突变的淋巴瘤患者有效。CARD11CARD11基因属于膜相关鸟苷酸激酶家族成员，通过与B 细胞淋巴瘤10(BCL10)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤基因1(MALT1) 组成CARMA-BCL10-MALT1(CBM) 复合体参与人核转录因子B(NF-B) 的激活过程, 从而发挥其生物学功能。MALT1抑

25、制剂可能对携带此突变的淋巴瘤患者有效CD79ABCR通路中信号传导的组成分子，BTK，SYK， PRC抑制剂对携带此类突变的淋巴瘤患者有效CD79BBCR通路中信号传导的组成分子，BTK，SYK， PRC抑制剂对携带此类突变的淋巴瘤患者有效CREBBPCREBBP属于KAT3家族的组蛋白/蛋白赖氨酸乙酰转移酶，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）通过抑制组蛋白去乙酰化，从而开放染色质构型，解除低乙酰化对基因转录的抑制，使异常沉默的基因得以重新表达，可能对携带此突变的淋巴瘤患者有效。CRLF2CRLF2 是细胞因子受体基因，其异常导致CRLF2 受体自身激活突变，并激活JAK，导致JAK 突变，

26、引起JAK-STAT 信号通路持续活化，JAK抑制剂对此类突变有效。CXCR4CXCR4拮抗剂在体内、体外均具有一定程度的抗淋巴瘤效应，且可加大利妥昔单抗对NHL 治疗作用。普乐沙福作为CXCR4强有力的拮抗剂在NHL患者造血干细胞动员中的贡献不容忽视，其与粒细胞集落刺激因子联用进行成人造血干细胞动员的方案已获得美国食品药品管理局和欧洲药物管理局的批准，使更多的NHL 患者进行造血干细胞移植治疗成为可能。EP300EP300属于KAT3家族的组蛋白/蛋白赖氨酸乙酰转移酶，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）通过抑制组蛋白去乙酰化，从而开放染色质构型，解除低乙酰化对基因转录的抑制，使异常沉默的基

27、因得以重新表达，可能对携带此突变的淋巴瘤患者有效。EZH2EZH2突变为功能获得型突变，应用EZH2小分子抑制剂(DZNep、EI1、EPZ005687、EPZ6438、GSK126等)，可以直接抑制EZH2转移酶的活性，降低H3K27me3水平，恢复沉默的PRC2靶基因，能够有效的抑制EZH2突变的淋巴瘤细胞系的增殖，目前的新药研究已经进入期和期临床试验阶段。30与治疗相关的基因IDH2IDH2是一类参与细胞有氧代谢三羧酸循环的酶家族成员之一，IDH2突变抑制剂对对携带此突变的淋巴瘤患者有效。JAK2鲁索利替尼（ruxolitinib）是第一个通过美国FDA 认证的用于治疗血液系统肿瘤的JA

28、K2 抑制剂类药物，已进入四期临床试验，用于患者治疗，能够减轻疾病相关的症状，提高患者的生存质量。此外，STAT抑制剂对携带此突变的患者有效。MEF2BMEF2B属于MADS-box转录因子家族，可以直接激活正常的生发中心B细胞中原癌基因BCL-6的表达，BCL6抑制剂对携带此突变的淋巴瘤患者有效。MYCMyc 基因是一种核蛋白类的原癌基因，BET抑制剂和蛋白翻译抑制剂对携带此类突变的淋巴瘤患者有效。MYD88MyD88 作为一种衔接蛋白，通过TIR区域( Toll /IL-1 receptor，TIR) 与TLRs /IL-1R结合，向胞内传递信号，激活核因子-B ( NF-B) 。IRAK

29、1/4抑制剂对携带此类突变的淋巴瘤患者有效。NOTCH1NOTCH抑制剂对对携带此突变的淋巴瘤患者有效。NOTCH2NOTCH抑制剂对对携带此突变的淋巴瘤患者有效。PTPN1JAK2抑制剂和STAT抑制剂对携带此突变的淋巴瘤患者有效。SOCS1JAK2抑制剂和STAT抑制剂对携带此突变的淋巴瘤患者有效。TNFAIP3TNFAIP3是一个肿瘤抑制基因，是NF-KB激活的负调控因子,可以抑制TNF受体(TNFR)和Toll样受体(TLR)诱导的NF-kB激活，蛋白酶抑制剂对携带此类突变的淋巴瘤患者有效。31与鉴别诊断相关的基因BCL2BCL2基因是一种原癌基因，具有抑制凋亡的作用。急性淋巴细胞白血

30、病和非何杰金氏淋巴瘤t(14;18)染色体易位，产生IgH/ BCL2融合基因，是诊断这一类淋巴瘤的重要依据。BCL6BCL6编码一个锌指蛋白, 属于一种转录抑制因子。BCL6是生发中心来源的淋巴瘤尤其是DLBCL的特异性标志。BCL6的突变导致FLs 转变成DLBCL，BCL6的第1 个内含子的397 位以及423443 bp 区域突变是大B 细胞淋巴瘤的特异性标志。BIRC3BIRC3，又称细胞凋亡抑制蛋白-2(inhibitor ofapoptosisProtein-2, c-IAP2)是细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的重要组成部分, t(11, 18)(q21;q21)易位产生c-I

31、AP2 /MALT1融合蛋白可激活NF-B途径引起恶性细胞转化和淋巴瘤进展，可作为诊断这一类淋巴瘤的重要依据。CARD11CARD11基因属于膜相关鸟苷酸激酶家族成员，通过与B 细胞淋巴瘤10(BCL10)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤基因1(MALT1) 组成CARMA-BCL10-MALT1(CBM) 复合体参与人核转录因子B(NF-B) 的激活过程, 从而发挥其生物学功能。CARD11突变发生在卷曲螺旋区域，多见于DBLCL的ABC亚型，增强了该区域在CARD11功能方面的重要性，因此此类突变可能有助于与其他类型的鉴别CCND190% MCL 有t（11；14）（q13；q32）染色体易位，

32、致Cyc1inD1 基因过度表达，CyclinD1 蛋白阳性有利于MCL 的诊断。此外，MCL中还存在包括ATM、CCND1、POT1、RB1在内的多种突变，并且突变频率与细胞来源所致的染色质开放程度高度相关，因此出现此类突变可作为与其他类型的鉴别。KRT20cd20KRT20属于角蛋白家族，参与表皮细胞纤毛结构完整性调节，同时也是细胞完整性的维持蛋白。参与凋亡调节，刺激应激。KRT20突变多发生于边缘区淋巴瘤，可作为和其他类型的鉴别诊断CREBBPCREBBP属于KAT3 家族的组蛋白/蛋白赖氨酸乙酰转移酶，CREBBP的失活突变大多发生在B细胞NHL最常见的两种类型DLBCL 和FL中，因

33、此突变可能有助于与其他类型的NHL鉴别CRLF2CRLF2 是细胞因子受体基因，其异常导致CRLF2 受体自身激活突变，并激活JAK，导致JAK 突变，引起JAK-STAT 信号通路持续活化，因此此类突变有助于Ph样ALL的诊断EP300EP300属于KAT3 家族的组蛋白/蛋白赖氨酸乙酰转移酶，EP300的失活突变大多发生在B细胞NHL最常见的两种类型DLBCL 和FL中，因此突变可能有助于与其他类型的NHL鉴别FBXW7Fbxw7 的突变广泛见于各器官部位，其中在 T-ALL（31%）和胆管癌（35%）中更是高频发生突变，未发现 Fbxw7 突变的肿瘤有急性髓性白血病（AML）和多发性骨髓

34、瘤，可据此进行鉴别诊断。32与鉴别诊断相关的基因JAK2JAK2V617F 为MPNs 的高突变位点，约76% 的真性红细胞增多症（polycythemia vera, PV）及60% 的特发性血小板增多症（essential thrombocythemia, ET）和37.5% 特发性骨髓纤维化（primary myelofibrosis, PMF）患者存在JAK2V617F突变，发生率显著高于普通人群，与MPNs 发病密切相关。KMT2Dmll2MLL2基因编码一种组蛋白甲基转移酶，89%的FL与24%-32%的DLBCL携带了MLL2基因突变，可作为与其他类型的淋巴瘤鉴别MEF2BMEF

35、2B属于MADS-box转录因子家族，可以直接激活正常的生发中心B细胞中原癌基因BCL-6的表达，突变多见于DLBCL的GCB亚型和FL，可作为与其他类型的淋巴瘤鉴别MYCMyc 基因是一种核蛋白类的原癌基因，C-myc 的基因易位已成为Burkitt淋巴瘤的标志性基因易位，可用于与其他类型的鉴别MYD88鉴别诊断弥漫大B淋巴瘤以及淋巴浆细胞淋巴瘤NOTCH2NOTCH2更倾向于表达在成熟B 细胞，并且是边缘区B 细胞发育所必须的。NOTCH2在DLBCL 中的突变率为8%，其中大约25%的脾边缘区淋巴瘤（SMZL）患者中存在NOTCH2基因突变，并且在慢性淋巴细胞白血病（CLL）、套细胞淋巴

36、瘤（CL）、滤泡淋巴瘤（FL）和HCL中不存在NOTCH2突变，可作为鉴别诊断标志。PAX5PAX5基因编码一个成对盒家族转录因子，特异表达于B细胞的核转录因子,在早期B细胞定向分化发育过程中发挥重要的调控作用 Pax5突变、缺失在B细胞性急性淋巴细胞白血病患者中常见，有可能作为分子标记诊断B-ALL和监测B-ALL的微小残留病变TET2血管免疫母细胞性T 细胞淋巴瘤( angioimmunoblastic T cell lymphoma，AITL) 是具有独特临床病理和生物学行为的外周T 细胞淋巴瘤( peripheral T cell lymphoma，PTCL)，TET2 突变可能参与A

37、ITL 的发病过程，突变可能有助于AITL与其他类型鉴别。TNFAIP3TNFAIP3是一个肿瘤抑制基因，是NF-KB激活的负调控因子,可以抑制TNF受体(TNFR)和Toll样受体(TLR)诱导的NF-kB激活，突变多见于DBLCL的ABC亚型，因此此类突变可能有助于与其他类型的鉴别33与判断预后相关的基因ARIDAARID1A是个抑癌基因，突变导致ARID1A在肿瘤中表达降低。ARID1A低表达导致低生存率, 同时对顺铂(platinum)更易产生抗性。因此，ARID1A突变和表达水平可作为预测以铂类为基础的化疗方案的患者预后的一种方法。BCL2BCL2基因是一种原癌基因，具有抑制凋亡的作

38、用。BCL2的过度表达可阻止多柔吡星、长春新碱(VCR)和泼尼松等多种化疗药物及X 线诱发的淋巴瘤细胞的凋亡, 使其表现出更强的耐药性 ，预后差BCL6BCL6编码一个锌指蛋白, 属于一种转录抑制因子。BCL6是生发中心来源的淋巴瘤尤其是DLBCL的特异性标志。BCL6的突变导致FLs 转变成DLBCL，BCL6的第1 个内含子的397 位以及423443 bp 区域突变患者，与无该区突变的患者相比, 有更高的总体生存率。BIRC3BIRC3，又称细胞凋亡抑制蛋白-2(inhibitor ofapoptosisProtein-2, c-IAP2)，是细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的重要组成部

39、分。该基因发生突变后, 失去对Caspase的抑制作用，多与耐药、疾病复发等有关。BTG1BTG1是抗增殖基因家族的一个成员，在人的正常组织中和完全缓解的病人淋巴细胞内都可检测到其表达，所以 BTG1 可作为完全缓解的一个潜在的生物标志物。CREBBPCREBBP属于KAT3 家族的组蛋白/蛋白赖氨酸乙酰转移酶，CREBBP基因有些突变只出现于复发时，有些复发时出现的突变在初诊时存在于亚克隆之中，因此CREBBP突变很可能与ALL复发相关，因此可以作为MRD 检测的标志物。CRLF2CRLF2 是细胞因子受体基因，其异常导致CRLF2 受体自身激活突变，并激活JAK，导致JAK 突变，引起JA

40、K-STAT 信号通路持续活化，而此通路的活化则与成人和儿童ALL不良预后相关。CXCR4CXCR4属于蛋白偶联的7 次跨膜受体家族，CXCR4 水平是影响患者总生存的独立不良预后因素，NHL患者化疗后骨髓中CXCR4 的表达降低可能是一个良好的预后因素。EPHA7Epha7甲基化是鉴别纵隔灰区淋巴瘤、结节硬化型霍奇金淋巴瘤(HL)和原发纵隔大B细胞淋巴瘤(PMLBCL)的良好指标。EZH2在22%的DLBCL中发现了一个针对性体细胞突变- EZH2基因突变，这一突变局限在GCB亚型中。34与判断预后相关的基因FAT1Fat1 特定地与EGFR 信号通路协同调控细胞的增殖。它可以在细胞生长周期

41、中激活早期信号传导以及调节激活后的下游事件，其恰当的调节可以维持细胞的正常生长、分化和最终的组织表型， 而不恰当的干扰会导致病理性改变。在ALL中，携带该基因突变的患者，预后比野生型好。FBXW7FBXW7 基因突变被认为是 T-ALL 预后较好的指标，该基因突变后可能影响某些药物的疗效：甲磺酸Obatoclax ，舒尼替尼， 来那度胺，舒尼替尼，吉西他滨。IDH2IDH2是一类参与细胞有氧代谢三羧酸循环的酶家族成员之一，AML患者中IDH2突变提示较高的生存率,NPM1与IDH1/IDH2突变联合发生时,提示AML预后较好。IKZF1IKZF1 基因缺失突变，是易复发高危患者的一个重要分子标

42、记。此外，在CML中检测IKZF1基因缺失突变，可作为CML急淋变的预警。JAK1JAK1作为JAK酪氨酸激酶家族的成员,在细胞信号的传导中有着重要的调节作用，JAK1发生突变的患者年龄偏大，治疗反应差。JAK2JAK2发生突变，与ALL 预后差有关，尤其是和高危ALL 预后差和较高复发率有高度相关性。MYCMyc 基因是一种核蛋白类的原癌基因，C-myc 基因异常与DLBCL 的不良预后相关NOTCH1NOTCH1 基因突变被认为是 T-ALL 预后较好的指标TET2TET2 突变很可能会成为判断中危组 AML 患者预后的重要标志。TNFAIP3TNFAIP3是一个肿瘤抑制基因，弥漫性大B细

43、胞淋巴瘤中TNFAIP3突变病例比无突变病例预后差。35病例总结编号姓名年龄检测项目送检日期报告日期突变基因及比率N1刘*50淋巴瘤突变基因（53种）20160811201608181.TET2 突变型 12.35% 2.RHOA 突变型 11.40% 3.IDH2 突变型 13.03% 临床上诊断考虑外周T淋巴瘤或者浆母细胞瘤鉴于本次测序检测到RHOA基因，TET2基因和IDH2基因突变，此三个基因联合突变常见于血管免疫母细胞性T 细胞淋巴瘤( angioimmunoblastic T cell lymphoma，AITL)，因此考虑为AITL。IDH2突变抑制剂和RhoA抑制剂能抑制肿瘤细

44、胞增殖，可能对携带此突变的淋巴瘤患者有效。 36病例总结编号姓名年龄检测项目送检日期报告日期 报告周期突变基因及比率N2王*xx淋巴瘤突变基因（53种）201603112016032110天1.TNFAIP3 突变型 53% 2.EZH2 突变型 30% 3.TET2 突变型 51% 4.NOTCH2: 突变型 25% 临床考虑是FL，由于出现TNFAIP3突变，因此考虑FL的转化期，预后不佳NOTCH抑制剂对此淋巴瘤患者有效。 TNFAIP3是一个肿瘤抑制基因，是NF-KB激活的负调控因子,可以抑制TNF受体(TNFR)和Toll样受体(TLR)诱导的NF-kB激活，蛋白酶抑制剂对此类患者有

45、效。 EZH2突变为功能获得型突变，可以选用EZH2抑制剂治疗。 37病例总结编号姓名年龄检测项目送检日期报告日期突变基因及比率N3张*xx淋巴瘤突变基因（53种）2016041520160430 1. MYD88 突变型24.33%2. CARD11 变型 28.72% 3. FAT1 突变型 100% 临床考虑DLBCL，MyD88多出现在ABC型FAT1 特定地与EGFR信号通路协同调控细胞的增殖。它可以在细胞生长周期中激活早期信号传导以及调节激活后的下游事件，其恰当的调节可以维持细胞的正常生长、分化和最终的组织表型， 而不恰当的干扰会导致病理性改变。在ALL中，携带该基因突变的患者，预

46、后比野生型好。MYD88突变：IRAK1/4 抑制剂对携带此类突变的淋巴瘤患者有效。 CARD11突变：依鲁替尼和来那度胺无效MYD88可以作为后续监测标志物 38分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义分子生物学检测在淋巴瘤诊断和治疗中的意义惰性惰性B侵袭性侵袭性B成熟成熟T/NKHL/PTLD患者患者化疗化疗靶向治疗靶向治疗免疫治疗免疫治疗HSCT巩固治疗巩固治疗疗效评价疗效评价预后分析复发监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)准确、特异、敏感、快速、经济适用准确、特异、敏感、快速、经济适用鉴别诊断鉴别诊断危险度分层危险度分层靶向药物选择靶向药物选择疗效评价疗效评价预后分析复发

47、监测复发监测微小残留病检测微小残留病检测（MRD)39NGS能帮助监测药物的疗效（MRD）BLOOD, 2012 VOLUME 120, NUMBER 260.00%5.00%10.00%15.00%20.00%25.00%30.00%35.00%LS-1LS-2Ls-3Ls-4MRD detection优势克隆比例融合基因比例 LS-1LS-2Ls-3Ls-4优势克隆比例 12.24%0.61%0.86%1.63%融合基因比例33%0.11%0040外周血游离DNA(cfDNA)人体血液循环系统中不断流动的携带一定特征（包括突变，缺少，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等）来自肿瘤基因组的DNA片段；来源：1、来自于坏死的肿瘤细胞；2、来自于凋亡的肿瘤细胞；3、循环肿瘤细胞；4、来自于肿瘤细胞分泌的外排体；含量低，约占整个循环DNA的1%，甚至只有0.01%。41标本要求：标本要求：n1、新鲜组织、冷冻组织n2、石蜡切片：5-8um的蜡卷5-10张n3、骨髓：浸润骨髓n4、外周血：浸润外周血46