四-菌种保藏的原理和方法课件.ppt

1、n由于该法的保藏温度为由于该法的保藏温度为2020，为了避免微生物受损，为了避免微生物受损伤致死，需要甘油作为保护剂。甘油的最终浓度为伤致死，需要甘油作为保护剂。甘油的最终浓度为25%25%。n具体操作如下：具体操作如下：配制浓度为配制浓度为5050的甘油溶液，的甘油溶液，121121灭菌后备用；灭菌后备用；制备菌悬液，一般菌悬液的浓制备菌悬液，一般菌悬液的浓度为度为10108 810101010个个mLmL；将菌悬液和甘油溶液以等体将菌悬液和甘油溶液以等体积混合均匀后，置积混合均匀后，置2020保藏。保藏。n或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待生或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面

2、上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同上置长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同上置于冰箱中保存。于冰箱中保存。培养物的冻干过程培养物的冻干过程抽真空抽真空CFU 代表“colony forming units”。CFU/mL指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数。 保藏：冷冻干燥后的培养物在低于保藏：冷冻干燥后的培养物在低于55下保藏。较低下保藏。较低的保藏温度的保藏温度(-20(-20-70)-70)对于培养物的长期稳定更好。对于培养物的长期稳定更好。2 2复苏：复苏：n在安瓿中加入在安瓿中加入0.50.51ml1ml营养液体培养基，慢慢旋转安营养液体培养基，慢慢旋转安瓿，使

3、冻干菌种复水。然后将此转接到一含有再生培瓿，使冻干菌种复水。然后将此转接到一含有再生培养基的无菌试管中，或直接接种琼脂斜面或涂布平板。养基的无菌试管中，或直接接种琼脂斜面或涂布平板。n在指管中冻干的菌种通常为絮粉状，可以将此直接振在指管中冻干的菌种通常为絮粉状，可以将此直接振落入盛有落入盛有l l2ml2ml液体培养基的试管中，轻轻振荡液体培养基的试管中，轻轻振荡5 5l0minl0min，然后用此悬液接种适宜的再生培养基。，然后用此悬液接种适宜的再生培养基。n液氮超低温保藏法是近几年才发展起来的，此法液氮超低温保藏法是近几年才发展起来的，此法国外已较普遍采用，是适用范围最广的微生物保国外已较

4、普遍采用，是适用范围最广的微生物保藏法。尤其是一些不产孢子的菌丝体，用其他保藏法。尤其是一些不产孢子的菌丝体，用其他保藏方法不理想，可用液氮保藏法，其保存期最长。藏方法不理想，可用液氮保藏法，其保存期最长。我国国内目前已有很多单位采用液氮法保存菌种。我国国内目前已有很多单位采用液氮法保存菌种。n原理原理 用液氮能长期保存菌种。这是因为液氮的温用液氮能长期保存菌种。这是因为液氮的温度可达度可达196196，远远低于其新陈代谢作用停止的，远远低于其新陈代谢作用停止的温度（温度（130130），所以此时菌种的代谢活动已基），所以此时菌种的代谢活动已基本停止，化学作用亦随之消失。本停止，化学作用亦随之消失。