分离分析新技术课件.ppt

1、Tel: 0931-2976699 (O) E-mail: 蜂胶的SFE纯化流程优于溶剂法一些代表性的大孔吸附树脂大致操作步骤：树脂预处理树脂上柱药液上柱树脂的解吸 树脂的清洗、再生树脂预处理：加甲醇或丙酮浸泡24小时，加热回流洗脱装柱：蒸馏水湿法装柱，乙醇流动清洗，大量蒸馏水清洗药液的上柱吸附：（1）泄漏曲线与吸附容量的考察（2）药液上柱前的预处理（3）上柱工艺条件的选择 树脂自身特性、样品浓度、pH值、吸附柱径高比、上样流速（4）树脂的解吸 树脂的清洗、再生： 无水乙醇或95乙醇洗至无色，大量水洗去醇在天然药物有效成分的提取、纯化领域大有用途：1.许多提取成功的单味中草药，奠定良好的基础2

2、.不断有新型的吸附树脂问世到目前为止,已成功用于黄酮类、皂苷类、生物碱类、酯类、萜类等成分的分离实例：银杏叶提取物 （GBE） 主要有效成分 黄酮苷 萜内酯 溶剂萃取法 24 6 树脂吸附法 Amberlite XAD-7 30 未达标 Duolite-761 达标 达标 ADS-F8 6065 2530 其他中草药：毛冬青根、山楂、葛根、黄芩根、苦荞麦、沙棘等实例：绞股蓝皂苷 研制出强极性吸附树脂ADS-7、S-038 S-038，吸附量达65.5 mg/ml，70乙醇洗脱 人参皂苷 吸附和脱色双重作用 ADS-7 ，70乙醇洗脱，粗品（棕色） 白色或微黄色实例：绞股蓝皂苷 绞股蓝：葫芦科植

3、物绞股蓝的根状茎或全草，多年生草质藤本植物 功效：镇咳、清热解毒有效成分：皂苷、黄酮类、多糖类 “绿色的金子” “第二人参” “人参宝草”提取工艺：绞股蓝干茎叶 热水浸提 浸提除杂 树脂吸附乙醇解吸 脱色 浓缩干燥 粉碎 绞股蓝皂苷粉末7-8倍热水浸提三次调节酸碱性静置除杂DA大孔树脂水洗除杂50%乙醇70%乙醇DB树脂真空干燥80-100目实例：喜树碱 弱碱 AB-8 pH 8，盐浓度(1-2.5)mol/L, 吸附量达160 mg/g 小檗碱 碱性大 水溶性大 10%H2SO4, 10%NaOH, 非极性吸附树脂 小檗碱含量为原生药含量的97%色谱技术： 有效成分的定性与定量工作 开发出疗

4、效好、质量指标明确的中药新药按照分离过程的原理不同分为：1. 吸附色谱2. 分配色谱3. 离子交换色谱4. 凝胶色谱5. 亲和色谱1.薄层色谱 操作简单、费用低廉、应用广泛新型薄层色谱法 离心制备薄层色谱 （PCLC）旋转离心、连续洗脱的圆形色谱技术，分离效果优于常规的制备薄层色谱和柱色谱独特的优点：u 对固定相不会造成损坏u 装填容量、分离速度和分离效能得到极大提高实例：龙胆属植物 Sstrictiffora 甲醇提取物 bellidifolin 和 desmethylbellidifolin 离心薄层色谱法 聚酰胺开口柱色谱 30 min. 12hr.2.柱色谱特殊的柱色谱：（1）干柱色谱

5、干法装填上样洗脱推出、切割谱带溶剂萃取特点：溶剂消耗很少，操作迅速（1530min）（2）真空液相色谱 (VLC)抽真空装柱低极性溶剂冲柱上样洗脱收集馏分、抽干特点：操作简便、处理量大（一次可达30g）3.压力液相色谱 (PLC)(1)闪蒸色谱 (约0.2 MPa) 价格低廉、操作方便(2)低压液相色谱 ( 2.0 MPa) 分离效率高、应用范围广实例：银杏内酯A、银杏内酯B、白果内酯的分离纯化硅胶H柱 (10-40 m) 流动相：乙酸乙酯石油醚（8：2）(5) 超临界流体色谱 介于液相色谱和气相色谱之间的色谱方法特点：分离速度快、产品易回收、应用范围广、有可能替代正相HPLC4.离子交换色谱

6、固定相：离子交换树脂 可再生性和重复使用性交换功能基团：阳离子和阴离子形态：凝胶型（水溶胀）和大孔型（永久性微孔）特点：使用方便、成本低廉、重复使用性好、分离速度快应用范围：生物碱、糖类、氨基酸、蛋白质以及核酸实例：总生物碱制备生药粗粉0.1%HCl渗漉强酸性阳离子交换树脂蒸馏水洗树脂倒出晾干10%NaOH碱化树脂氯仿回流干燥重结晶 5.逆流色谱 (CCC)以液相物质为固定相的液液色谱离心逆流色谱 (CCCC)：（1）分离物质的极性范围很宽（2）没有拖尾现象（3）样品定量回收实例：银杏叶中的黄酮糖苷 固定相：水，流动相：乙酸乙酯乙酸乙酯（异丁醇）乙酸乙酯/异丁醇 (6:4)高速逆流色谱 (HS

7、CCC)6.其他形式色谱(1)体积排阻色谱 分子筛机理凝胶过滤色谱凝胶渗透色谱优点：操作简单、快捷、流动相选择宽泛(2)亲和色谱 大多被利用来分离纯化生物大分子载体：琼脂糖凝胶、交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶(3)疏水作用色谱 主要分离对象为蛋白质特点：分离条件温和，易于保持生物蛋白质的活性7.多种色谱方法的联用最初分离步骤：如闪蒸色谱、逆流色谱或凝胶过滤色谱等最后的纯化过程：如HPLC实例：生物碱 液相色谱法排阻色谱法实例：水飞蓟黄酮的提取 水飞蓟：也叫乳蓟，菊科植物，一年或两年生草本 功效：抗肝脏中毒和保护肝细胞有效成分：水飞蓟素提取工艺：水飞蓟种子 去油种子饼 去油种子渣 过滤 提取液 浓缩 总黄酮油液 总黄酮 溶解 上柱 洗脱 浓缩干燥 水飞蓟素机械榨油粉碎提取4次每次4h分离植物油丙酮硅胶柱黄酮类、酚酸类 乙腈水酸系统皂苷类 乙腈水系统生物碱类 乙腈三乙胺系统(1) danshensu(2) protocatechuic acid(3) protocatechuic aldehydrate(4) caffeic acid(5) rosmarinic acid(6) lithospermic acid(7) salvianolic acid B(8) salvianolic acid A(9) salvianolic acid C.丹参原药材HPLC指纹图谱数据