九、流式细胞仪原理及应用、CD4绝对计数的原理、方法和质量控制课件.ppt
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- 关 键 词:
- 细胞 原理 应用 CD4 绝对 计数 方法 质量 控制 课件
- 资源描述:
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1、是是HIVHIV感染疾病分期、感染疾病分期、预测疾病进程、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方预测疾病进程、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案以及案以及的实验室标准指标。的实验室标准指标。2-6 weeksmean of 10 yearsAsymptomatic phaseFlu-likeDiseaseSymptom-atic phaseAIDS10005002000CD4 T cells/m mlInfectionSeroconversionDeathCD4 T cell depletionHAARTCD4+T细胞细胞临床阶段临床阶段A 无症状或急性无症状或急性HIV感感染或持续性全身淋巴结染或
2、持续性全身淋巴结肿大肿大B 出现症状,出现症状,不是不是A或或CC 艾滋病指针性症艾滋病指针性症状状500/ul(29%)A1B1C1200-499/ul(14-28%)A2B2C2200/ul(14%)A3B3C3 成人及青少年艾滋病分期标准(成人及青少年艾滋病分期标准(CDC,美国,美国,1993年)年) CD4200/ulCD4200/ul和和/ /或出现艾滋病指针性症状(如卡氏肺囊虫肺炎或出现艾滋病指针性症状(如卡氏肺囊虫肺炎等)时,就可定义为进入艾滋病期。如表中等)时,就可定义为进入艾滋病期。如表中A3A3,B3B3,C1-3C1-3期。期。病程CD4+T淋巴细胞病毒载量建议症状期任
3、何值任何值治疗无症状期CD4+T细胞200/mm3,但30000(bDNA)或55000(RT-PCR)建议治疗。另外还要根据CD4+T细胞下降率和患者的愿望无症状期CD4+T细胞350/mm330000(bDNA)或55000(RT-PCR)建议延迟治疗观察。未经治疗者3年发展至AIDS15%.HAART治疗6 个月 1 0 例患者 CD 4 细胞平均数 变 化HAART治疗6 个月 1 0 例患者 CD 4 细胞平均数 变 化2662663093093333331651650 05050100100150150200200250250300300350350d0d04w4w12w12w24
4、w24w治疗时间治疗时间CD4细胞数(个/ u l )CD4细胞数(个/ u l )10例患者治疗期间平均VL的变化情况0123456d04w12w24wVL log copies/ml提提 示示CD4+ T细胞计数的方法细胞计数的方法非非FCM 技术技术FCM 技术技术-自动化方法自动化方法-可靠性高可靠性高(变异系数低变异系数低)-精密度、准确度和可重复性高精密度、准确度和可重复性高-高通量高通量-金标准技术金标准技术优点优点-设备昂贵设备昂贵-试剂昂贵试剂昂贵- 需要熟练技术人员操作需要熟练技术人员操作缺点缺点-简单简单-低廉低廉优点优点-低通量低通量-难于质控难于质控缺点缺点BD FA
5、CSVantageBD-Calibur 对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选(3)高通量(分析分选) 分析150,000个/ 秒 分选100,000个/秒 流体动力学聚焦流动室激光聚焦1、液流系统包裹样本流使之位于喷嘴中心二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光,荧光 光信号分离,导向,各探测通道PMT接收并转化为电信号。2、光学系统:激光光源、分色反光镜、光束成形器、透镜组、滤片、光电倍增管FSC SSC FL1 FL2 FL3对数对数 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数脉冲处理,模数转换光信号电信号记录数据,显示结果(面积,峰高,宽度)颗粒度细
6、胞大小散射光信号区分裂解后的外周血细胞群荧光染料被激发而发射的光信号 多荧光标记胞内多种组分,实现多参数测量线性放大:信号强度变化范围较少、生物学线性过程对数放大:信号强度变化范围较大、光谱信号复杂自发荧光特异荧光特异荧光CD45 FITC (log)CD14 PE (log)G2流式细胞技术流式细胞技术传统的传统的FCM: 双双平台法平台法-需要两台仪器需要两台仪器-需要几个制备和分析步骤需要几个制备和分析步骤-分析能力低分析能力低-结果受多个因素影响结果受多个因素影响-昂贵昂贵传统的传统的FCM: 单单平台法平台法-只需一台仪器只需一台仪器-较少的制备和分析步骤较少的制备和分析步骤-非常昂
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