第七章芳香胺类药物的分析课件.ppt

1、第七章第七章 芳香胺类药物的分析芳香胺类药物的分析对氨基苯甲酸酯类对氨基苯甲酸酯类: :盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 酰胺类酰胺类: : 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚芳芳 胺胺 类类季胺盐类：季胺盐类：磺酰胺类：磺酰胺类：芳烃胺类芳烃胺类苯乙胺类苯乙胺类: :拟肾上腺素类药物拟肾上腺素类药物 苯丙胺类苯丙胺类第一节第一节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析对氨基苯甲酸酯类对氨基苯甲酸酯类: : 特点：芳伯氨基未被取代，芳特点：芳伯氨基未被取代，芳环的对位有取代环的对位有取代酰胺类酰胺类: : 特点：芳伯氨基被酰化，且芳特点：芳伯氨基被酰化，且芳环的对位有取代环的对位有取代芳芳 胺胺 类类 一、对氨基苯甲

2、酸酯类药物的基本结构与主要化学性质一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构和典型药物（一）基本结构和典型药物具有对氨基苯甲酸具有对氨基苯甲酸酯的母体酯的母体结构中芳伯氨基未结构中芳伯氨基未被取代，而在芳环对被取代，而在芳环对位有取代位有取代典型药物的结构 COOC2H5H2N苯佐卡因苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2 HCl盐酸普鲁卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2 HCl盐酸氯普鲁卡因Cl盐酸丁卡因盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2 HCl盐酸普鲁卡因酰胺

3、键酰胺键酯键酯键COOCH2CH2N(C H3)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因盐酸丁卡因（二）主要化学性质（二）主要化学性质(1) (1) 芳伯氨基特性：芳伯氨基特性： 可显重氮化可显重氮化- -偶合反应偶合反应( (芳香第一胺类反应芳香第一胺类反应) ) 与芳醛缩合与芳醛缩合 易氧化变色易氧化变色(2) (2) 酯键易水解特性：酯键易水解特性： (3)(3) 弱碱性：弱碱性： 脂烃胺侧链为叔胺氮原子，具有弱碱性脂烃胺侧链为叔胺氮原子，具有弱碱性 要采用非水溶液滴定法或亚硝酸钠滴定法测要采用非水溶液滴定法或亚硝酸钠滴定法测定含量定含量 与生物碱沉淀剂发生沉淀反应与生物碱沉淀剂发生沉淀

4、反应苯佐卡英除外苯佐卡英除外（4 4）溶解性：）溶解性： 具芳伯氨基，或同时具脂烃胺侧链，游离碱多为具芳伯氨基，或同时具脂烃胺侧链，游离碱多为碱性油状物或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机碱性油状物或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂溶剂 盐酸盐均为白色结晶或结晶性粉末，具有一定的盐酸盐均为白色结晶或结晶性粉末，具有一定的熔点。在水和乙醇中易溶，难溶于乙醚、氯仿等有熔点。在水和乙醇中易溶，难溶于乙醚、氯仿等有机溶剂机溶剂 普鲁卡因盐酸盐水溶液加氢氧化钠或碳酸钠溶液，普鲁卡因盐酸盐水溶液加氢氧化钠或碳酸钠溶液，有油状的普鲁卡因析出有油状的普鲁卡因析出二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质二、酰胺

5、类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构和典型药物（一）基本结构和典型药物 芳伯氨基被酰芳伯氨基被酰化，并且在芳环对位化，并且在芳环对位有取代，有取代， 共性为具有芳酰氨基共性为具有芳酰氨基典型药物的结构： HONHCOCH3对乙酰氨基酚（扑热息痛）对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜醋氨苯砜NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因盐酸利多卡因NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因盐酸布比卡因（二）主要化学性质（二）主要化学性质（1 1）水解产物呈芳伯氨基特性）水解产物呈芳伯氨基特性: : 药物结构中具有酰氨基，在药物结构中具有酰

6、氨基，在酸性酸性溶液中溶液中易水解得具有芳伯氨基的产物易水解得具有芳伯氨基的产物 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚水解速度较快，而水解速度较快，而盐酸利多卡因、盐酸利多卡因、盐酸布比卡因盐酸布比卡因的盐水溶液较稳定的盐水溶液较稳定（2 2）水解产物易酯化）水解产物易酯化(3)(3)酚羟基的特性酚羟基的特性与三氯化铁发生呈色反应与三氯化铁发生呈色反应 是是对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚专属专属反应，用于区别同类药物反应，用于区别同类药物利多卡因利多卡因（4 4）溶解性：）溶解性： 对乙酰氨基酚在热水中或乙醇中易溶，在丙酮对乙酰氨基酚在热水中或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶中溶解，在水中略溶 三、鉴别试验

7、三、鉴别试验（一）重氮化（一）重氮化- -偶合反应偶合反应芳香第一胺类鉴别反应 ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄猩红色萘酚OH-注意：注意：在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性一萘酚试一萘酚试剂。剂。直接：直接：盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸氯普鲁盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺卡因、盐酸普鲁卡因胺间接：间接：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 鉴别时先用酸水解后，在滴加鉴别时先用酸水解后，在滴加亚硝酸钠亚硝酸钠试液及碱性试液及碱性一萘酚试剂。一萘酚试剂。（1 1）盐酸普鲁卡因

8、的鉴别盐酸普鲁卡因的鉴别（直接）（直接）盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChPChP（20052005） 鉴别鉴别 （1 1）本品显芳香第一胺类的鉴别反）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录应（附录） 取供试品约取供试品约50mg50mg，加稀盐酸，加稀盐酸1m11m1，必要时，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L0.1mo1/L亚硝酸钠亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。（2 2） 对乙酰氨基酚的鉴别（间接）对乙酰氨基酚的鉴别（间接）对氨基酚对乙酰氨基酚

9、、HCl对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 ChPChP（20052005） 鉴别鉴别 （2 2）取本品约）取本品约0.1g0.1g，加稀盐酸，加稀盐酸5m15m1，置水浴中加热置水浴中加热4040分钟，放冷；取分钟，放冷；取0.5m10.5m1，滴加，滴加亚硝酸钠试液亚硝酸钠试液5 5滴，摇匀，用水滴，摇匀，用水3ml3ml稀释后，稀释后，加碱性加碱性-萘酚试液萘酚试液2m12m1，振摇，即显红色。，振摇，即显红色。 特例：盐酸丁卡因特例：盐酸丁卡因COOCH2CH2N(C H3)2CH3(CH2)3NHHCl分子结构中不具芳伯氨基分子结构中不具芳伯氨基芳香仲胺芳香仲胺芳香仲胺芳香仲胺酸性酸性亚硝酸钠

10、试液亚硝酸钠试液乳白色乳白色N-亚硝基化合物沉淀亚硝基化合物沉淀与具有芳伯氨基的同类药物区别与具有芳伯氨基的同类药物区别（二）三氯化铁反应（二）三氯化铁反应对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚（三）与重金属离子反应（三）与重金属离子反应 1、盐酸利多卡因的鉴别、盐酸利多卡因的鉴别A、与重金属、与重金属CU2的反应的反应盐酸利多卡因盐酸利多卡因 NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl碳酸钠试液碳酸钠试液Cu2+蓝紫色配位化合物蓝紫色配位化合物三氯甲烷提取三氯甲烷提取提取液显黄色提取液显黄色药典收载方法之一，药典收载方法之一，相同反应条件下相同反应条件下芳胺类药物（苯佐卡因、盐酸普鲁卡芳胺类药物（苯

11、佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸丁卡因等）因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸丁卡因等）无此反应无此反应B、与钴盐反应、与钴盐反应盐酸利多卡因盐酸利多卡因酸性酸性氯化钴试液氯化钴试液亮绿色细小钴盐沉淀亮绿色细小钴盐沉淀C、与汞盐反应、与汞盐反应盐酸利多卡因盐酸利多卡因硝酸酸化硝酸酸化Hg+，黄色黄色区别于对氨基区别于对氨基苯甲酸酯类苯甲酸酯类（显红色或橙（显红色或橙黄色）黄色）2、盐酸普鲁卡因胺的鉴别、盐酸普鲁卡因胺的鉴别CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl酰胺键酰胺键盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺H2O2，氧化，氧化羟肟酸羟肟酸FeCl3试液试液羟肟酸铁羟肟酸铁先显紫红色，先显紫红色

12、，随即呈暗棕色随即呈暗棕色至棕黑色至棕黑色药典收载药典收载（四）水解产物的反应（四）水解产物的反应 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChPChP（20052005） 鉴别鉴别 （2 2）取本品约）取本品约0.1g0.1g，加水，加水2ml2ml溶解后，溶解后，加加1010氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml1ml，即生成，即生成白色沉淀白色沉淀；加热，；加热，变为油状物；继续加热，产生的变为油状物；继续加热，产生的蒸气蒸气，能使湿润，能使湿润的的红色石蕊试纸变为蓝色红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀白色沉淀。 ）对对氨氨基基

13、苯苯甲甲酸酸（白白色色对对氨氨基基苯苯甲甲酸酸钠钠纸纸变变兰兰色色）（使使湿湿润润的的红红色色石石蕊蕊试试二二乙乙氨氨基基乙乙醇醇对对氨氨基基苯苯甲甲酸酸钠钠油油状状物物（普普鲁鲁卡卡因因）普普鲁鲁卡卡因因盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因 HCl NaOH苯佐卡因的鉴别：苯佐卡因的鉴别：苯佐卡因苯佐卡因NaOH试液试液乙醇乙醇碘试液碘试液黄色沉淀黄色沉淀碘仿臭气碘仿臭气（五）制备衍生物测定熔点（五）制备衍生物测定熔点 通常的衍生物为：通常的衍生物为： 三硝基苯酚衍生物三硝基苯酚衍生物 硫氰酸盐衍生物硫氰酸盐衍生物（六）紫外特征吸收光谱（六）紫外特征吸收光谱 具有的苯环结构，具有紫外吸收光谱具有的苯环结

14、构，具有紫外吸收光谱 针对不同的药物、不同的溶剂、不同的浓度、针对不同的药物、不同的溶剂、不同的浓度、它们的吸收波长不同，吸收系数也不同它们的吸收波长不同，吸收系数也不同 盐酸布比卡因盐酸布比卡因 ChPChP（20052005） 鉴别鉴别 （2 2）取本品，精密称定，按干燥品计算，）取本品，精密称定，按干燥品计算，加加0.01mol/L0.01mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml1ml中含中含0.40mg0.40mg的溶液，的溶液，照分光光度法（附录照分光光度法（附录AA）测定，在）测定，在263nm263nm与与271nm271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为的波长处有最大吸

15、收；其吸收度分别为0.530.530.580.58与与0.430.430.480.48。（五）红外吸收光谱（五）红外吸收光谱 当该类药物采用其他方法难以进行区别时，用当该类药物采用其他方法难以进行区别时，用红外吸收光谱就比较容易区别。红外吸收光谱就比较容易区别。四、特殊杂质的检查四、特殊杂质的检查（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查 用对硝基氯苯、苯酚、硝基苯作原料，用对硝基氯苯、苯酚、硝基苯作原料，但都以但都以对氨基苯酚对氨基苯酚为主要中间体制备对为主要中间体制备对乙酰氨基酚。乙酰氨基酚。1 1、乙醇溶液的澄清度与颜色、乙醇溶液的澄清度与颜色 合成工艺中，用合

16、成工艺中，用铁粉铁粉作还原剂作还原剂 乙醇溶液的澄清度乙醇溶液的澄清度 如溶液浑浊，可与如溶液浑浊，可与1#1#浊度浊度标准液比较，不得更浓标准液比较，不得更浓 乙醇溶液的颜色：检查中间体对氨基酚的有色乙醇溶液的颜色：检查中间体对氨基酚的有色氧化产物。氧化产物。如显色，与如显色，与棕红色棕红色2 2号或橙红色号或橙红色2 2号号比较，不得更深比较，不得更深2 2、有关物质、有关物质主要杂质主要杂质：中间体、副产物及分解产物。：中间体、副产物及分解产物。 例如：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、例如：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、O-O-乙酰基对乙乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等酰氨基酚、

17、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等检查对象检查对象：对氯苯乙酰胺：对氯苯乙酰胺方法方法：TLCTLC法，杂质对照品法法，杂质对照品法注意事项注意事项： 尽量在较低温度下进行，减少乙醚的挥发尽量在较低温度下进行，减少乙醚的挥发 供试品点样量大，点样直径不宜超过供试品点样量大，点样直径不宜超过7mm7mm判断方法判断方法：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深主斑点比较，不得更大，更深 3 3、对氨基酚、对氨基酚杂质来源杂质来源 中间体、水解产物中间体、水解产物 反应原理 兰色亚硝基铁氰化钠对氨基酚OH药物主成分对乙酰氨基酚无此呈色反应

18、药物主成分对乙酰氨基酚无此呈色反应 注意事项：注意事项： 对氨基酚对氨基酚对照液对照液稳定性差稳定性差，临用前配置，临用前配置 用于原料药中对氨基酚的检查，制剂用用于原料药中对氨基酚的检查，制剂用HPLCHPLC法法检查方法检查方法 对照法对照法 %005. 0%1000 . 11050 %1006供试品量允许杂质存在的最大量L 取本品取本品1.0g，加甲醇溶液（，加甲醇溶液（12）20ml溶溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，摇匀，放置放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚加对氨基酚50 g用同一方

19、法制成的对照液用同一方法制成的对照液比较，不得更深（比较，不得更深（0.005）。）。 （二）盐酸普鲁卡因注射液中（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸的的检查检查 原理：原理： TLC TLC 杂质对照品法杂质对照品法 对氨基苯甲酸最低检出量为对氨基苯甲酸最低检出量为0.01g0.01g 苯胺最低检出量苯胺最低检出量0.01g 0.01g 1.2%1.2%H2NH2NCOOH-CO2O =OO黄色 精密量取本品，加乙醇稀释使成为每精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，的溶液，作为供试品溶液。取

20、对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每加乙醇制成每1ml中含中含30 g的溶液，作为对照品溶液。取上的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各述两种溶液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶的硅胶H薄层板上，用苯薄层板上，用苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14 1 1 4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸，加冰醋酸5ml制成）制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，喷雾显色。供试品溶液如显

21、与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。不得更深。 %2.1%100105.2101030 %1003供试品量允许杂质存在的最大量L（三）盐酸（三）盐酸氯氯普卡因注射液中有关物质和光解产物普卡因注射液中有关物质和光解产物的检查的检查 由于盐酸氯普卡因注射液在生产和贮藏过程中由于盐酸氯普卡因注射液在生产和贮藏过程中会产生会产生4-氨基氨基-2-氯苯甲酸氯苯甲酸，影响疗效和成品的颜，影响疗效和成品的颜色，故此需要对降解产物进行检查色，故此需要对降解产物进行检查1、高效液相色谱法（、高效液相色谱法（HPLC）2、液相色谱与质谱联用法（、液相色谱

22、与质谱联用法（LC-MS）MS LCLC-MSLC-MS/MSLC-ESI-MS/MSLC-APCI-MS/MSLC-ESI-TOF-MS/MSLC-MALDI-TOF-MS/MSLC-MS分析：分析：1、色谱条件、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm4.6 mm, i.d., 5 m)Column temperature: 25 Mobile phase:0.5%HAc-CH3CN (0.5%HAc)=87: 13flow rate: 1.0 ml/minDetection wavelength: 254 nm2、质谱条件、质谱条件Positive Scan mode 8060

23、0 mau喷雾电压：喷雾电压：4000V裂解电压：裂解电压：70VN2-9.5 L/min干燥气压力：干燥气压力：40psi干燥气温度：干燥气温度：3504氨基氨基2氯苯甲酸氯苯甲酸（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查CH3CH3NHCONC3H7HCl长效酰胺类局麻药，长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大盐酸罗哌卡因心脏毒性大 临床使用临床使用S盐酸罗哌卡因盐酸罗哌卡因高效毛细管电泳高效毛细管电泳五、含量的测定五、含量的测定( (一一) )亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法1 1、原理、原理终点指示：永停法终点指示：永停法（外指示剂法）（外指示剂法）例：中

24、国药典（例：中国药典（20052005年版）收载有年版）收载有具有芳伯氨基的药物具有芳伯氨基的药物盐酸普鲁卡因及其注射盐酸普鲁卡因及其注射剂、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射剂、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射剂、注射用盐酸普鲁卡因剂、注射用盐酸普鲁卡因 具有潜在芳伯氨基的药物醋氨苯砜及其注射液具有潜在芳伯氨基的药物醋氨苯砜及其注射液NHCOR + H2ONH2 + RCOOHH+NO2 + 6HNH2 + 2H2O具酰胺具酰胺, ,经水解经水解具硝基具硝基, ,经还原经还原2 2、主要测定条件、主要测定条件（1 1）加入适量）加入适量KBrKBr加速反应加速反应: KBr: KB

25、r为催化剂为催化剂不同的酸影响反应速度：不同的酸影响反应速度：HBr HClHBr HCl HNO HNO3 3、H H2 2SOSO4 4N N+Cl-快N N OH快N NOH慢NO+Cl-NH2NaNO2+HClHNO2+NaClOHNOBr HBr HNO22OHNOCl HClHNO22K1K2K K1 1300 K300 K2 2 加入加入KBrKBr，可增大被，可增大被测溶液中测溶液中NONO+ +的浓度的浓度 在盐酸存在下重氮化反应在盐酸存在下重氮化反应 与芳伯氨基的游离程度有关与芳伯氨基的游离程度有关若芳伯氨基的碱性较弱，则成盐的比例较小，若芳伯氨基的碱性较弱，则成盐的比例较

26、小，即游离芳伯氨基较多，反应速度就快即游离芳伯氨基较多，反应速度就快若芳伯氨基碱性较强，则成盐比例较大，游若芳伯氨基碱性较强，则成盐比例较大，游离芳伯氨基较少，则反应速度就慢离芳伯氨基较少，则反应速度就慢NN+C l-快NNO H快NN OH慢N O+C l-N H2（2 2）加过量盐酸的作用：）加过量盐酸的作用： 胺类药物的盐酸盐比硫酸盐的溶解度大胺类药物的盐酸盐比硫酸盐的溶解度大 可以加快重氮化反应速度可以加快重氮化反应速度 增加重氮盐在酸性溶液中的稳定性增加重氮盐在酸性溶液中的稳定性 防止偶氮氨基化合物的生成防止偶氮氨基化合物的生成结论结论：加速反应：加速反应注意事项注意事项：酸度不能过

27、大：酸度不能过大 L 会阻碍芳伯氨基会阻碍芳伯氨基的游离，影响反应的游离，影响反应速度速度L 可使亚硝酸分解可使亚硝酸分解 芳胺类药物芳胺类药物: :酸的摩尔比酸的摩尔比= 1:2.5= 1:2.56 6（3 3）控制温度：在）控制温度：在10103030条件下滴定条件下滴定 温度每升高温度每升高lOlO，重氮化反应则加快，重氮化反应则加快2.52.5倍，倍，但重氮盐分解速度亦相应地加速但重氮盐分解速度亦相应地加速2 2倍倍 若温度过低，反应又太慢若温度过低，反应又太慢（4 4）滴定管尖端插入液面下滴定）滴定管尖端插入液面下滴定 滴定速度：滴定速度：先快后慢先快后慢 滴定时将滴定管尖端插入液面

28、下约滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/32/3处，处，一次把大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加一次把大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加入，使其尽快反应入，使其尽快反应 将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定端，再缓缓滴定 在近终点时，在近终点时， 剩余的芳伯氨基的浓度极剩余的芳伯氨基的浓度极稀，需在最后一滴加入后，搅拌稀，需在最后一滴加入后，搅拌1 15min5min，再，再确定终点是否真正到达确定终点是否真正到达3 3、终点指示方法、终点指示方法 永停滴定法永停滴定法 电位法电位法 外指示剂法外指示剂法 内指示剂法内指示剂法（1 1）永停滴定法

29、）永停滴定法中国药典收载中国药典收载终点：电极起氧化终点：电极起氧化- -还原反还原反应，电流计指针偏转应，电流计指针偏转终点前：电极不起终点前：电极不起氧化氧化- -还原反应，还原反应，电流计的指针指零电流计的指针指零（2 2）外指示剂法：）外指示剂法： KIKI淀粉糊剂或试纸淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O碘化钾被氧化碘化钾被氧化遇淀粉，显遇淀粉，显蓝色蓝色操作要点：操作要点：显色要立即显色要立即 原因：原因：指示剂在酸性条件下置于空气中一段时间指示剂在酸性条件下置于空气中一段时间后，空气将指示剂中后，空气将指示剂中KIKI氧化为氧

30、化为I I2 2而使淀粉变蓝色而使淀粉变蓝色样品易损失样品易损失LL 弥补方法：弥补方法： 通过滴定度计算，得大概的用量通过滴定度计算，得大概的用量 预先做一份求得大概用量，然后再准确测定，预先做一份求得大概用量，然后再准确测定， 蘸取试验时取量一定要少蘸取试验时取量一定要少( (二二) )非水溶液滴定法非水溶液滴定法 盐酸丁卡因、盐酸利多卡因等结构中含有盐酸丁卡因、盐酸利多卡因等结构中含有弱碱性氮原子，药典收载方法采用非水溶液滴弱碱性氮原子，药典收载方法采用非水溶液滴定法测定含量定法测定含量 滴定方法：大多以冰醋酸为溶剂，高氯酸滴定方法：大多以冰醋酸为溶剂，高氯酸为滴定液，针对不同药物采用不

31、同的指示剂指为滴定液，针对不同药物采用不同的指示剂指示终点示终点( (三三) )紫外分光光度法分子结构中都有苯环紫外分光光度法分子结构中都有苯环 中国药典（中国药典（20052005年版）：百分吸收系数法年版）：百分吸收系数法 对乙酰氨基酚在对乙酰氨基酚在0.40.4氢氧化钠氢氧化钠溶液中，溶液中，于于257nm257nm波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其特征，可用于其对乙酰氨基酚原料、片剂、注对乙酰氨基酚原料、片剂、注射剂、栓剂和胶囊剂射剂、栓剂和胶囊剂的含量测定的含量测定USP30-NF25(2007USP30-NF25(2007年亚洲版）：对照

32、品比较法年亚洲版）：对照品比较法 采用采用甲醇水甲醇水为溶剂，为溶剂，244nm244nm为吸收波长为吸收波长例：对乙酰氨基酚的测定方法：例：对乙酰氨基酚的测定方法： 取本品约取本品约40mg40mg，精密称定，放在，精密称定，放在250 ml250 ml量瓶量瓶中，加中，加0.4%0.4%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5Oml5Oml溶解后，加水溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取至刻度，摇匀，精密量取5m15m1，置，置1OOml1OOml量瓶量瓶中，加中，加0.4%0.4%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液lOmllOml，加水至刻度，加水至刻度，摇匀，在摇匀，在257nm 257nm 的波长处测定吸收度

33、，按对的波长处测定吸收度，按对乙酰氨基酚（乙酰氨基酚（C C8 8H H9 9NONO2 2）的百分吸收系数）的百分吸收系数 为为715715计算，即得。计算，即得。 本品按干燥品 计 算 ， 含 对 乙 酰 氨 基 酚本品按干燥品 计 算 ， 含 对 乙 酰 氨 基 酚（C C8 8H H9 9NONO2 2）应为）应为98.0%98.0%102.0%102.0%。%11cmE原料药的含量计算：原料药的含量计算：供试品的测量浓度：供试品的测量浓度： 单位：单位：g/100 mlg/100 ml供试品的稀释体积：供试品的稀释体积：25025020 ml20 ml供试品的称重量：供试品的称重量：

34、W=0.04 gW=0.04 g所以：含量所以：含量%=%= %11cmEAC %100100120250WC（四）高效液相色谱法（四）高效液相色谱法（HPLCHPLC） 同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的盐酸普同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的盐酸普鲁卡因和它的降解产物对氨基苯甲酸，鲁卡因和它的降解产物对氨基苯甲酸，色谱条件：色谱条件：反相反相C C1818柱柱内内 标：标：苯甲酸苯甲酸流流 动动 相：相：甲醇甲醇: :1%1%醋酸醋酸=40=40 : 6060，pH=4.7pH=4.7流流 速：速：1.1ml/min1.1ml/min检测波长：检测波长：250 nm250 nm第二节第二节 苯乙胺

35、类药物的分析苯乙胺类药物的分析 一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型药物R1CH CH NH R2OH R3*拟肾上腺素类药物拟肾上腺素类药物常见的苯乙胺类药物常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCHOHCH2NHCH3 HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2 HClHO盐酸异丙肾上腺素结构特点：结构特点： 苯环上都有酚羟基苯环上都有酚羟基 肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸异丙

36、肾上肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素分子结构中苯环的腺素分子结构中苯环的3 3，4 4位上都有位上都有2 2个邻位酚羟基个邻位酚羟基（二）主要化学性质（二）主要化学性质1 1、弱碱性、弱碱性 烃氨基侧链，氮为仲胺氮，显弱碱性，游离烃氨基侧链，氮为仲胺氮，显弱碱性，游离碱溶于有机溶剂，难溶于水；而盐能溶于水碱溶于有机溶剂，难溶于水；而盐能溶于水2 2、酚羟基特性、酚羟基特性 与重金属离子络合呈色，置空气中或遇光与重金属离子络合呈色，置空气中或遇光易氧化变色，在碱性溶液中更易变色易氧化变色，在碱性溶液中更易变色 发生三氯化铁反应发生三氯化铁反应3 3、具手性碳原子，、具手性碳原子，

37、 旋光性旋光性4 4、苯环上的取代基可供分析用、苯环上的取代基可供分析用5 5、有紫外吸收与红外吸收特征、有紫外吸收与红外吸收特征二、鉴别试验二、鉴别试验（一）与三氯化铁反应（一）与三氯化铁反应药物药物与三氯化铁反应显色与三氯化铁反应显色肾上腺素肾上腺素翠绿色，加氨试液，显翠绿色，加氨试液，显紫色紫色紫红色紫红色重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素翠绿色，加碳酸氢钠试液，显蓝色翠绿色，加碳酸氢钠试液，显蓝色红色红色盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素紫色紫色盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素深绿色，滴加新制的深绿色，滴加新制的5 5碳酸氢钠试液，显蓝碳酸氢钠试液，显蓝色色红色红色硫酸沙丁胺醇硫酸

38、沙丁胺醇紫色，紫色，加碳酸氢钠试液，橙黄色混浊加碳酸氢钠试液，橙黄色混浊（二）与甲醛（二）与甲醛- -硫酸反应硫酸反应 与甲醛与甲醛- -硫酸试液反应，形成具有醌式结构硫酸试液反应，形成具有醌式结构的有色化合物。的有色化合物。可用于区别同类药物可用于区别同类药物。药物药物与甲醛硫酸试液反应与甲醛硫酸试液反应肾上腺素肾上腺素红色红色重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素淡红色淡红色盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素玫瑰红玫瑰红橙红橙红 深棕红深棕红盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素棕色至暗紫色棕色至暗紫色（三）氧化反应（三）氧化反应 呈不同颜色被氧化剂氧化药物H碘、过氧化氢、碘、过氧化氢、铁氰化钾

39、铁氰化钾具有酚羟基具有酚羟基例：盐酸异丙肾上腺素例：盐酸异丙肾上腺素加硫代硫酸钠使过量加硫代硫酸钠使过量碘的棕色消失碘的棕色消失 溶液显淡红色溶液显淡红色 H+例例: :肾上腺素肾上腺素 例例: :重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素( (与异丙肾上腺素和肾上腺素区别与异丙肾上腺素和肾上腺素区别) )无色或微红色或淡紫色重酒石酸去甲肾上腺素256.3IpH肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的化产生明显的红棕色或紫色红棕色或紫色在在pHpH为为6.56.5的条件下，的条件下，是无法区分是无法区分H2O2肾上腺素红肾上腺素红显血红色显血红色H+棕色多聚体

40、棕色多聚体（四）紫外特征吸收与红外吸收光谱（四）紫外特征吸收与红外吸收光谱 中国药典规定利用紫外特征吸收与红外中国药典规定利用紫外特征吸收与红外吸收光谱可以用来鉴别苯乙胺类药物。吸收光谱可以用来鉴别苯乙胺类药物。例：盐酸异丙肾上腺素可采用其例：盐酸异丙肾上腺素可采用其水水溶液溶液 ( (浓浓度为度为0.O5mg/ml)0.O5mg/ml)在在280nm280nm处的吸收度为处的吸收度为0.500.50，进行鉴别进行鉴别; ;盐酸异丙肾上腺素亦采用红外吸盐酸异丙肾上腺素亦采用红外吸收光谱进行鉴别。收光谱进行鉴别。 是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱

41、（盐酸伪麻黄碱）、盐酸去氧肾上腺素鉴麻黄碱（盐酸伪麻黄碱）、盐酸去氧肾上腺素鉴别：别：（五）双缩脲反应（五）双缩脲反应盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱 显显蓝紫色蓝紫色 乙醚醚层醚层紫红色紫红色水层水层蓝色蓝色CuSO4+NaOH 盐酸去氧肾上腺素溶液盐酸去氧肾上腺素溶液CuSO4试液试液NaOH试液试液显紫色显紫色加乙醚振摇加乙醚振摇醚层不显色醚层不显色与盐酸麻黄碱区别与盐酸麻黄碱区别三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查1 1、酮体检查、酮体检查杂质来源：杂质来源：原料残存（氢化不完全）原料残存（氢化不完全）检查范围：检查范围：肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上

42、腺素和盐酸异丙肾上腺素等药盐酸去氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素等药检查原理：检查原理：利用酮体在利用酮体在310nm310nm处有最大吸收，而处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收。药物本身在此波长几乎没有吸收。检查方法检查方法 吸收度法吸收度法 例：以重酒石酸去甲肾上腺素为例例：以重酒石酸去甲肾上腺素为例。 例：重酒石酸去甲肾上腺素例：重酒石酸去甲肾上腺素 2.0mg/ml2.0mg/ml，3 1 0 n m3 1 0 n m 处 测 定 ，处 测 定 ， A0.05A0.05，酮体的限，酮体的限量量0.05%0.05%药物药物检查杂质检查杂质溶剂溶剂样品样品浓度浓度测定测定波长波长A

43、A肾上腺素肾上腺素肾上腺酮肾上腺酮HCLHCL2.02.0（mg/ml)mg/ml)310nm310nm0.050.05盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素酮体酮体水水0.20.2重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮去甲肾上腺酮0.050.05盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素酮体酮体0.150.152 2、 有关物质的检查有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇TLCTLC 盐酸苯乙双胍盐酸苯乙双胍-PC-PC 盐酸氨溴索盐酸氨溴索HPLCHPLC采用采用TLCTLC法中的高低浓度对比法进行检查法中的高低浓度对比法进行检查盐酸氨溴索的检查方法盐酸

44、氨溴索的检查方法对照样品制备：本品对照样品制备：本品供试品溶液供试品溶液对照溶液对照溶液供试样品制备：本品供试样品制备：本品甲醇溶解甲醇溶解加甲醛溶液加甲醛溶液加热加热吹干溶剂吹干溶剂用水和流动相溶解用水和流动相溶解HPLC分析分析色谱条件：色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN (50:50); 248 nm分析：对照溶液主成分峰为满量程的分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记录至，记录至主成分峰保留时间的主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之各杂峰的面积之和不得

45、大于对照液主峰面积的三分之一。一。Main peak主峰主峰杂质杂质AA31 四、含量测定四、含量测定 原料药原料药: :非水溶液滴定法和溴量法非水溶液滴定法和溴量法 制剂制剂: :提取容量法、阴离子表面活性剂滴定法、提取容量法、阴离子表面活性剂滴定法、紫外分光光度法、比色法和高效液相色谱法等。紫外分光光度法、比色法和高效液相色谱法等。( (一一) )非水溶液滴定法非水溶液滴定法 原料药原料药, ,脂烃胺基侧链，显弱碱性脂烃胺基侧链，显弱碱性 测定条件测定条件: :用冰醋酸做溶剂，加入醋酸汞试用冰醋酸做溶剂，加入醋酸汞试液消除氢卤酸的干扰，并以结晶紫指示液指示液消除氢卤酸的干扰，并以结晶紫指示

46、液指示终点，终点，0.1mol/L0.1mol/L的高氯酸作滴定液。的高氯酸作滴定液。 同时作空白试验。同时作空白试验。( (二二) )溴量法溴量法 盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 采用溴量法测定含量。采用溴量法测定含量。例：以去氧肾上腺素为例讨论溴量法例：以去氧肾上腺素为例讨论溴量法原理：原理：操作要点操作要点(1) (1) 操作过程中必须防止逸失操作过程中必须防止逸失(2)(2)溴液不能太过量溴液不能太过量: : 过量：溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化过量：溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化 一般加入的一般加入的溴液以过量溴液以过量2%2%为宜为宜 (3)(3)进行空白试验：校正操作中

47、溴及碘的可能逸失进行空白试验：校正操作中溴及碘的可能逸失盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂 标标准准酸酸直直接接滴滴定定提提取取液液蒸蒸干干游游离离碱碱药药物物残残渣渣用用中中性性乙乙醇醇溶溶解解有有机机溶溶剂剂提提取取碱碱性性试试剂剂碱碱化化（三）提取酸碱滴定法（三）提取酸碱滴定法依据性质依据性质游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂方法一：方法一：终点终点酸（过量）酸（过量）提取液提取液游离碱游离碱药物药物滴定滴定甲基红、甲基红、低温蒸去乙醚低温蒸去乙醚定量过量的酸定量过量的酸有机溶剂提取有机溶剂提取碱性试剂碱化碱性试剂碱化NaOH方法二方法

48、二：硫酸苯丙胺的含量测定：硫酸苯丙胺的含量测定：BH2SO4 + NaOH + NaCl乙醚乙醚提取提取B+ H2SO4蒸去乙醚蒸去乙醚NaOHNaOH标准液滴定标准液滴定终点终点( (四四) )紫外分光光度法和比色法紫外分光光度法和比色法 利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶合反应，以及分子结构中的偶合反应，以及分子结构中的ArAr-OH-OH与与FeFe3 3络合显色，进行比色测定。络合显色，进行比色测定。分之结构中的分之结构中的苯乙胺苯乙胺结构采用紫外法测定结构采用紫外法测定分子结构中的分子结构中的酚羟基酚羟基可与亚铁离子络合显色可与亚铁离子络合

49、显色分子结构中的分子结构中的芳伯氨基芳伯氨基进行重氮化反应显色进行重氮化反应显色用于制剂的含量测定用于制剂的含量测定 例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定ClN2+Cl -CH(OH)CH2NHC(CH3)3ClClCH(OH)CH2NHC(CH3)3ClNHCH2CH2NH2+N=NNHCH2CH2NH2N-(1-萘基）乙二胺500nm比色测定上述偶合剂可与上述偶合剂可与HNOHNO2 2显色，干扰比色测定，可先加氨基显色，干扰比色测定，可先加氨基磺酸铵分解过量的磺酸铵分解过量的HNOHNO2 2。( (五五) )高效液相色谱法高效液相色谱法例：重酒石酸去甲肾上腺素注

50、射液例：重酒石酸去甲肾上腺素注射液 离子对反相高效液相色谱法离子对反相高效液相色谱法 内标法定量内标法定量 调节溶液调节溶液pHpH为为3.83.8，加入，加入离子对试剂十二烷基离子对试剂十二烷基磺酸钠磺酸钠 其它分析技术与方法其它分析技术与方法高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁胺醇含量的测定胺醇含量的测定毛细管：毛细管：75 m(i.d) 50 cm，有效长度，有效长度39 cm，未涂，未涂层石英毛细管柱层石英毛细管柱(河北永年锐沣色谱器件有限公司河北永年锐沣色谱器件有限公司)；缓冲液：缓冲液：60 mmolL的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶的柠