药物定量分析与分析方法验证课件.ppt

1、第四章 药物定量分析与分析方法验证第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 一、概述一、概述 1.1.结构特征与分析方法之间的关系结构特征与分析方法之间的关系 含卤素有机药物含卤素有机药物 R-X （F，Cl, Br, I ） 卤素与芳环相连卤素与芳环相连 Ar-X 结合牢固，需有机破坏结合牢固，需有机破坏 卤素与脂肪链相连卤素与脂肪链相连 R-X 结合较不牢固，不需有机结合较不牢固，不需有机破坏破坏 含金属有机药物含金属有机药物 含金属有机药物含金属有机药物 R-O-Me，有机酸或酚的金属盐，有机酸或酚的金属盐/配位化合物；配位化合物； 结合不牢固，可直接测定结合不牢固

2、，可直接测定 有机金属药物有机金属药物 R-Me ，结合牢固，适当处理后测定，结合牢固，适当处理后测定 2 2、药物分析中常用的分析方法、药物分析中常用的分析方法 不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法（一） 不经有机破坏的分析方法： 直接测定法 凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些C-M（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可以电离，可选用本法。例例1：富马酸亚铁的含量测定（：富马酸亚铁的含量测定（铈量法，铈量法，ChP 2000） 终点：终点： 邻二氮菲邻二氮菲(+Fe3+)溶于热稀矿酸溶于热稀矿酸Fe2

3、+Ce4+Fe3+指示剂指示剂:邻二氮菲邻二氮菲 (+Fe2+)红色红色淡蓝色淡蓝色滴定的结果用空白试验校正。滴定的结果用空白试验校正。每每1ml硫酸铈滴定液硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于相当于16.99mg富马酸亚铁。富马酸亚铁。 例例2 2、葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠的测定的测定 ChPChP（20002000） 取本品约取本品约0.3g0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水水100ml100ml、盐酸、盐酸15ml15ml与碘化钾试液与碘化钾试液10ml10ml，密塞、振摇后，密塞、振摇后，在暗处静置在暗处静置10min10min，用硫代硫酸钠滴定液

4、，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lmllml的硫代硫的硫代硫酸钠滴定液酸钠滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于6.088mg6.088mg的的SbSb。 例例3 3、枸橼酸铁铵的测定、枸橼酸铁铵的测定 ChPChP（20002000） 取本品约取本品约0.5g0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中。加，精密称定，置具塞锥形瓶中。加水水15ml15ml溶解后，加硫酸溶解后，加硫酸lml

5、lml，加热至溶液由暗棕色变成，加热至溶液由暗棕色变成淡黄色，放冷至约淡黄色，放冷至约1515，滴加高锰酸钾试液至溶液显，滴加高锰酸钾试液至溶液显粉红色并持续粉红色并持续5s5s，加盐酸，加盐酸15ml15ml与碘化钾试液与碘化钾试液15ml15ml，密，密塞，静置塞，静置3min3min，加水，加水50ml50ml稀释后，用硫代硫酸钠滴定稀释后，用硫代硫酸钠滴定液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定至近终点时，加淀粉指示液滴定至近终点时，加淀粉指示液2ml2ml，继，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每每lmllml的

6、硫代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于5.585mg5.585mg的的FeFe。 （二）经水解后测定法（二）经水解后测定法1.1.碱水解后测定法碱水解后测定法 是将含卤素的有机药物溶于适当是将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后，溶剂（如乙醇）中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素经水解作用转加热回流使其水解，将有机结合的卤素经水解作用转变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定。变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定。本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢本法适

7、用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物，如卤素和脂肪碳链相连者。固的药物，如卤素和脂肪碳链相连者。 例例: :三氯叔丁醇的测定三氯叔丁醇的测定 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使量过量的硝酸银滴定液，使ClCl- -生成生成AgClAgCl沉淀，过量的沉淀，过量的硝酸银，以硝酸银，以FeFe3+3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。 CCl3-

8、 -C(CH3)2- -OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2- -CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010- -12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 测定方法测定方法 取本品约取本品约0.1g0.1g，精密称定，加乙，精密称定，加乙醇醇5ml5ml溶解后，加溶解后，加20%20%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml5ml，加热回，加热回流流15min15min，放冷至室温，加水，放冷至室

9、温，加水20ml20ml与硝酸与硝酸5ml5ml，精，精密加硝酸银滴定液密加硝酸银滴定液(0.1mol/L) 30ml(0.1mol/L) 30ml，再加邻苯，再加邻苯二甲酸二丁酯二甲酸二丁酯5ml5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸，密塞，强力振摇后，加硫酸铁胺指示液铁胺指示液2ml2ml，用硫氰酸胺滴定液，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于6.216mg6.216mg的的C C4 4H H7 7ClCl3 3O

10、1/2HO1/2H2 2O O。反应摩尔比为反应摩尔比为1 3mlmg216. 6Lg216. 63molg47.186Lmol1 . 0ncMTT滴定度，每滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mg数数c滴定液浓度，滴定液浓度，mol/LM被测物的摩尔质量，被测物的摩尔质量，g/moln1mol样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即反应摩尔比为反应摩尔比为1 n 2. 2.酸水解后测定法酸水解后测定法 例例 硬脂酸镁的测定硬脂酸镁的测定 ChPChP（20002000） 取本品约取本品约0.1g0.1g，精密称定，精

11、密加硫酸滴定液，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50ml(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，继续加热，煮沸至油滴澄清，继续加热10min10min，放冷至室温，加甲基橙指示液放冷至室温，加甲基橙指示液1 1 2 2滴，用氢氧化钠滴滴，用氢氧化钠滴定液定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于相当于2.016mg2.016mg的的MgOMgO。原理：原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2S

12、O4 Na2SO4 + 2H2O 某些含汞有机药物，由于某些含汞有机药物，由于CHgCHg键不牢固，在水键不牢固，在水溶液（冰浴）中滴加硫酸使其水解，将有机汞定量溶液（冰浴）中滴加硫酸使其水解，将有机汞定量转化成硫酸汞，再用硫氰酸铵滴定液滴定。转化成硫酸汞，再用硫氰酸铵滴定液滴定。例例 汞撒利的测定汞撒利的测定 取本品约取本品约0.5g0.5g，精密称定，加蒸馏水，精密称定，加蒸馏水10ml10ml，置，置冰浴中，滴加硫酸冰浴中，滴加硫酸10ml10ml，随滴随搅拌，至产生的沉淀，随滴随搅拌，至产生的沉淀复溶解，再加蒸馏水复溶解，再加蒸馏水50ml50ml，硫酸铁铵指示液，硫酸铁铵指示液2ml

13、2ml，用硫，用硫氰酸铵滴定液氰酸铵滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml1ml硫氰酸铵滴定液硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于25.29mg25.29mg的汞撒利。的汞撒利。3 3、经还原分解后测定法、经还原分解后测定法 碱性还原后测定碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时，由卤素结合于芳环上时，由于分子中碘的结合较牢固，需在碱性溶液中加还原于分子中碘的结合较牢固，需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使碳剂（如锌粉）回流，使碳- -碘键断裂，形成无机碘碘键断裂，形成无机碘化物后测定。化物后测定。 酸性还原后测定法酸性还原后测定法 两

14、法均是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加两法均是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反应，使有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然应，使有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（后采用银量法（FajansFajans法）测定。法）测定。碱性还原后测定法例碱性还原后测定法例 泛影酸的测定泛影酸的测定 ChPChP (2000) (2000) 取本品约取本品约0.4g0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml30ml与锌粉与锌粉1.0g1.0g，加热回流，加热回流30min30m

15、in，放冷，冷凝管，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3 3次，次，每次每次15ml15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml5ml与曙红与曙红钠指示液钠指示液5 5滴，用硝酸银滴定液滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定。滴定。每每1ml1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg20.46mg的的C C1111H H9 9 I I 3 3N N2 2O O4 4。COOHIIINHCOCH3CH3CONHCOOHH2NNH2+ 11NaO

16、H + 3Zn+ 3NaI + 2CH3COONa + 3NaZnO2 + 3H2O NaI + AgNO3 AgI + NaNO3 指示剂：曙红钠指示剂：曙红钠终点：黄终点：黄红红 USP (24)、BP（1998） ChP(2000)收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。 经还原经还原-汞齐化后测定法（含汞有机药物的含量汞齐化后测定法（含汞有机药物的含量测定）测定） 本法系在酸性或碱性溶液中，加锌粉、加热回流，本法系在酸性或碱性溶液中，加锌粉、加热回流，将药物中有机结合的汞还原析出金属汞，并与

17、过量的将药物中有机结合的汞还原析出金属汞，并与过量的锌生成锌汞齐。将锌汞齐溶于硝酸后，选用适当的方锌生成锌汞齐。将锌汞齐溶于硝酸后，选用适当的方法测定汞的含量，并换算成含汞有机药物的含量。法测定汞的含量，并换算成含汞有机药物的含量。 如醋酸苯汞的含量测定如醋酸苯汞的含量测定 取本品约取本品约0.5g0.5g，精密称定，置，精密称定，置100ml100ml烧瓶中，加水烧瓶中，加水15ml15ml，甲，甲酸酸5ml5ml与锌粉与锌粉1g1g，附回流冷凝器，煮沸，附回流冷凝器，煮沸30min30min。放冷，滤过，滤。放冷，滤过，滤纸和锌汞齐用蒸馏水洗涤至洗液对石蕊试纸不显酸性反应。将纸和锌汞齐用蒸

18、馏水洗涤至洗液对石蕊试纸不显酸性反应。将锌汞齐溶解在稀硝酸锌汞齐溶解在稀硝酸(12)40ml(12)40ml中，置蒸气浴上加热中，置蒸气浴上加热3min3min，加，加尿素尿素0.5g0.5g和足够的高锰酸钾试液至显桃红色。冷却后，加过氧和足够的高锰酸钾试液至显桃红色。冷却后，加过氧化氢溶液脱色，加硫酸铁铵指示剂化氢溶液脱色，加硫酸铁铵指示剂lmllml，用硫氰酸铵滴定液，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定，即得。每滴定，即得。每1ml1ml硫氰酸铵液硫氰酸铵液(0.1mol/1)(0.1mol/1)相当于相当于16.84mg16.84mg的的C C8 8H H8 8

19、O O2 2HgHg。 三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 金属原子、卤素等与金属原子、卤素等与C结合牢固者，必须有机破坏结合牢固者，必须有机破坏 湿法破坏湿法破坏 药物分析中常用的有机破坏的方法有药物分析中常用的有机破坏的方法有 H H2 2SOSO4 4-HNO-HNO3 3法法( (一一) )湿法破坏湿法破坏 H H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法法 H H2 2SOSO4 4- -硫酸盐法硫酸盐法 H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2,HNO,HNO3 3-KMnO-KMnO4 4法等法等干法破坏干法破坏凯氏定氮法凯氏定氮法34244442

20、)(SOHN42NHSONHHSONHNaOHSOH 药物药物含含碱滴定碱滴定酸酸吸收液吸收吸收液吸收/（一）湿法破坏（一）湿法破坏 1、硝酸、硝酸-高氯酸法：高氯酸法： 适于生物样品的破坏，如血、适于生物样品的破坏，如血、尿、组织等。反应剧烈、切勿蒸干、以防爆炸尿、组织等。反应剧烈、切勿蒸干、以防爆炸但对含氮杂环破坏不完全，应用干法灼烧。无机但对含氮杂环破坏不完全，应用干法灼烧。无机金属离子一般为高价态。金属离子一般为高价态。 2、硝酸、硝酸-硫酸法：硫酸法： 适于大多数有机药物，如染料、适于大多数有机药物，如染料、中间体、药物等。但不用于碱土金属有机药物中间体、药物等。但不用于碱土金属有机

21、药物（用硝酸（用硝酸-高氯酸法）高氯酸法）3、H2SO4硫酸盐法硫酸盐法 用于含砷或锑有机药物破坏。所用硫酸盐为硫酸钾或硫酸钠，目的用于含砷或锑有机药物破坏。所用硫酸盐为硫酸钾或硫酸钠，目的是为了提高硫酸沸点，使其破坏完全。无机金属离子为低价态。是为了提高硫酸沸点，使其破坏完全。无机金属离子为低价态。4、其他湿法、其他湿法 尚有硝酸尚有硝酸-硫酸硫酸-高氯酸法、硫酸高氯酸法、硫酸-过氧化氢法、硫酸过氧化氢法、硫酸-高锰酸钾法。高锰酸钾法。 湿法破坏一般用硅玻璃或硼玻璃制的凯氏烧瓶。进行空白试验校正。湿法破坏一般用硅玻璃或硼玻璃制的凯氏烧瓶。进行空白试验校正。含金属元素含金属元素10-100 g

22、范围内，取样范围内，取样10g；生物样品：血样；生物样品：血样10-15ml，尿样，尿样50ml。 注意事项：注意事项：1.1.湿法破坏所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制湿法破坏所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏烧瓶；成的凯氏烧瓶；2.2.所用试剂及蒸馏水均不应含有被测金属离子或干所用试剂及蒸馏水均不应含有被测金属离子或干扰测定的其他金属离子等组分；扰测定的其他金属离子等组分；3.3.由于整个操作过程所用矿酸量数倍于样品，所以由于整个操作过程所用矿酸量数倍于样品，所以必须按相同条件进行空白试验校正；必须按相同条件进行空白试验校正；4.4.操作时应在通风橱内进行。操作时应在通风橱内进行。

23、 样品的取用量，应视被测含金属有机药物中样品的取用量，应视被测含金属有机药物中所含金属元素的量和破坏后所用测定方法而定。所含金属元素的量和破坏后所用测定方法而定。一般来说，含金属元素量在一般来说，含金属元素量在10g10g一一100g100g范围内范围内时，取样量为时，取样量为10g;10g;如果测定方法灵敏度较高，取如果测定方法灵敏度较高，取样量可相应减少。对于生物样品，一般血样样量可相应减少。对于生物样品，一般血样10ml10ml一一15ml15ml或尿样或尿样50ml50ml。凯氏定氮法：凯氏定氮法：原理：在催化作用下，用浓硫酸将有机物分解破坏，使有原理：在催化作用下，用浓硫酸将有机物分

24、解破坏，使有机分子中的机分子中的N转变为（转变为（NH4）2SO4，加碱碱化后使（，加碱碱化后使（NH4）2SO4分解，将滴出的分解，将滴出的NH3蒸馏在蒸馏在H3BO3溶液中，用溶液中，用H2SO4标准液滴定至终点。根据消耗的量计算出有机物中标准液滴定至终点。根据消耗的量计算出有机物中N的量。的量。 四步骤：消解、蒸馏、吸收、滴定。四步骤：消解、蒸馏、吸收、滴定。试剂：浓硫酸：氧化剂、碳化剂；试剂：浓硫酸：氧化剂、碳化剂； 硫酸钾：提高硫酸钾：提高H2SO4的沸点；的沸点； 硫酸铜：催化剂，使之更完全、更彻底。硫酸铜：催化剂，使之更完全、更彻底。注意事项：从消解开始做空白试验。注意事项：从消

25、解开始做空白试验。34244442)(SOHN42NHSONHHSONHNaOHSOH 药药物物含含碱滴定碱滴定酸酸吸收液吸收吸收液吸收/（二）干法破坏（二）干法破坏：系将有机物灼烧灰化以达分解目的。：系将有机物灼烧灰化以达分解目的。 适用于含卤素、适用于含卤素、S、P等有机药物分析的前处理，等有机药物分析的前处理，也用于某些药物中也用于某些药物中Se及砷盐的检查及砷盐的检查 1. 高温炽灼法高温炽灼法 加加无水无水Na2CO3、硝酸镁、氢氧化钙、硝酸镁、氢氧化钙或或ZnO以助以助灰化，灰化，先小火加热，使样品完全炭化，再高温炉中灼烧，先小火加热，使样品完全炭化，再高温炉中灼烧，使其完全灰化。

26、使其完全灰化。适用于：湿法不易破坏的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏适用于：湿法不易破坏的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物；的有机药物；不适用于：含易挥发性金属（如汞、砷等）有机破坏。不适用于：含易挥发性金属（如汞、砷等）有机破坏。应用本法时要注意以下几个问题：应用本法时要注意以下几个问题：加热或灼烧时，应控制温度在加热或灼烧时，应控制温度在420以下，以防止某些以下，以防止某些被测金属花合物的挥发。被测金属花合物的挥发。经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。去。灰化完全与否，直接彭响侧定结果的准确性。灰化完全与否，直接彭

27、响侧定结果的准确性。 （三）氧瓶燃烧法（三）氧瓶燃烧法 定义：定义：氧瓶燃烧法（氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method)系将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃系将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧，将产生的欲测物吸收于吸收液中，再用适宜方法测定。烧，将产生的欲测物吸收于吸收液中，再用适宜方法测定。适于卤素有机药物或含硫、氮、硒等其他元素的有机药物。适于卤素有机药物或含硫、氮、硒等其他元素的有机药物。其吸收液多是水或水与氢氧化钠的混合液。其吸收液多是水或水与氢氧化钠的混合液。测定测定吸收吸收无机离子无机离子有机药物有机药物、含含吸收液吸收液、燃烧、燃烧

28、 2OSePSX 称样用材料及称样称样用材料及称样 A. A. 固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. B. 液体样品液体样品 纸袋纸袋 C. C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹 氧气氧气氧瓶燃烧法装置与样品包装操作图氧瓶燃烧法装置与样品包装操作图吸收液的选择吸收液的选择 吸收液可使样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素，定量吸收液可使样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素，定量地被吸收并使其转变为一定的便于测定的价态，以适应所选择的分地被吸收并使其转变为一定的便于测定的价

29、态，以适应所选择的分析方法。析方法。用于用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是等的鉴别、检查、含量测定时多数是H2 2O或或H2 2O-NaOH；少数为；少数为H2 2O-NaOH-H2 2O2 2。 氟氟 水水 氯氯 NaOHNaOH溶液溶液 溴溴 H H2 2O O2 2-NaOH-NaOH NaOH NaOH- -硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液 碘碘 NaOHNaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液 硫硫 NaOHNaOH或或H H2 2O O2 2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液 注意事项注意事项 A A、根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧、根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶

30、。瓶。 ChPChP（20002000）规定的燃烧瓶体积为）规定的燃烧瓶体积为500500、10001000或或2000ml2000ml三种，采用常量或半微量分析三种，采用常量或半微量分析 待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 3 35mg5mg（微量分析）（微量分析） 150 150 250ml250ml 20 20 30mg30mg（半微量分析）（半微量分析）300 300 500ml500ml 50 50 60mg60mg1000ml1000ml 0.6 0.6 0.7g0.7g或更多或更多2000ml2000ml或特殊结构或特殊结构的燃烧瓶的燃烧瓶正确选用燃烧瓶的目的在于

31、：正确选用燃烧瓶的目的在于： 样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；样品能在足够的氧气中燃烧分解完全； 有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中； 防止爆炸的可能性。防止爆炸的可能性。B B、测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶、测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶C C、铂丝燃烧时起催化作用、铂丝燃烧时起催化作用D D、应同时做空白试验、应同时做空白试验E E、燃烧时要注意防爆、燃烧时要注意防爆F F、燃烧要完全、燃烧要完全G G、燃烧产生的烟雾完全被吸收、燃烧产生的烟雾完全被吸收例例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChPChP（20002000）原理原

32、理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴物与碘酸盐，加入溴- -醋酸溶液，使全部转变为醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点。点。应用示例：

33、碘苯酯的测定应用示例：碘苯酯的测定滴定度的计算滴定度的计算 放大反应放大反应2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI321molNaI+Br2321molNaIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I- -6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反应摩尔比为反应摩尔比为1616mlmgncMT/388. 1634.41602. 0第二节第二节 定量分析方法特点定量分析方法特点 一、容量分析法一、容量分析法 （一

34、）容量分析法的（一）容量分析法的特点特点 几个概念：几个概念：容量分析法、滴定终点、滴定误差、容量分析法、滴定终点、滴定误差、等当点等当点 操作简单、快速；操作简单、快速； 比较准确（相对误差比较准确（相对误差0.2%0.2%）；）； 仪器普通易得仪器普通易得 常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选定首选 容量分析法用原料药精制品容量分析法用原料药精制品(含量含量99.5)或或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于不大于0.2；进行回收率试验。；进行回收率试验。回收率一般回收率一般在在99.71

35、00.3之间之间。 二、光谱分析法二、光谱分析法n光谱光谱n光谱分析法光谱分析法n分光光度法分光光度法n分类分类 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 红外分光光度法红外分光光度法 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 荧光分光光度法荧光分光光度法 火焰光度法火焰光度法 二、光谱分析法二、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外- -可见分光光度法可见分光光度法 吸收光谱范围：紫外：吸收光谱范围：紫外：200200400nm400nm 可见：可见：400400760nm760nm 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%）为）为2

36、% 5%5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广范仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广范 2. 2. 朗伯朗伯- -比耳定律比耳定律 A = ECLA = ECL 吸收系数：摩尔吸收系数吸收系数：摩尔吸收系数 研究分子结构研究分子结构 百分吸收系数百分吸收系数 含量测定含量测定%11cm3.3.仪器的校正和检定仪器的校正和检定 波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身 所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正 吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波 长处测

37、定长处测定 ，应符合，应符合P P5151表表1 1中规定中规定 杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液， 规定波长处测定规定波长处测定透光率，透光率，应符合应符合P51表表2 中规定中规定%11cm 4. 4. 对溶剂的要求对溶剂的要求: : 含杂原子的有机溶剂通常具有很强的含杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收末端吸收 它们的使用范围均不能小于截止使用波长它们的使用范围均不能小于截止使用波长 石英石英吸收池、吸收池、空气空气为空白为空白 (nm(nm) ) 溶剂溶剂+吸收池吸收池A 220 220240 240 0.40 0.40 24

38、1 241250 250 0.20 0.20 251 251300 300 0.10 0.10 300 300以上以上 0.050.055. 5. 测定方法测定方法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7 1 1）对照品比较法：）对照品比较法：A A供供A A对对C C供供C C对对标示量标示量片片标示含量标示含量片片实测含量实测含量标示量标示量供供100WWD/ C供试品取样量供试品取样量实测药物质量实测药物质量含量含量供供100WDC WW片数片数制剂：制剂：原料药：原料药：2）吸收系数法：）吸收系数法：100%11 EcmXXAC注意：注意： 应应10

39、0 应注意仪器的校正和检定：应注意仪器的校正和检定： 作为计算浓作为计算浓度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都适用的，特别时单色光不纯的情况下，适用的，特别时单色光不纯的情况下，A会随会随仪器不同而变化，误差较大仪器不同而变化，误差较大 但若认定一台仪器，固定其工作状态和测但若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则定条件，则C和和A间的关系在多数情况下仍符合间的关系在多数情况下仍符合LambertBeer定律定律 E1cm1E1cm13）计算分光光度法：）计算分光光度法： 多种，具体按每种药物规定的方法进行多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：

40、如：VA的三点校正法的三点校正法4）比色法）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定加入显色剂后，按照对照品比较法测定 影响显色因素很多，故需注意平行操作影响显色因素很多，故需注意平行操作 空白溶剂：溶剂空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理显色剂，同法处理 （二）荧光分析法（二）荧光分析法 灵敏度高灵敏度高，可达，可达10-10g/ml 10-12g/ml 在在低浓度低浓度进行测定，防止自熄灭作用进行测定，防止自熄灭作用 1. 特点特点 用用基准溶液代替对照液基准溶液代替对照液校正校正仪器灵敏度仪器灵敏度 制备荧光制备荧光衍生物衍生物，可提高灵敏度和选择性，可提高灵敏度和选择性 干扰因素多干扰因

41、素多，需做需做空白实验空白实验 样品用样品用量少量少，操作，操作简单简单，应用，应用范围范围较较广广 2.含量测定含量测定 原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧光强度光强度R与与该物质浓度该物质浓度C成正比成正比 方法：对照品比较法方法：对照品比较法 计算：计算：对对对对空空白白对对供供空空白白供供供供CRRRRC 三、色谱分析法三、色谱分析法 根据混合物中各组分的根据混合物中各组分的色谱行为差异色谱行为差异，先，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析行分离后再在线或

42、离线对各组分逐一进行分析的方法，的方法，是分离分析混合物的最有力手段是分离分析混合物的最有力手段。 按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱分类分类 按分离方法：按分离方法：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC；HPLC 特点：高灵敏度、特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛高效能、高速度、应用广泛（一）（一）HPLC法法 1. 对仪器一般要求对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变其他均可适当改变 色谱图色谱图20分钟分钟内记录完毕内记录完毕 2. 系统适用性试

43、验系统适用性试验 色谱柱的理论板数：色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：分离度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 应大于应大于1.5 重复性：对照液连续进样重复性：对照液连续进样5次，峰面积次，峰面积RSD2.0 拖尾因子：拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 3. 测定方法测定方法1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量对照液（对照液（R）：）： AR CR 峰面积峰面积 含量含量内标液（内标液（S）：）： AS CS供试液（供试液（X）：）： AX CXf= AS/CSAR

44、/CRf= AS / CSAx /CxCx=f AxAS / CS2)外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量对照液（对照液（R）：）： AR CR 供试液（供试液（X）：）： AX CXCX CRAX ARCXCR AXAR要求：进样量准确、操作条件稳定要求：进样量准确、操作条件稳定 （二）（二）GC法法1. 对对GC仪器一般要求仪器一般要求 载载 气：气：氮气氮气 色谱柱：色谱柱：填充柱或毛细管柱填充柱或毛细管柱 填充柱：内径填充柱：内径24mm，长，长110m，内装吸附剂，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍固定液的载体高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径毛细管柱

45、：内径0.20.5mm，长，长10100m，一般，一般 为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联 固定液固定液检测器：检测器：氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器色谱图：色谱图：30分钟内记录完毕分钟内记录完毕 2. 色谱适用性实验：同色谱适用性实验：同HPLC 3.测定法：同测定法：同HPLC 第三节第三节 药品分析方法验证药品分析方法验证 目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。 起草药品质量标准起草药品质量标准 生产工艺变更生产工艺变更 制剂组分改变制剂组分改变 原分析方法修订原分析方法修订均需对分析方法进行验证均需对分析方

46、法进行验证验证内容：验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性定量限、线性、范围和耐用性一、准确度一、准确度 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度测定结果与真实值接近的程度，用用回收率回收率(%)(%)表示表示（一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1. 1. 原料药：可用已知纯度对照品或供试品进原料药：可用已知纯度对照品或供试品进行测定；或与已知准确度的另一方法测定的结行测定；或与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较果进行比较 加加入入量量测测得得量量回回收收率率100 2. 制剂：制剂：考察考察其他组分

47、和辅料对回收率的影响其他组分和辅料对回收率的影响用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率计算同原料药料）进行测定，回收率计算同原料药向制剂中加入已知量的被测物进行测定向制剂中加入已知量的被测物进行测定与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较（二）具体做法：测定高、中、低三个浓度，（二）具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共共9个个数据来评价回收率；用数据来评价回收率；用UV和和HPLC法时，一般回收率法时，一般回收率可达可达98%102%；容量法可达；容量法可达99.7%10

48、0.3%加入量加入量本底量本底量测得量测得量回收率回收率100 - - 二、精密度二、精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定所得结果之间的多次测定所得结果之间的接近程度接近程度。 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation , d) d = 测得值测得值-平均值平均值=Xi-X 相对偏差（相对偏差（RD）d / X 100实验中：两份平行操作实验中：两份平行操作RD（AB）/（AB）100最大相对偏差（允许差）最大相对偏差（允许差） 容量分析法容量分析法0.3，仪器分析法，仪器分析法3 2. 标准偏差

49、标准偏差（standard deviation, SD或或S） S =(Xi X)2/(n-1)1/2 3. 相对标准偏差相对标准偏差(relative standard deviation, RSD) ，也称变异系数（，也称变异系数（coefficient of variation，CV） RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=S/X 100%容量法分析原料药时：平行试验容量法分析原料药时：平行试验5个样本，试验数据的个样本，试验数据的RSD一般一般应不大于应不大于0.2%；UV法用适当浓度的精制品进行测定，其法用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于一般不大于1%（n=35

50、）；）；HPLC法要求法要求RSD小于小于2%（n=35）。）。（二）验证内容（二）验证内容 1. 重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由由一个分析人员一个分析人员测定所测定所得结果的精密度得结果的精密度. 2. 中间精密度中间精密度 在同一个实验室，在同一个实验室，不同时间由不不同时间由不同分析同分析 人员用不同设备人员用不同设备测定结果的精密度。测定结果的精密度。 3. 重现性重现性 在在不同实验室由不同分析人员不同实验室由不同分析人员测定结测定结果的精果的精 密度。密度。（三）数据要求（三）数据要求均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限 三、专属