维生素类药物的分析课件.ppt

1、维生素：维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。人体不能合成维生素。营养物质。人体不能合成维生素。 VitA、D2、D3、 E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸、叶酸、烟酸、泛酸分类：分类：CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析全反式全反式维生素维生素A 325.5 100% 全反式全反式新维生素新维生素Aa 328 75% 2顺顺新维生素新维生素

2、Ab 320.5 24% 4顺顺新维生素新维生素Ac 310.5 15% 2，4顺顺异维生素异维生素Aa 323 21% 6顺顺异维生素异维生素Ab 324 24% 2，6顺顺max 相对生物效价相对生物效价顺反异构顺反异构（一）结构：具有共轭多烯侧链的环己烯（一）结构：具有共轭多烯侧链的环己烯一、结构与性质一、结构与性质C H2O HVitA2C H2VitA3共轭多烯侧链共轭多烯侧链易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应C H2O HC H2O HC H3鲸醇鲸醇环氧化物环氧化物OC H2OHVitA醛醛HOCVitA酸酸C OOH紫红紫红蓝色蓝色3SbClVitACHCl3

3、（二）性质（二）性质1.溶解性：易溶于有机溶剂和植物油等，不溶于水溶解性：易溶于有机溶剂和植物油等，不溶于水2.不稳定性不稳定性3.紫外吸收特性紫外吸收特性4.与三氯化锑呈色与三氯化锑呈色（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应条件：条件： 无水、无醇无水、无醇紫红紫红蓝色蓝色 3SbClVitACHCl3二、鉴别试验二、鉴别试验SbCl3水水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失乙醇可使碳正离子的正电荷消失-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色紫红紫红+CH2-RCOOSbCl5BP（2008）VitAVitAHCl去水去水无水乙醇无水乙醇max为为326nm326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法

4、（二）（二）maxmax为为350350390nm390nm三个吸收峰三个吸收峰去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitAUSP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值BP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三）立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A（ VitA2）去水维生素去水维生素A（ VitA3）UV法（三点校正法）法（三点校正法）（一）（一）含量测定含量测定三、三、三点校正法三点校正法1. 前提条件：前提条件：（1）杂质的吸收在

5、）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。）物质对光的吸收具有加和性。测定对象：测定对象：VitA醋酸酯醋酸酯328340316328第一法第一法 等波长差法等波长差法第二法第二法 等吸收比法等吸收比法(皂化法皂化法)32176AAA测定对象：测定对象：VitA醇醇2. 波长的选择：波长的选择：（1） 1 VitA的的 max（如（如VitA酯酯 328nm）（2） 2 3 分别在分别在 1的两侧各选一点的两侧各选一点第二步：求第二步：求)(%cm1样样 l(%)CA%)(cm1

6、 样样3、测定法、测定法（1）基本步骤）基本步骤: 第一步：第一步：A选择，选择，A328测定或测定或A328校正校正第三步第三步 求效价求效价换算因数换算因数）效价（效价（样样样样 %)(cm1)(Eg/IU第四步：求标示量第四步：求标示量标示量标示量平均丸重平均丸重100g/IU 标示量标示量丸丸标示量标示量100/IU 标示量标示量平均丸重平均丸重换算因数换算因数100CA A*D*换算因数*WW*100*标示量100换算因数：换算因数：%)(cm1Eg/IU纯纯）效价（效价（换算因数换算因数单位单位E 数值所相当的效价数数值所相当的效价数（由纯品计算而得）（由纯品计算而得）%11cm1

7、%1cm醋酸酯醋酸酯维生素维生素Ag344. 0IU1 2907000g344.0g101g/IU6 ）效价（效价（15302907000Eg/IU%)(cm1 纯纯）效价（效价（换算因数换算因数1900 醇醇维生素维生素Ag300. 0IU1 3330000g300.0g101g/IU6 ）效价（效价（18203330000Eg/IU%)(cm1 纯纯）效价（效价（换算因数换算因数1830 判断判断 是否在是否在326329nm之间之间max 改用第二法改用第二法是是否否 求算求算 并与规定值比较并与规定值比较328iA/AiAnm360340328316300ml/IU159S处测处测、分

8、别于分别于溶液溶液环己烷环己烷1、 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-第一法（等波长差法）第一法（等波长差法）A值的选择：值的选择： 299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300 规定值规定值 差值差值328iA/A 判断差值是否超过判断差值是否超过02. 0 03%15%3%第二法第二法 校正校正328A328A第二法第二法 3403163283282523AAA.A 校正校正 计算计算 A328（校正）（校正） 用用A328计算计算有超过有超过0.02无超过无超过%100AAAf328328)(328 校正校

9、正f VitADVitAD胶丸中胶丸中VitAVitA的含量测定的含量测定 精密称取本品精密称取本品(规格规格10000VitAIU/丸丸)装量差异项下（平装量差异项下（平均装量均装量0.08262g/丸）的内容物丸）的内容物 0.2399g 至至250ml量瓶中，用环量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一，置另一20 ml量瓶量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为，并在下列波长处测得吸收度为A300 ：0.35

10、4A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素求本品中维生素A的含量？的含量？A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 60505230561

11、0628025232523340316328328.AAA.A 校正校正=%)3%15(%7.3%100AAAf328328)(328 校正校正 %0 .99%1001000008262. 010020125022399. 01900605. 0%100)ml100/g(C1900A%328 标示量标示量平均丸重平均丸重标示量标示量校正校正i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS处测处测、于于稀释至稀释至溶解溶解异丙醇异丙醇除去植物油的干扰除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐甘油和脂肪酸盐植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液挥干乙醚挥干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙

12、醇 水溶性水溶性脂溶性脂溶性2、维生素、维生素A醇醇-等吸收比法等吸收比法（皂化法、皂化法、6/7A法法 判断判断 max是否在是否在323327nm之间之间取未皂化样品采用色取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定谱法纯化后再测定 计算计算325300AA是是否否 334310325325260455528156A.A.A.A 校正校正%100AAAf325325)(325 校正校正0.730.7303%3% 校正校正325A325A 校正校正325Af（二）高效液相色谱法二）高效液相色谱法色谱柱：硅胶；流动相：正己烷-异丙醇（997：3）检测波长：325nm流 速: 1.2ml/min内 标：V

13、A醋酸酯三氯化锑比色法三氯化锑比色法（三）（三）蓝色蓝色 3SbClVitA优点：优点： 简便简便 快速快速max 618nm620nm SbOClSbClOH32缺点：缺点：呈色不稳定呈色不稳定 （5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性标准曲线法标准曲线法NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+第二节第二节 维生素维生素B1的分析的分析HClCl-一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构1. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。3. UV共轭双键共轭双键max = 246n

14、m二、性质二、性质 蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH2. 硫色素反应硫色素反应4. 与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应5.氯化物的特性氯化物的特性荧光消失荧光消失蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇正丁醇）（环合环合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH专属性反应专属性反应二、鉴别试验二、鉴别试验（一）（一）硫色素荧光反应硫色素荧光反应CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O硫色素，蓝色荧光硫色素，蓝色荧光SCH3C2H4OHNNH3CNNH 环合环

15、合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22HVitB1 4242HgIHBHgIK 淡黄淡黄H+ 2KIIIHIB2 红色红色H+白色白色硅钨酸硅钨酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白色扇形白色扇形苦酮酸苦酮酸 H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应 PbSNaSVitBAcPbNaOH OHNHAgNOAgCl白白3HNO HNO蓝蓝淀粉试纸淀粉试纸 KIMnOClS元素反应元素反应（三）（三）其他反应其他反应H+Cl-三、含量测定三、含量测定 HClOClOBHClOHClClBAcHg）（冰醋酸冰醋酸+醋酐，电位法指示终点醋酐，电位法指示终点（一）（一） 非水溶液滴定法非水溶液

16、滴定法UV法法（二）（二）= 421%cmE11A = ECL片剂、注射剂片剂、注射剂荧光荧光硫色素硫色素异丁醇异丁醇铁氰化钾铁氰化钾 VitBNaOH（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法1.+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇SdAb对照液对照液供试液供试液dSbAC样样 C标标3、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂分）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂分析，体液分析等。析，体液分析等。第

17、三节第三节 维生素维生素C的分析的分析654321OOHHOO C OHHCH2OHL抗坏血酸抗坏血酸结构与性质结构与性质一、一、（一）结构（一）结构二烯醇二烯醇内酯内酯两个手性碳（两个手性碳（C4,C5）（二）性质（二）性质1. 溶解性：溶解性：易溶于水易溶于水水溶液呈酸性水溶液呈酸性2. 酸性：一元酸，酸性：一元酸，C3OH的的pKa = 4.17，C2OH的的pKa = 11.573. 旋光性：旋光性：手性手性C（C4、C5）4. 还原性还原性5. 水解反应：水解反应：6. 具糖的性质：具糖类的性质与反应具糖的性质：具糖类的性质与反应7. UV特征特征OOHHOO C OHHCH2OH1

18、23456*CH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性无活性无活性OHOO C OHHCH2OHHOO二烯醇结构二烯醇结构-还原反应还原反应去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC利用还原性：与氧化剂的反应利用还原性：与氧化剂的反应鉴别试验鉴别试验二、二、OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O黑AgAgNOVitC3（一）与（一）与AgNO3反应反应（二）与（二）与2，6 - 二氯靛酚反应二氯靛酚反应无色无色二氯靛酚二氯靛酚， VitC62氧化型氧化型还原型还原型NClHOClONClHOClOHH红

19、红碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 OCuVitC与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应USP与与KMnO4反应反应 MnKMnOVitC（三）与其他氧化剂反应（三）与其他氧化剂反应四、薄层色谱法四、薄层色谱法: Rf值值-CO2-H2OOC HN（蓝色）（蓝色）OCHOH3CH2OHCHNNH50(吡咯吡咯)OO CO HHC H2O HH OO HC H2O HOO CO HHHH OOH2OC COHO OCHOH3CH2OH（五）糖类的反应（五）糖类的反应BP0.01mol/L HClnmmax243 58554511E%cm （六）（六）UV三、杂质检查三、杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查

20、（一）溶液的澄清度与颜色检查（二）铁、铜离子的检查（二）铁、铜离子的检查维生素维生素C C原料药原料药 片片 剂剂 注射剂注射剂维生素维生素C原料药原料药糠醛缩合呈色糠醛缩合呈色原子吸收法原子吸收法（三）草酸的检查：氯化钙（三）草酸的检查：氯化钙IIVitCH去氢抗坏血酸2指示剂指示剂 淀粉淀粉（一）碘量法（一）碘量法四、含量测定四、含量测定原理：利用原理：利用V Vc c强的还原性强的还原性OHOO C OHHCH2OHHO IH+OO C OHHOOCH2OHHI2+ 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷，精密称定，加新沸过的冷水水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶解，加淀

21、粉指示液使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6。2、方法、方法原料药原料药（2）酸性环境）酸性环境 稀醋酸稀醋酸 （1）新沸冷）新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰3、讨论、讨论4. 附加剂干扰的排除附加剂干扰的排除片剂片剂 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2

22、S2O3 Na2S2O5 CH HOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a33COCHCH33CHCHCNaSO3OH33CHCHCNaSO3OH空空样样二氯靛酚液二氯靛酚液空白空白样品样品VVHAcHPO 3(二二) 2，6 - 二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚， VitC1、原理、原理2、方法、方法自身指示终点法自身指示终点法（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 （1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）亦可剩余比色测定）亦可剩余比色测定 AVitC测测二氯靛酚二氯靛酚

23、 （定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）3、讨论、讨论（4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定专属性强，多用于含专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的分析的制剂和食品的分析（5）优点）优点（三）高效液相色谱法高效液相色谱法血浆中维生素C的测定(稳定性） 标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构CH2H OCH3HCH3HHHCH3CH3HCH3维生素 D2(麦角骨化醇) CH2HOCH3

24、HCH3HHHCH3CH3121234567891011131415161718192021222324252627维生素D3(胆骨化醇) 1.1.性状：无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味。性状：无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味。2.2.溶解性：宜溶于有机溶剂，在植物油中略溶，在水中溶解性：宜溶于有机溶剂，在植物油中略溶，在水中不溶。不溶。3.3.不稳定性：含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变不稳定性：含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。质，效价降低，毒性增强。（二）性质（二）性质4 4旋光性旋光性 维生素维生素D2 6D2 6个手性碳原子个手性碳原子 维

25、生素维生素D3 5D3 5个手性碳原子个手性碳原子5 5显色反应：甾类化合物显色反应：甾类化合物氯仿溶液氯仿溶液 黄色黄色 红色红色 紫色紫色 绿色绿色6 6紫外吸收特性：无水乙醇紫外吸收特性：无水乙醇 265nm 265nm 醋酐醋酐硫酸硫酸二、鉴别试验二、鉴别试验 （一）显色反应（一）显色反应1 1与醋酐与醋酐- -浓硫酸反应浓硫酸反应 氯仿溶液氯仿溶液 黄色黄色 红色红色 紫色紫色 绿色绿色醋酐醋酐硫酸硫酸2 2与三氯化锑反应与三氯化锑反应 本品本品1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷 三氯化锑试液三氯化锑试液 橙红色橙红色 粉红色粉红色 3 3其它显色反应其它显色反应 维生素维生素D D

26、三氯化铁三氯化铁 橙黄色橙黄色 二氯丙醇二氯丙醇 乙酰氯乙酰氯 绿色绿色 （二）比旋度鉴别（二）比旋度鉴别无水乙醇溶液无水乙醇溶液 维生素维生素D D2 2 比旋度为比旋度为102.5102.5至至107.5107.5 维生素维生素D D3 3 比旋度为比旋度为105105至至112112 （三）其它鉴别方法三）其它鉴别方法 薄层色谱法、薄层色谱法、HPLCHPLC法法制备衍生物测熔点制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱紫外、红外吸收光谱 （四）维生素（四）维生素D D2 2、D D3 3的区别反应的区别反应维生素维生素D D2 2 维生素维生素D D3 3 96%96%乙醇乙醇 10ml 取

27、取0.1ml0.1ml 乙醇乙醇1ml1ml和和85%85%硫酸硫酸5ml5ml 红色红色max570nm 黄色黄色 max495nm 三、杂质检查三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查（一）麦角甾醇的检查维生素维生素D D2 290% %乙醇溶液乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀不得发生浑浊或沉淀 （二）前维生素（二）前维生素D D的光照产物的光照产物RHO57hvhv加热加热HOCH2R前维生素D前维生素D维生素Dhvhvhvhv异构化hv异构化RHHO光甾醇（lumisterol）RCH3OH速甾醇（tachysterol）ROHCH2反式维生素D5,7-二烯5,6-R

28、OHCH3四、含量测定四、含量测定正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 （一）维生素（一）维生素D D测定法测定法 含量以单位表示含量以单位表示每单位相当于维生素每单位相当于维生素D 0.025D 0.025g g 注意：注意：计算的是维生素计算的是维生素D D及前维生素及前维生素D D经折经折 算成维生素算成维生素D D的总量的总量测定在半暗室及避免氧化的情况下进行测定在半暗室及避免氧化的情况下进行第一法：无干扰杂质第一法：无干扰杂质第二法：有第二法：有VA及其他杂质干扰及其他杂质干扰第三法：用第二法时，前第三法：用第二法时，前 VD峰受杂质干扰峰受杂质干扰 仅仅VD峰可分离峰可分离 第一法

29、第一法内标物：内标物：邻苯二甲酸二甲酯邻苯二甲酸二甲酯色谱条件及系统适用性试验：色谱条件及系统适用性试验：填充剂：硅胶填充剂：硅胶流动相：正己烷流动相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997：3）检测波长：检测波长：254nm无干扰杂质无干扰杂质维维生生素素D3光照光照前维生素前维生素D3反式维生素反式维生素D3维生素维生素D3速甾醇速甾醇D3与维生素与维生素D3的比保的比保 留留 时时 间间分离度分离度1.01.0溶液组成溶液组成先后进样先后进样5次，维生素次，维生素D3 峰面积的峰面积的 RSD2.0 % 0.50.61.01.1系统适用系统适用性试验性试验校正因子测定：校正因子测定：维生素维生素

30、D的校正因子的校正因子: f1=Asmi/Aims前维生素前维生素D折算成维生素折算成维生素D的校正因子的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量测定：含量测定：计算维生素计算维生素D及前维生素及前维生素D折算成折算成 维生素维生素D的总量的总量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第二法第二法第一步：皂化提取第一步：皂化提取供试品供试品OH-加热回流加热回流冷却冷却乙醚提取乙醚提取乙醚提取液乙醚提取液挥干乙醚挥干乙醚残渣残渣甲醇溶解甲醇溶解供试溶液供试溶液A有有VA及其他杂质干扰及其他杂质干扰第二步：分离收集第二步：分离收集供供试试品品溶溶液液ARP-HPLC维生

31、素维生素D前维生素前维生素D维生素维生素A及及其他杂质其他杂质叠叠峰峰分分离离收集收集供供试试品品溶溶液液B维生素维生素D及及前维生素前维生素D第三步：按第一法进行含量测定（内标法）第三步：按第一法进行含量测定（内标法）挥干挥干内标的正内标的正己烷溶液己烷溶液溶解溶解第三法第三法第一步：皂化提取第一步：皂化提取同第二法得供试品溶液同第二法得供试品溶液A第二步：第二步：供供试试品品溶溶液液ARP-HPLC维生素维生素D前维生素前维生素D维生素维生素A及及其他杂质其他杂质叠叠峰峰分分离离供试品溶液供试品溶液C收集收集挥干挥干异辛烷溶解异辛烷溶解90、1.5h挥干挥干正己烷正己烷溶解溶解前维生素前维

32、生素D维生素维生素D第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量用第二法时，前用第二法时，前 VD峰受杂质干扰峰受杂质干扰苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第五节第五节 维生素维生素E的分析的分析OHO一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构OR1HOR2CH3名名 称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*生物效价生物效价 右旋体右旋体 ： 消旋体消旋体 = 1.4 ：10CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl生育酚醋酸酯生育酚

33、醋酸酯（二）性质（二）性质1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水4、UV2、水解性：酯键易水解、水解性：酯键易水解 OorOHHVitE醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚3、氧化性、氧化性OHNO3VitE生育红生育红生育酚生育酚7515（一）（一） 硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色二、鉴别试验二、鉴别试验OOCH3C16H33H3CCH3O（橙红色）（橙红色）生育红生育红CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应红色红色生育醌生育醌对对生育酚生育酚联吡啶联吡啶 2FeKOHFeVitE3O（二）

34、（二）OOH3CCH3OHCH3C16H33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚对对-生育醌生育醌+23F e3+2F eNNNN红色红色Fe3+Omax = 284nmmin = 254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷 -乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5） TLC法法（四）（四）（五）其他鉴别方法（五）其他鉴别方法 红外、气相色谱法红外、气相色谱法（二）生育酚（二）生育酚 生育醌生育醌对对生育酚生育酚 3422CeCe 三、杂质检查三、杂质检查 1. 原理：游离生育酚还原

35、性，硫酸铈滴定原理：游离生育酚还原性，硫酸铈滴定2. 试剂：硫酸铈滴定液（试剂：硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 指示剂：二苯胺（亮黄指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）（一）酸度：游离醋酸（一）酸度：游离醋酸四、含量测定四、含量测定GC法法（一）（一）1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳定、挥发性低、不稳定、极性强极性强衍生化。易衍生化。易受样品蒸气压限制受样品蒸气压限制固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正

36、三十二烷内标法加校正因子定量内标法加校正因子定量2、VitE测定的色谱条件测定的色谱条件几种常用的固定相非极性：OV-1、SE-30、HP-1（100%二甲基聚硅氧烷），分析：溶剂、石油产品、药物，按沸点出峰；一般使用温度：-60340。非极性：SE-54、HP-5、DB-5（5%二苯基95%二甲基聚硅氧烷），分析：环境样品、香料；使用温度：-60325。中等极性：OV-17、HP-50+（50%苯基-50%二甲基聚硅氧烷）。用途：酯类及其它极性适中的药物；一般使用温度：25340。极性：PEG-20、Carbowax20M、INNOWAX（聚乙二醇）。用途：香料、酸类、胺类、溶剂。一般使用温

37、度： 40280柱内径特点复杂样品分析0.20mm0.25mm 高柱效高分离度 在分流模式下进行复杂样品分析 0.32mm 高分离度较高柱容量 复杂样品，宽的浓度范围，可用分流、不分流和直接进样模式 0.53mm 较好分离度很高的柱容量 最适合作纯度分析和痕量分析，直接进样，升级替代填充柱 样品容量与柱内径、膜厚及溶解度关系，记住相似相溶原理一般厚膜柱适合分析低沸点样品；薄液膜适合分析高沸点化合物，同时固定相流失少。 检测器：主要有热导检测器（通用）、氢火焰离子化检测器、电子捕获检测器样品样品 dl生育酚生育酚固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇-水（水（4

38、9 ：1）检测波长检测波长292nm R2.6 RSD0.8%（二）（二）RP - HPLC法（外标法）法（外标法）（三）荧光分光光度法（三）荧光分光光度法对照品对照品 dl生育酚生育酚在在220400nm波长范围内，以发射、激发波长间波长范围内，以发射、激发波长间隔隔为为40nm40nm扫描同步荧光光谱，测定同步荧光扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰的荧光强度信号值。峰的荧光强度信号值。 VE=F样品样品-F空白空白F标准标准-F空白空白 4.0（mg/L) 一、离子对HPLC法测定多种维生素 以樟脑磺酸作为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠作为抗氧剂二、反相HPLC法同时测定9种水溶性维生素三、非水反相HPLC法同时测定4种脂溶性维生素