精浆生化检测的标准化与质量控制Final课件.ppt
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- 生化 检测 标准化 质量 控制 Final 课件
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1、1精浆生化检测的标准化与精浆生化检测的标准化与质量控制质量控制 陆金春武警江苏总队南京医院南京军区南京总医院2意意 义义 规范目前男科实验室精浆生化检测方法,以保证检测结果的准确性 使不同实验室的精浆生化分析结果具有可比性,从而满足研究人员和临床医生的需要,并可减少重复检查给病人带来的沉重经济负担。3 精浆生化标志可反映附属性腺功能 酸性磷酸酶、谷氨酰转肽酶、锌、柠檬酸和镁反映前列腺功能; 果糖和前列腺素反映精囊腺功能; 游离左旋肉毒碱、甘油磷酸胆碱和-葡糖苷酶反映附睾功能等。 4(一)精浆(一)精浆-葡糖苷酶测定葡糖苷酶测定 精浆总精浆总-葡糖苷酶的测定葡糖苷酶的测定 检测方法为葡萄糖氧化酶
2、法 精浆中性-葡糖苷酶的测定 前列腺分泌的酸性-葡糖苷酶能够被十二烷基硫酸钠(SDS)选择性抑制,检测过程中加入SDS后,检测出的-葡糖苷酶活性即为中性-葡糖苷酶活性。 5 我们评价了离心速度、冻融、糜蛋白酶及禁欲时间对精浆葡糖苷酶活性检测的影响。6 精浆葡糖苷酶活性检测的批内CV值 2份新鲜精浆样本分别检测葡糖苷酶活性10次,葡糖苷酶活性分别为(20.920.81) U/ml和(42.751.37) U/ml,批内CV值分别为3.85%和3.19%。7 2位技术人员检测的精浆葡糖苷酶活性的比较 8精浆总-葡糖苷酶检测中应注意三点 离心速度不同,精浆总-葡糖苷酶活性有所差异 精浆总-葡糖苷酶活
3、性与禁欲时间的长短密切相关 精浆总-葡糖苷酶活性的检测应进行质量控制 9不同速度离心后的精浆中不同速度离心后的精浆中 葡糖苷酶水平葡糖苷酶水平 10不同速度离心后的精浆中精子密度的比较不同速度离心后的精浆中精子密度的比较 11禁欲时间对精浆葡糖苷酶的影响Abstinence time (day)nAlpha-glucosidase (U/ml)Seminal plasma (1 000 g for 10 min) Seminal plasma (3 000 g for 15 min)2 31236.4712.2434.0411.224 51649.6216.86*47.7317.37*6 71
4、451.1419.76*46.7617.70* 8968.7014.10*#63.8613.63*#12糜蛋白酶对精浆糜蛋白酶对精浆葡糖苷酶活性检测的影响葡糖苷酶活性检测的影响 Groupn Alpha-glucosidase activity (U/ml)tPWith chymotrypsin3935.7213.78Without chymotrypsin 3935.3014.311.3860.17413 冻融后的精浆冻融后的精浆 葡糖苷酶的检测结果葡糖苷酶的检测结果 Samplen With PMSF Alpha-glucosidase (U/ml) CV(%) Without PMSF
5、Alpha-glucosidase (U/ml) CV(%)11020.840.663.1721.230.683.2021023.011.054.5622.871.215.2931033.431.163.4733.780.752.2241036.541.744.7636.631.754.7851048.481.583.2649.041.673.4161055.981.753.1356.721.632.8714(二)精浆果糖测定(二)精浆果糖测定 用于检测精浆果糖的方法有间苯二酚显色法、气相层析法、吲哚显色法等多种方法。 我们评价了果糖标准液、离心速度、精液和精浆放置时间、冻融、糜蛋白酶等对精浆
6、果糖浓度的影响,并比较了不同技术人员的精浆果糖检测结果。15 精浆果糖检测中应注意四点: 果糖标准液配制后应放置2周后使用,而使用2周后出现吸光度降低时应立即更换新的果糖标准液 离心速度不同精浆果糖浓度稍有差异 精液液化后应立即离心将精子和精浆分离,否则会影响精浆果糖检测结果 精浆果糖测定中应引入质量控制体系 16 精子悬液果糖浓度的检测结果精子悬液果糖浓度的检测结果 1010份份精子悬液标本的果糖浓度均为精子悬液标本的果糖浓度均为0 0,提,提示,精子不含果糖。示,精子不含果糖。 17 不同速度离心后精浆果糖及精子浓度的不同速度离心后精浆果糖及精子浓度的比较比较 1 000g1 000g离心
7、离心10 min10 min和和3 000g3 000g离心离心15 min15 min后精浆果糖浓度没有显著性差异后精浆果糖浓度没有显著性差异(P P = 0.176 = 0.176)。而精子浓度比较差异极)。而精子浓度比较差异极显著(显著(P P = 0.000= 0.000)。)。18051015202516111621263136414651566166CasesSperm concentration (106/ml)Centrifuged at 2 000 r/min for 10 minCentrifuged at 3 500 r/min for 15 minComparison
8、of sperm concentrations in seminal plasmas obtained at 1 000g for 10 min or 3 000g for 15 min19果糖标准液吸光度的监测果糖标准液吸光度的监测 20精浆精浆 放置时间对果糖浓度的影响放置时间对果糖浓度的影响 GroupnFructose (mmol/L)0 h2016.015.842 h2015.965.564 h2015.795.506 h2016.235.3921精液精液 放置时间对果糖浓度的影响放置时间对果糖浓度的影响 GroupnFructose (mmol/L)0 h4815.736.562
9、h4815.076.56a a4 h4814.736.51b,cb,c22糜蛋白酶对精浆果糖检测的影响糜蛋白酶对精浆果糖检测的影响 GroupnFructose (mmol/L)tPWith chymotrypin72 17.298.23Without chymotrypin 72 17.077.950.8670.38923 冻融对精浆果糖浓度的影响冻融对精浆果糖浓度的影响 24 不同技术人员精浆果糖测定结果的比较不同技术人员精浆果糖测定结果的比较 两位技术人员对10份精浆标本的果糖检测结果见图。两者比较没有显著性差异(P = 0.643)。 25 Comparison of fructose
10、 concentrations between 2 technicians26(三)精浆酸性磷酸酶测定(三)精浆酸性磷酸酶测定 检测方法普遍为磷酸苯二钠法 标准曲线法和试剂盒法 我们评价了离心速度、稀释后放置时间、冻融、糜蛋白酶对酸性磷酸酶检测的影响。27 精浆酸性磷酸酶检测中应注意三点 精浆稀释后需立即检测 离心速度对精浆酸性磷酸酶检测结果可能有影响 精浆酸性磷酸酶测定中应引入质量控制体系28不同速度离心后精浆ACP活性和精子密度的比较29精浆稀释后放置时间对精浆稀释后放置时间对ACPACP活性的影响活性的影响 随机选取随机选取1010例精浆,例精浆,110 000110 000稀释后稀释后
11、立即立即检测检测ACPACP活性或稀释后活性或稀释后放置放置30 min30 min再次检测再次检测ACPACP活性,两者比较有活性,两者比较有极显著性差异极显著性差异(t t 3.7703.770,P P 0.0010.001)。)。30糜蛋白酶对精浆糜蛋白酶对精浆ACPACP活性检测的影响活性检测的影响 GroupnACP (U/ml)tPWith chymotrypsin3535.2621.14Without chymotrypsin 3536.9220.490.7720.44631冻融对精浆冻融对精浆ACPACP活性的影响活性的影响 SamplenACP (U/ml)With PMSF
12、Without PMSF11011.011.529.921.3721051.068.5648.067.4432(四)精浆(四)精浆-谷氨酰转肽酶(谷氨酰转肽酶(-GT-GT)测定)测定 检测方法为化学比色法,可分为标准曲线法和试剂盒法 精浆-GT检测中应注意三点 精浆稀释后需立即检测 离心速度对精浆-GT检测结果有影响 精浆-GT测定中应引入质量控制体系 33(五)精浆锌的测定(五)精浆锌的测定 检测方法为化学比色法 已有测定精浆中锌浓度的试剂盒出售 34(六)精浆尿酸的测定意义意义 UA为人体嘌呤分解代谢的最终产物 抗氧化功能,能清除单线态氧及羟基自由基等物质 显著增加SOD活性 UAUA为
13、正常男性生殖系统中重要的抗氧化物质之一为正常男性生殖系统中重要的抗氧化物质之一 UA对精子活力有利。而且,正常生育男性的UA水平显著高于不育患者 精浆精浆UAUA水平的检测对辅助诊断男性不育有重要意义水平的检测对辅助诊断男性不育有重要意义 35研究背景存在问题和结果存在问题和结果 精浆UA的检测方法不统一,比较复杂,一般都要经过萃取后检测 均未对检测方法进行评价,故检测的结果难以有说服力 36研究目的 建立简单的、可以在临床实验室常规使用的方法 进行方法学评价 与精液参数的相关性37方法的建立 利用检测血清UA的UA氧化酶法加以改良后进行精浆UA检测 液化后的精液标本用Ba(OH)2和 ZnS
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