酵母形态观察及死活细胞鉴别微生物大小测定显微镜直接计数法课件.ppt

1、微生物学实验微生物学实验Lab work on Microbiology 三峡大学化学与生命科学学院三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组微生物学教学组实验指导老师：实验指导老师：涂涂 璇璇 实验七、酵母形态观察、死活细胞鉴实验七、酵母形态观察、死活细胞鉴别和显微镜直接计数法别和显微镜直接计数法一、目的和要求一、目的和要求二、实验原理二、实验原理三、实验器材三、实验器材四、实验步骤四、实验步骤五、实验报告五、实验报告一、实验目的一、实验目的1 1 观察酵母菌的形态和出芽生殖方式观察酵母菌的形态和出芽生殖方式2 2 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法学习区分酵母菌死活细胞的实验方法酵母形态观察及

2、死活细胞鉴别酵母形态观察及死活细胞鉴别二、基本原理二、基本原理n酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进行无性繁殖，有的进行分裂繁殖；通过接合产生行无性繁殖，有的进行分裂繁殖；通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养子囊孢子进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养条件下才能进行。条件下才能进行。n染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。借使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。

3、借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。三、实验器材三、实验器材1 菌种：酿酒酵母菌种：酿酒酵母2 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片等仪器：显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤四、实验步骤美蓝浸片的观察美蓝浸片的观察(1)(1)在载玻片中央加一滴在载玻片中央加一滴0.10.1吕氏碱性美蓝染色液，然后吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。（染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片合均匀。（染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。）时，菌液会溢出或

4、出现大量气泡而影响观察。）(2)(2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。镜检。将盖玻片放下使其盖在菌液上。镜检。(3)(3)将制片放置约将制片放置约3min3min后再次镜检并对照，先用低倍镜然后后再次镜检并对照，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。别死活细胞。滴加染液涂片加盖玻片镜检滴加染液涂片加盖玻片镜检3min后再次镜检后再次镜检五、实验报告五、实验报告绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征绘图说明你所观察到的酵母菌

5、的形态特征思考题思考题1、酵母死活细胞鉴别的基本原理是什么？、酵母死活细胞鉴别的基本原理是什么？一、实验目的一、实验目的1 1 明确血细胞计数板计数的原理明确血细胞计数板计数的原理2 2 掌握用血细胞计数板进行微生物计数的方法掌握用血细胞计数板进行微生物计数的方法显微镜直接计数法显微镜直接计数法二、基本原理二、基本原理显微镜直接计数法显微镜直接计数法n血球计数板的结构：血球计数板的结构：n四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格格网，每个方格网共分为九个网，每个方格网共

6、分为九个大方格，一种是一个大方格大方格，一种是一个大方格分成分成2525个中方格，而每个中个中方格，而每个中方格又分成方格又分成1616个小方格；另个小方格；另一种是一个大方格分成一种是一个大方格分成1616个个中方格，每个中方格又分成中方格，每个中方格又分成2525个小方格，无论哪种每个个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是大方格中的小方格都是400400个。个。每一个大方格边长为每一个大方格边长为1mm1mm，高，高0.1mm0.1mm，所以计数室的容积为，所以计数室的容积为0.1mm0.1mm3 3。计数时，通常只用。计数时，通常只用5 5个中格内的菌体个中格内的菌体( (孢子孢子)

7、 )数即可。数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上然后求出每个中方格的平均值，再乘上2525或或1616，得出一个大，得出一个大方格中的总茵数，再换算成方格中的总茵数，再换算成1ml1ml菌液中的总菌数。若设菌液中的总菌数。若设5 5个中个中方格中总菌数为方格中总菌数为A A，菌液稀释倍数为，菌液稀释倍数为B B，（1 1）如果是）如果是2525个中方格计数板，则计算方法为：个中方格计数板，则计算方法为：1ml1ml菌液中的总菌数菌液中的总菌数= =（A/5)A/5)252510104 4B=50000AB=50000AB(B(个个) )（2 2）如果是）如果是1616个中方格计数板，则计

8、算方法为：个中方格计数板，则计算方法为：1ml1ml菌液中的总菌数菌液中的总菌数=(A/4) =(A/4) 161610104 4B=40000AB=40000AB(B(个个) )三、实验器材三、实验器材1 菌种：酿酒酵母菌种：酿酒酵母2 仪器：血球计数板、显微镜、载玻片、盖仪器：血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等玻片等四、实验步骤四、实验步骤1.1.菌悬液制备，以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度菌悬液制备，以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。适当的菌悬液。2. 2. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。片。 3. 3. 取酵母菌液

9、，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。4. 4. 静止静止5min5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。中央。 5.5. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上然后求得每个中格的平均值。乘上16（或（或25）就）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液菌液中的含菌数。中的含菌数。6.6.清洗血细胞计数板清洗血细胞计数板 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。内。五、实验报告五、实验报告n实验结果实验结果计算计算次数次数各中方格中细胞数各中方格中细胞数中方格中方格中细胞中细胞总数总数稀释稀释倍数倍数菌浓度菌浓度（个（个/ml）左左上上右右上上右右下下左左下下中中间间第第1次次第第2次次第第3次次平均值平均值结结 束束请注意实验台面清洁！请注意实验台面清洁！请值日生留下来打扫卫生！请值日生留下来打扫卫生！