半固体培养基课件.ppt

1、医学微生物学实验二医学微生物学实验二基础医学院病原生物学教研室基础医学院病原生物学教研室主要内容主要内容n革兰染色（Grams stain）n培养基及接种革兰染色（革兰染色（Grams stain） Gram stain-由丹麦细菌学家革兰由丹麦细菌学家革兰(Hans Christian Gram)创建的一种鉴别染色法。创建的一种鉴别染色法。n原理n程序n结果n意义 革兰染色原理革兰染色原理n 细胞壁结构不同细胞壁结构不同n 等电点差别等电点差别 革兰染色程序革兰染色程序n 程序: 涂片 干燥 固定 染色 镜检染色过程及结果染色过程及结果 革兰染色 采用4种试剂分4步： 结晶紫结晶紫 碘液碘液

2、 95%95%乙醇乙醇 复红复红（初染）（初染） （媒染）（媒染） （脱色）（脱色） （复染）（复染） 革兰阳性菌 革兰阴性菌 （菌体为紫色 ） （菌体为红色）1min 水洗1 min水洗30 s 水洗1 min水洗革兰染色意义革兰染色意义n鉴别细菌鉴别细菌n帮助临床选择用药帮助临床选择用药n理解细菌的致病作用理解细菌的致病作用 培养基及接种培养基及接种n培养基制备（示教）n培养基接种n细菌的培养方法基础培养基制备（示教）基础培养基制备（示教）1.培养基的概念： 将适合于细菌生长繁殖的各种营养物质用人工的方法配制而成的营养基质。 2.2.培养基的制备过程培养基的制备过程n以牛肉膏汤培养基为例（

3、液体）成分：牛肉膏3克蛋白胨10克氯化钠5克蒸馏水1000毫升调配加热融化过滤调pH分装高压灭菌无菌检测冰箱备用肉汤培养基肉汤培养基n取1000毫升肉浸液，加入10克蛋白胨和5克氯化钠 经上述步骤制成。n其营养价值较牛肉膏汤要高。n但因肉浸液制作烦琐，而牛肉膏汤培养基制作简单，故常用。固体、半固体琼脂培养基固体、半固体琼脂培养基n琼脂：属于凝固剂，其化学成份主要是酸性多糖。其特点是当温度达到98以上可融化于水，45以下则凝固。n半固体琼脂培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入0.30.5琼脂制成。 n固体琼脂培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入23克的琼脂

4、制成。培养基的种类培养基的种类n按照培养基的用途可分为五类。n按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。厌氧培养基厌氧培养基基础培养基基础培养基营养培养基营养培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基培养基按照物理性状培养基按照物理性状分类分类 培养基接种培养基接种n固体平板培养基n固体斜面培养基n液体培养基n半固体培养基固体平板培养基固体平板培养基n用途：分离混杂的细菌n接种方法：连续平行划线法和分区划线法n生长现象：呈菌苔和菌落样生长1连续平行划线法连续平行划线法n涂基线n划线n划线完毕，将琼脂平板培养基复盖皿盖，并在培养皿底玻璃上，用蜡笔注明接种菌名、接种者姓名及班级、日期等

5、，将培养皿倒置放在37孵育箱培养，以避免培养过程中凝结水自皿盖滴下，同时可以保持琼脂表面的湿润。平行划线法的示意图平行划线法的示意图nA B是最常使用的、最基本的方法，其中图B常用于含菌量较少的标本。2分区划线法分区划线法n基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线前要烧灼接种环，以杀灭环上留剩的菌液。n用于含菌量较多的混杂标本。n本次试验要求同学掌握细菌分离培养的分区划线法。固体平板培养基固体平板培养基n用途n接种方法n生长现象细菌在固体平板培养基上的细菌在固体平板培养基上的生长现象生长现象n细菌在固体平板培养基上呈菌苔或菌落样生长。n观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边

6、缘、表面结构、透明度、颜色、溶血环等性状。细菌在固体平板培养基上呈菌苔和菌落样生长细菌在固体培养基中的生长情况细菌在固体培养基中的生长情况光滑型菌落光滑型菌落S型型粗糙型菌落R型粘液型菌落M型固体斜面培养基固体斜面培养基n用途：观察细菌的培养特性、生化反应、保存菌种。n接种方法：连续划线法。n生长现象：呈菌苔样生长。操作手法操作手法斜面接种法斜面接种法固体斜面培养基固体斜面培养基接种后细菌生长接种后细菌生长现象现象液体培养基液体培养基n用途：增菌及检测生化反应。n接种方法：研磨接种。n生长现象：浑浊、沉淀、菌膜样生长。液体培养基接种法液体培养基接种法细菌在液体培养基中的生长现象细菌在液体培养基

7、中的生长现象菌膜菌沉淀均匀浑浊对照半固体培养基半固体培养基n用途：检测细菌动力、生化反应。n接种方法：接种针穿刺法n生长现象： 沿穿刺线生长-无动力。 沿穿刺线扩散生长（呈云雾状或羽毛状）-有动力。穿刺培养的生长特征穿刺培养的生长特征细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象A A、有动力有动力 B B、无动力、无动力、 C C、空白对照空白对照细菌的培养方法细菌的培养方法n普通培养法 n二氧化碳培养法 n厌氧培养法 普通培养箱普通培养箱 厌氧罐厌氧罐 厌氧袋厌氧袋 厌氧培养箱厌氧培养箱Thank You!细菌的细胞壁细菌的细胞壁 （ cell wall ） 1. 化学组分：化学组分： 聚糖骨架聚糖骨架 革兰革兰 肽聚糖肽聚糖 peptidoglycan 四肽侧链四肽侧链 阳性阳性 五肽交联桥五肽交联桥 菌菌 磷壁酸磷壁酸 techoic acid 革兰革兰 肽聚糖肽聚糖 peptidoglycan 阴性阴性 脂多糖脂多糖 lipopolysaccharide,LPS 菌菌 脂质双层：内有脂质双层：内有OMP 外膜外膜 脂蛋白脂蛋白 G+菌肽聚糖结构菌肽聚糖结构G-菌肽聚糖结构菌肽聚糖结构革兰阳性菌细胞壁结构革兰阳性菌细胞壁结构革兰阴性菌细胞壁结构革兰阴性菌细胞壁结构外外膜膜