通过计算分光光度法课件.ppt

1、无机及分析化学无机及分析化学课程课程Email:学习目的学习目的1.1.了解比色法、分光光度法的特点。了解比色法、分光光度法的特点。2.2.掌握光的吸收定律及其适用范围。掌握光的吸收定律及其适用范围。3.3.掌握分光光度法的分析方法。掌握分光光度法的分析方法。4.4.了解显色反应及其条件的选择。了解显色反应及其条件的选择。5.5.了解分光光度法仪器测量的误差及测量条了解分光光度法仪器测量的误差及测量条件的选择。件的选择。6.6.了解分光光度法的某些应用。了解分光光度法的某些应用。本章内容本章内容(P422) 11-1 概述概述 11-2 光吸收的基本定律光吸收的基本定律 11-3 比色法和分光

2、光度法及其仪器比色法和分光光度法及其仪器 11-4 显色反应及显色条件的选择显色反应及显色条件的选择 11-5 分光光度法仪器测量误差分光光度法仪器测量误差 及其消除及其消除 11-6 分光光度法的某些应用分光光度法的某些应用 化学分析与仪器分析方法比较化学分析与仪器分析方法比较化学分析化学分析(Chemical analysis)：仪器分析仪器分析(Instrumental analysis)：准确度高准确度高灵敏度高灵敏度高 11.1 概述概述 11.1 概述概述(1)方法灵敏度高：方法灵敏度高：测定下限可达测定下限可达103106mol/L。(2)方法的准确度能满足微量组分测定的要求。方

3、法的准确度能满足微量组分测定的要求。(3)操作简便快速操作简便快速,仪器设备简单。仪器设备简单。(4)应用广泛应用广泛:几乎所有的无机离子和有机化合物几乎所有的无机离子和有机化合物都可直接或间接地用吸光光度法进行测定。都可直接或间接地用吸光光度法进行测定。 高能辐射区高能辐射区 射线射线 能量最高，来源于核能级跃迁能量最高，来源于核能级跃迁 射线射线 来自内层电子能级的跃迁来自内层电子能级的跃迁 光学光谱区光学光谱区 紫外光紫外光 来自原子和分子外层电子能级的跃迁来自原子和分子外层电子能级的跃迁 可见光可见光 红外光红外光 来自分子振动和转动能级的跃迁来自分子振动和转动能级的跃迁 波谱区波谱区

4、 微波微波 来自分子转动能级及电子自旋能级跃迁来自分子转动能级及电子自旋能级跃迁 无线电波无线电波 来自原子核自旋能级的跃迁来自原子核自旋能级的跃迁电磁辐射按波长顺序排列，称电磁波谱。电磁辐射按波长顺序排列，称电磁波谱。射线射线 X 射线射线紫外光紫外光可见光可见光红外光红外光微波微波无线电波无线电波二、物质对光的选择性吸收二、物质对光的选择性吸收光学光谱区光学光谱区(Spectral region)(真空紫外真空紫外)远红外远红外中红外中红外近红外近红外可见可见近紫外近紫外远紫外远紫外10nm200nm中层中层电子电子200nm 400nm价电价电子子400nm 750nm价电价电子子760

5、 nm 2.5 m分子分子振动振动2.5 m 5.0 m分子分子振动振动5.0 m 1000 m分子分子转动转动单色光：单色光：只具有一种波长的光。只具有一种波长的光。混合光：混合光：由两种以上波长组成的光，如白光。由两种以上波长组成的光，如白光。白光白光青蓝青蓝青青绿绿黄黄橙橙红红紫紫蓝蓝1、光的互补性与物质的颜色、光的互补性与物质的颜色 /nm颜色颜色互补光互补光400-450紫黄绿450-480蓝蓝黄黄480-490绿蓝绿蓝橙橙490-500蓝绿蓝绿红红500-560绿绿红紫红紫560-580黄绿黄绿紫紫580-610黄黄蓝蓝610-650橙橙绿蓝绿蓝650-760红红蓝绿蓝绿不同颜色的

6、可见光波长及其互补光不同颜色的可见光波长及其互补光 物质的颜色物质的颜色是由于物是由于物质对不同波长的光具有质对不同波长的光具有选择性的吸收作用而产选择性的吸收作用而产生的，生的，物质的颜色由透物质的颜色由透过光的波长决定过光的波长决定。例：例：高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液因吸白光中的绿色光而呈紫色。因吸白光中的绿色光而呈紫色。 如果两种适当颜色的光按一定的强度比例混合可如果两种适当颜色的光按一定的强度比例混合可以得白光，这两种光就叫以得白光，这两种光就叫互为补色光互为补色光。物质呈现的颜。物质呈现的颜色和吸收的光颜色之间是互补关系。色和吸收的光颜色之间是互补关系。2、吸收光谱或吸收曲线、吸收光谱

7、或吸收曲线吸收曲线：吸收曲线：测定某种物质对不同波长单色光的吸测定某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以收程度，以波长波长为横坐标，为横坐标，吸光度吸光度为纵坐标作图。为纵坐标作图。定量分析的基础：定量分析的基础：某一波长下测得的某一波长下测得的吸光度与物质浓度吸光度与物质浓度有关。有关。 (cKMnO4:abcd) 最大吸收波长，最大吸收波长， maxmax吸收曲线吸收曲线(absorption spectrum)(absorption spectrum)的讨论的讨论1 1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为度最大处对应的

8、波长称为最大吸收波长最大吸收波长( ( max)max)2 2）同一物质不同浓度的溶液，同一物质不同浓度的溶液，光吸收曲线形状相光吸收曲线形状相似，其最大吸收波长不变；但似，其最大吸收波长不变；但在一定波长处吸光度在一定波长处吸光度随溶液的浓度的增加而增大。随溶液的浓度的增加而增大。这个特性可作为物质这个特性可作为物质定量分析的依据。在实际测定时，只有在定量分析的依据。在实际测定时，只有在maxmax处处测定吸光度，其灵敏度最高，因此，吸收曲线是吸测定吸光度，其灵敏度最高，因此，吸收曲线是吸光光度法中选择测量波长的依据。光光度法中选择测量波长的依据。3 3）不同物质吸收曲线的形状和最大吸收波长

9、）不同物质吸收曲线的形状和最大吸收波长均不相同。均不相同。光吸收曲线与物质特性有关光吸收曲线与物质特性有关，故据，故据此可作为物质定性分析的依据。此可作为物质定性分析的依据。Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱的吸收光谱(Absorption spectra of Cr2O72-、MnO4- )400500600700 /nm300525 545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2Absorbance350440 nm 光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的性质及光的性质有关。特征的颜色，这一过程与物质

10、的性质及光的性质有关。物质对光的吸收物质对光的吸收物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足Plank Plank 条件条件hchEEE02S2S1S0S3E2E0E1E302EEhh 物质对光的吸收本质目 录1. 朗伯定律朗伯定律(Lamberts law)2. 比尔定律比尔定律(Beers law) 11.2光的吸收定律（朗伯光的吸收定律（朗伯-比尔定律）比尔定律）0tA=lg(I /I )=K b 0tA=lg(I /I )=K c 3. 朗伯朗伯-比尔定律比尔定律0tIT =IT透光度透光度(Transmittance)A = lg (I0/It) =KbcA 吸光度吸光度(absorban

11、ce)b 介质厚度介质厚度(length/cm)c 浓度浓度(concentration)K 吸光系数吸光系数(absorptivity)A = lg (I0/It) = lg(1/T) = -lgT = Kbc=10=10T-kbc-A4. 吸光系数吸光系数(Absorptivity)a的单位的单位: Lg-1cm-1当当c的单位用的单位用gL-1表示时，用表示时，用a表示，表示， A Aabcabck的单位的单位: Lmol-1cm-1当当c的单位用的单位用molL-1表示时，用表示时，用k表示表示. k摩尔吸光系数摩尔吸光系数(Molar absorptivity) A A k kbcb

12、c 在数值上等于在数值上等于1cm溶液厚度中吸光物溶液厚度中吸光物质为质为1 molL-1时的吸光度。时的吸光度。 吸光度吸光度(A)、透光率、透光率(T)与浓度与浓度(c)的关系的关系ATc= 10-kbcTA=kbc线性关系线性关系5. 朗伯朗伯-比尔定律的分析应用比尔定律的分析应用 0 1 2 3 4 mg/mLA。 。 。 。*0.80.60.40.20溶液浓度的测定溶液浓度的测定A kbcA c工作曲线法工作曲线法(校准曲线校准曲线)Calibration curve例例1 浓度为浓度为25.0g/50mL的的Cu2+溶液，用双环已酮草酰二腙溶液，用双环已酮草酰二腙分光光度法测定，于

13、波长分光光度法测定，于波长600nm处，用处，用2.0cm比色皿测得比色皿测得T = 5 0 . 1 % ， 求 吸 光 系 数， 求 吸 光 系 数 a 和 摩 尔 吸 光 系 数和 摩 尔 吸 光 系 数 k 。 已 知。 已 知M(Cu)=64.0。)1000.5100 .50100 .251436LgLgc（2-11410.3003.00 10 L.g .2.05.00 10Aacmbccmg L解：解：已知已知T=0.501，则，则A=lgT=0.300，b=2.0cm,则根据朗伯则根据朗伯比尔定律比尔定律 A=abc，而而k= Ma = 64.0gmol-13.00102 Lg-1

14、cm-1=1.92 104 (Lmol-1cm-1)解解: 由由A=-lgT=kbc可得可得 T=10-kbc 当当b1=1cm时，时，T1=10-kc=T 当当b2=2cm时，时，T2=10-2kc=T2例例2 某有色溶液，当用某有色溶液，当用1cm比色皿时，其透光度为比色皿时，其透光度为T，若改用，若改用2cm比色皿，则透光度应为多少？比色皿，则透光度应为多少？6. 吸光度的测量与吸光度的加和性吸光度的测量与吸光度的加和性 A = A1 + A2 + +An 用参比溶液用参比溶液(reference solution)调调T = 100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即），再测样品溶液

15、的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。剂对光的吸收等。7. 引起偏离朗伯比耳定律的因素引起偏离朗伯比耳定律的因素（1 1） 物理因素物理因素AC原因：原因：a.a.非单色光；非单色光； b.b.非平行入射光；非平行入射光； c.c.介质不均匀介质不均匀a.a.非单色光（仪器本身所致）非单色光（仪器本身所致） 仪器使用的是连续光源，用单色器分光，由仪器使用的是连续光源，用单色器分光，由于单色器色散能力的限制和出口狭缝要保持一定于单色器色散能力的限制和出口狭缝要保持一定的宽度，所以我们不可能得到纯的单色光。的宽度，所以我们不可能得到

16、纯的单色光。A 克服方法：克服方法： 尽量选用较好的单色器尽量选用较好的单色器 入射波长入射波长 选择在峰值位置（在波峰有选择在峰值位置（在波峰有一个一个A A值相差较小的区域）值相差较小的区域）Ac. c. 介质不均匀介质不均匀散射、假吸收。散射、假吸收。克服方法：避免溶液产生胶体或浑浊克服方法：避免溶液产生胶体或浑浊b.b.非平行入射光非平行入射光 导致光束的平均光程导致光束的平均光程bb大于吸收池厚度大于吸收池厚度b b，实际测得的吸光度大于理论值，产生正偏离。实际测得的吸光度大于理论值，产生正偏离。 入射光会因散射而损失，导致入射光会因散射而损失，导致T T减小，实测的减小，实测的A

17、A偏高。偏高。例，聚合引起的对吸光定律的偏离例，聚合引起的对吸光定律的偏离单体：单体：SNH+(CH3)2NN(CH3)22SNH+(CH3)2NN(CH3)2 2 max = 660 nm二聚体：二聚体： max = 610 nmA 660 nm610 nm（2 2） 化学因素化学因素 a.a.溶液浓度过高；溶液浓度过高；b.b.化学反应化学反应有色物离解、缔合等。有色物离解、缔合等。目 录1.目视比色法目视比色法:用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。定物质含量的方法。观察方向观察方向c4c3c2c1c1c2c3c4一、一、 光度分析的几种方法光

18、度分析的几种方法 11.3 比色法和分光光度法及其仪器比色法和分光光度法及其仪器特点：简单、可测微量，复合光，误差大。特点：简单、可测微量，复合光，误差大。2. 吸光光度法和分光光度计吸光光度法和分光光度计(spectrophotometer)分光光度法的基本部件分光光度法的基本部件通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. .波长可调波长可调, , 故选择性好故选择性好, , 准确度高准确度高. .光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测系统检测系统稳压电源稳压电源读数指示器读数指示器（分光系统）（分光系统）0.575分光光度计基本部件分光光度计基本部件 A 光源光源

19、 常用的光源为常用的光源为6-12伏低压钨丝灯，电源由稳压电伏低压钨丝灯，电源由稳压电源供给，为了保持光源强度的稳定，以获得准确的测源供给，为了保持光源强度的稳定，以获得准确的测定值，电压必须稳定。定值，电压必须稳定。可见光区：钨灯，碘钨灯可见光区：钨灯，碘钨灯(320 2500 nm)紫外区：氢灯，氘灯紫外区：氢灯，氘灯(180 375 nm)B 单色器（分光系统）单色器（分光系统）将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。棱镜棱镜:玻璃玻璃350 3200 nm, 石英石英185 4000 nm；光栅光栅:波长范围宽波长范围宽, 色散均匀色散均匀,分辨

20、性能好分辨性能好, 使用方便。使用方便。单色器单色器棱镜：棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同依据不同波长光通过棱镜时折射率不同入射狭缝入射狭缝 准直透镜准直透镜棱镜棱镜聚焦透镜聚焦透镜出射狭缝出射狭缝白光白光红红紫紫12800 600 500400C 吸收池（比色皿）吸收池（比色皿）:用于盛待测及参比溶液。用于盛待测及参比溶液。玻璃玻璃 能吸收能吸收UV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区石英石英 不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）D 检测系统检测系统(又叫光电转化器又叫光

21、电转化器)(detector)：利用光电效应，将光能转成电流讯号。利用光电效应，将光能转成电流讯号。光电池，光电管，光电倍增管光电池，光电管，光电倍增管检测器检测器硒光电池硒光电池在光度计中常用的是硒光电池。晒光电池和眼睛相似，在光度计中常用的是硒光电池。晒光电池和眼睛相似，对于各种不同波长的光线，灵敏度是不同的。对于波长为对于各种不同波长的光线，灵敏度是不同的。对于波长为500-600nm的光线最灵敏。而对紫外线，红外线则不能应用。的光线最灵敏。而对紫外线，红外线则不能应用。E 信号显示系统（读数指示器）信号显示系统（读数指示器）(display)早期使用的是检流计、微安表、电位计、数字早期

22、使用的是检流计、微安表、电位计、数字电压表、自动记录仪等。电压表、自动记录仪等。 现代的分光光度计广泛采用数字电压表、函数现代的分光光度计广泛采用数字电压表、函数记录仪、示波器及数据处理台等。记录仪、示波器及数据处理台等。分光光度法（紫外分光光度法（紫外-可见分光光度法）可见分光光度法）UV-VISUltraviolet Visual Spectroscopy0.575I0It0lglgtIATbCI 目 录 在分光光度分析中，将试样中被测组分转变在分光光度分析中，将试样中被测组分转变成有色化合物的反应叫成有色化合物的反应叫显色反应。显色反应。 显色反应可分两大类，即络合反应和氧化还显色反应可

23、分两大类，即络合反应和氧化还原反应，而络合反应是最主要的显色反应。与被原反应，而络合反应是最主要的显色反应。与被测组分化合成有色物质的试剂称为测组分化合成有色物质的试剂称为显色剂显色剂。同一。同一组分常可与若干种显色剂反应，生成若干有色化组分常可与若干种显色剂反应，生成若干有色化合物，其原理和灵敏度亦有差别。一种被测组分合物，其原理和灵敏度亦有差别。一种被测组分究竞应该用哪种显色反应，可根据所需标准加以究竞应该用哪种显色反应，可根据所需标准加以选择。选择。11.4显色反应与显色条件的选择显色反应与显色条件的选择（一）显色反应和显色剂（一）显色反应和显色剂 定义定义：将被测组分转变为：将被测组分

24、转变为“有色物质有色物质”的反应的反应 M无色无色 + R = MR有色有色(主要是络合、氧化还原反应）主要是络合、氧化还原反应） 对显色反应或显色剂的要求对显色反应或显色剂的要求 选择性好（最好是特效反应）选择性好（最好是特效反应） 灵敏度高（灵敏度高（ max 104Lmol-1cm-1） 对比度要大，对比度要大，(max)最大吸收最大吸收波长相差波长相差60nm以上以上 MR有色有色化合物的化合物的组成要恒定组成要恒定,化学化学性质要稳定性质要稳定。 显色反应的条件要易于控制显色反应的条件要易于控制显色反应能否完全满足光度法的要求，除了与显色反应能否完全满足光度法的要求，除了与显色剂的性

25、质有主要关系外，控制好显色反应的显色剂的性质有主要关系外，控制好显色反应的条件也是十分重要的，如果显色条件不合适，将条件也是十分重要的，如果显色条件不合适，将会影响分析结果的准确度。会影响分析结果的准确度。 1.显色剂的用量显色剂的用量 2. 显色反应酸度显色反应酸度 3. 显色温度及显色时间显色温度及显色时间 4.介质条件、有机溶剂、表面活性剂等介质条件、有机溶剂、表面活性剂等 5.共存离子的干扰及消除共存离子的干扰及消除（二）（二） 显色反应条件的选择显色反应条件的选择目 录1.1.显色剂的用量（显色剂的用量（C CR R） 为使显色反应完全，一般为使显色反应完全，一般R R过量（同离子效

26、应），但过量（同离子效应），但R R也不能大过头，否则，物极必反。也不能大过头，否则，物极必反。a. R本身有色，空白本身有色，空白 b. 改变络合比，例：改变络合比，例：Mo()与与SCN-:浅红橙红浅红, 6SCN, 5SCN2, 3)SCN(Mo)SCN(Mo)SCN(MoC CR R由实验确定由实验确定显色剂显色剂R R11112345662.2.溶液的酸度：溶液的酸度：HH+ + 一切反应的基础一切反应的基础 a.a.影响影响M M的存在状态，的存在状态， HH+ + ，M M会水解；会水解； b.b.影响影响RR及颜色，及颜色，HH+ + ，影响，影响RR（大多有机弱酸）（大多有机

27、弱酸） 影响颜色（大多酸碱指示剂）影响颜色（大多酸碱指示剂） c.c.影响影响MRnMRn组成组成3.显色时的温度和时间显色时的温度和时间 大多显色反应在室温下进行，但也有需要加大多显色反应在室温下进行，但也有需要加热才能完成的。热才能完成的。 V=f(T) T , V 。但。但T 太太 ，有色物分解。，有色物分解。合适的合适的T 由实验确定。由实验确定。 At t 由实验确定。显由实验确定。显色后，至少应保持到色后，至少应保持到测定工作做完。测定工作做完。时间时间4. 溶剂和表面活性剂溶剂影响有色络合物的离解度溶剂影响有色络合物的显色速度溶剂影响有色络合物的颜色表面活性剂a. 胶束增溶b.

28、形成三元络合物实验确定，有点运气5. 5. 干扰及消除干扰及消除a.干扰干扰干扰物本身有色或与显色剂显色，干扰物本身有色或与显色剂显色，+ +干扰干扰干扰物与干扰物与M M、N N反应，使显色不完全，干扰反应，使显色不完全，干扰b. 消除消除控制酸度控制酸度，使，使M显色，干扰不显色显色，干扰不显色氧化还原，改变干扰离子价态氧化还原，改变干扰离子价态掩蔽掩蔽校正系数校正系数参比液：可消除显色剂和某些离子的干扰参比液：可消除显色剂和某些离子的干扰选择选择 测测，可避开干扰的吸收，可避开干扰的吸收增加显色剂用量，将干扰灌饱增加显色剂用量，将干扰灌饱分离分离目 录 光度分析法的误差除了来源于朗伯比耳

29、定律光度分析法的误差除了来源于朗伯比耳定律的偏离以外，仪器测量不准确也是导致误差的原因。的偏离以外，仪器测量不准确也是导致误差的原因。 任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来源于能来源于光源不稳定、实验条件的偶然变动、读数光源不稳定、实验条件的偶然变动、读数不准确不准确等。等。11.5 分光光度法仪器测量误差及其消除分光光度法仪器测量误差及其消除测量条件测量条件的选择的选择1.测量波长测量波长 的选择的选择(1)“最大吸收最大吸收”原则原则无干扰，无干扰， 选择选择 max为测量波长为测量波长(2)“吸收较大，干扰最小吸收较大，干扰最小”原则原则有

30、干扰，选择不受干有干扰，选择不受干扰的次强吸收波长为测量波扰的次强吸收波长为测量波长长A A A 非单色光影响小非单色光影响小B 灵敏度高灵敏度高将将T Er的关系描绘于图的关系描绘于图1086420204060800.70.40.2 0.1AT%Err0.434lg(0.01)cTEcTTT (36.8)0.434 可见可见： 1）当）当dT一定，一定，T较大和较小时，较大和较小时，dC/C均较大；均较大； 2）T在在10%-70%（即（即A为为1.0-0.15）时，由）时，由dT引起的引起的Er 较小；较小； 3）当）当T=e-1=0.368,即即A=0.434时，时，Er最小。最小。2.

31、吸光度范围的控制吸光度范围的控制控制控制A = 0.15 1.0 T = 70 % 10% 方法方法选择选择 C A = KbC 选择选择 b A = KbC实际工作中实际工作中3. 参比溶液的选择参比溶液的选择 M + R = MRM + R = MR有色有色A （样）（样） = A （待测吸光物质）（待测吸光物质） + A （干扰池）（干扰池）A （参比）（参比） = A （干扰（干扰+池）池） 用参比溶液用参比溶液(reference solution)调调T = 100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光

32、的吸收收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。等。原则：扣除非待测组分的吸收原则：扣除非待测组分的吸收 如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收，如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂作参比溶液。可用纯溶剂作参比溶液。 如果显色剂或其它试剂略有吸收，应用空白如果显色剂或其它试剂略有吸收，应用空白溶液溶液( (不加试样溶液不加试样溶液) )作参比溶液。作参比溶液。 如试样中其它组分有吸收，但不与显色剂反如试样中其它组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作参比溶应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作参比溶液；当显色剂略有吸收时，可在试样溶液中加入适液；当显色剂略

33、有吸收时，可在试样溶液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，以此溶液当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，以此溶液作参比溶液。作参比溶液。参比溶液的选择参比溶液的选择目 录 紫外紫外- -可见分光光度法的定量方法可见分光光度法的定量方法 1、单组分测定、单组分测定 a.吸光系数法吸光系数法 由由A= kbc, 若若k 、b 已知，通过测定已知，通过测定 A 即可求得即可求得 c。 b.对照法对照法 在相同条件下配制标准溶液和待测溶液，测定在相同条件下配制标准溶液和待测溶液，测定 A ： A标标= k c标标b A样样= k c样样b 两式相比，得：两式相比，得： A标标/ A样样 = c标

34、标 / c样样 c样样= c标标 A样样 / A标标 11.6 分光光度法的应用分光光度法的应用c.标准曲线法标准曲线法 在相同条件下在相同条件下配制一系列配制一系列标准溶液，测定标准溶液，测定 A 。以以c样样对对A作图，可获得一条通过圆点的直线，即作图，可获得一条通过圆点的直线，即标准曲线。标准曲线。在相同条件下测定待测溶液在相同条件下测定待测溶液A，图查，图查得得c样样。Ac0Axcx方法：实验条件下，方法：实验条件下，测量一系列不同含量测量一系列不同含量的标准溶液的的标准溶液的A，再在，再在相同条件下测待测物相同条件下测待测物的的Ax，从而求出，从而求出Cx。 如试样中微量磷的测定：如

35、试样中微量磷的测定： 先生成磷钼杂多酸：先生成磷钼杂多酸： 然后用还原剂维生素然后用还原剂维生素C或盐酸羟铵将磷钼酸还或盐酸羟铵将磷钼酸还原成蓝色的磷钼蓝，在原成蓝色的磷钼蓝，在 处测光度，用标处测光度，用标准曲线法求磷的含量。准曲线法求磷的含量。O212H3NO421NH312MoO4PO3)4(NH321HNO4MoO2)412(NH4PO3Hnm660max2、紫外、紫外-可见分光光度法不但可用于样品中单组可见分光光度法不但可用于样品中单组分分析，而且根据吸光度的加和性，通过计算分分分析，而且根据吸光度的加和性，通过计算分光光度法光光度法(calculational spectropho

36、temetry)，还，还可进行样品中可进行样品中多组分的同时分析多组分的同时分析。 目 录作业P412: 3、4、6目 录 本门课程内容全部结束。 谢谢同学们这一学期对本门课程的关注与合作！ 透过光强度透过光强度It与人射光强度与人射光强度Io之比称为之比称为透透射比或透光率（度），射比或透光率（度），用用T表示。溶液的透射表示。溶液的透射比愈大，表示它对光的吸收愈小比愈大，表示它对光的吸收愈小;相反，透射比相反，透射比愈小，表示它对光的吸收愈大。愈小，表示它对光的吸收愈大。0IITt透射比或透光率（度）透射比或透光率（度）Transmittance透光率定义：透光率定义：0IITtT 取值为取值为0.0 % 100.0 %返回返回