细胞观察-显微镜课件.ppt

1、细胞观察倒置显微镜观察：活细胞观察倒置显微镜观察：活细胞观察普通光学显微镜观察：化学染色标本普通光学显微镜观察：化学染色标本 如如HEHE染色，免疫组化染色标本等染色，免疫组化染色标本等扫描电镜观察：细胞表面形貌扫描电镜观察：细胞表面形貌透射电镜观察：细胞内部超微结构透射电镜观察：细胞内部超微结构倒置相差显微镜观察原理原理活细胞无色透明，当光波通过它时，活细胞无色透明，当光波通过它时，颜色和亮度变化不大。颜色和亮度变化不大。相差显微镜是利用细胞内结构密度相差显微镜是利用细胞内结构密度的不同而对光产生折射率有差异的原理，的不同而对光产生折射率有差异的原理，使肉眼不能分辨的相位差变为可分辨的使肉眼

2、不能分辨的相位差变为可分辨的振幅差（即明暗差）。振幅差（即明暗差）。倒置相差显微镜观察调节光轴调节光轴倒置相差显微镜观察合轴调节合轴调节倒置相差显微镜观察(暗反差)倒置相差显微镜观察(明反差)活细胞荧光染色观察活细胞丫啶橙染色呈绿色活细胞丫啶橙染色呈绿色凋亡细胞与溴化乙锭共染呈橙色凋亡细胞与溴化乙锭共染呈橙色扫描电镜观察扫描电镜观察透射电镜观察透射电镜观察血球计数板法制备细胞悬液：细胞密度制备细胞悬液：细胞密度10104 4/ml, /ml, 细细胞过多时需适当稀释胞过多时需适当稀释, ,单个细胞率单个细胞率95%95%。加样：混悬细胞，取少许细胞悬液，从加样：混悬细胞，取少许细胞悬液，从计数

3、池一侧加入，不要溢出或出现气泡。计数池一侧加入，不要溢出或出现气泡。计数：计数：1010倍物镜下计数四角大方格内的倍物镜下计数四角大方格内的细胞，压线者只计左边线和上边线。细胞，压线者只计左边线和上边线。计算：细胞数计算：细胞数/ml=/ml=（4 4四大格细胞总数四大格细胞总数4 4）10104 4稀释倍数稀释倍数细胞密度调整稀释公式：稀释公式：C1C1V1V1C2C2V2V2稀释前细胞密度稀释前细胞密度C1C1，溶液体积，溶液体积V1V1稀释后细胞密度稀释后细胞密度C2C2，溶液体积，溶液体积V2V2细胞活力测定台盼蓝染色法制备单个细胞悬液：制备单个细胞悬液：105106ml0.4%台盼蓝

4、染色台盼蓝染色1 min (9滴细胞悬液滴细胞悬液1滴滴0.4%台盼蓝台盼蓝)， 3min 内计数内计数用血细胞计数板镜下分别计数活细胞用血细胞计数板镜下分别计数活细胞（染料拒染）和死细胞（呈淡蓝色）（染料拒染）和死细胞（呈淡蓝色）计算细胞活力：计算细胞活力： 活细胞率（）活细胞数（活细活细胞率（）活细胞数（活细胞数死细胞数）胞数死细胞数）100细胞生长曲线测定计数法01020304050607080012345678Days in cultureCell number（X 104）M3SP2M3SP2-pBpM3SP2-PTEN细胞染色细胞标本制备细胞标本制备悬浮生长细胞：涂片法悬浮生长细胞

5、：涂片法贴壁生长细胞：铺片法（细胞生长在盖贴壁生长细胞：铺片法（细胞生长在盖玻片上）玻片上）细胞固定细胞固定取出细胞片，取出细胞片，PBSPBS浸洗，浸洗，9595酒精固定酒精固定15min15min（下可保存周）下可保存周）细胞染色PBSPBS洗次洗次苏木精染苏木精染5 51010minmin自来水漂洗自来水漂洗稀盐酸酒精分色约稀盐酸酒精分色约3 3秒秒淡氨水使胞核蓝化数秒淡氨水使胞核蓝化数秒自来水漂洗自来水漂洗伊红染伊红染5 51010minmin过过7070、8080 、9090酒精，各酒精，各1 1minmin过过95%95%酒精酒精2 2次，各次，各1min1min；100100酒精

6、酒精2 2次，各次，各1 1minmin过二甲苯过二甲苯3 3次，各次，各1min1min，中性树脂封片，中性树脂封片细胞细胞HEHE染色观察染色观察细胞计数实习8 8人一组，提供人一组，提供2 2块计数板块计数板提供的细胞悬液密度为提供的细胞悬液密度为10106 6ml,4ml,4倍稀释倍稀释计数计数(3(3份培养液份培养液1 1份细胞悬液份细胞悬液) )按按1010倍稀释方法，制备倍稀释方法，制备3 3种密度的细胞悬种密度的细胞悬液，即液，即10105 5、10104 4 、10103 3 mlml，稀释方法：稀释方法：9 9份培养液份培养液1 1份细胞悬液，份细胞悬液， 根据提供的移液器（根据提供的移液器（50 50 、 100 100 、 200200）调整稀释调整稀释盖玻片与计数板成垂直方向放置盖玻片与计数板成垂直方向放置细胞HE染色实习8 8人一套染色缸人一套染色缸细胞片在酒精缸细胞片在酒精缸, , 取出细胞片取出细胞片, ,用用PBSPBS浸浸洗后再染色洗后再染色染色完成后染色完成后, ,省略树胶封片。如果想观察省略树胶封片。如果想观察染色结果，可将有细胞的一面贴在载玻染色结果，可将有细胞的一面贴在载玻片上。片上。