MLPA技术原理2解读课件.ppt
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- 关 键 词:
- MLPA 技术 原理 解读 课件
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1、 MLPA技术原理 MLPA 技术原理王晓琳 2002 年,荷兰科学家发明了一种名为多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA) 的高通量的基因检测方法,该技术利用核酸杂交、连接反应和 PCR 扩增反应,可以在同一反应管内对多达 45 种不同的核苷酸序列进行检测和定量分析。 MLPA 技术原理 该技术主要包括:探针与靶序列的杂交、探针的特异化连接、连接探针的扩增和结果的检测分析。针对每一个待测靶基因序列,均有一对 MLPA 探针,其由一个短的寡核苷酸片段(短探针)和一个长的寡核苷酸片段(长探针)组成。该技术
2、的特色之一是仅扩增连接完好的探针,而不是扩增样本靶序列。 MLPA 技术原理 该技术的扩增环节仅需 2 条引物,一是引物 GP1,另一是引物 GP2。在所有短探针的 5端均有一段共同序列,该序列与引物 GP1 的核酸序列相同;在所有长探针的 3端均有一段共同序列,该序列与引物 GP2 的核酸序列互补。可见,所有连接探针的 PCR 扩增用的是同一对引物。MLPA 技术原理 若两探针连接,则扩增可进行;而若两探针未连接,则扩增无法进行。各长探针在共同序列和与靶序列互补的序列间有不同长度的填充片段,该片段长度不同使连接后的MLPA探针长度不同,故其扩增片段长度亦不同。一般相临两产物的长度相差68 b
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