生物大分子的提取与沉淀分离技术课件.pptx
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- 关 键 词:
- 生物 大分子 提取 沉淀 分离 技术 课件
- 资源描述:
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1、生物大分子的提取与沉淀分离技术第一节 细胞破碎 细胞破碎的原因: 破碎的主要方法:机械法、物理法、化学法、酶法1 机械破碎方法 1. 1高速组织捣碎机 原理 操作:装料,低速高速 效果:作用强烈,活性物质易受破坏 1. 2匀浆器 原理: 效果:破碎程度较捣碎机高,破坏较少 1. 3研磨器2 物理破碎 2.1温度差破碎法 2.2压力差破碎法 2.3超声波破碎法 影响因素:样品浓度、超声波频率、功率、破碎时间 操作:冰浴、间歇进行 适用于悬浮细胞破碎 3化学破碎法 原理:化学试剂改变或破坏细胞膜结构 常用试剂:有机溶剂、表面活性剂 4 酶学破碎法 外加酶制剂或自溶法第二节 提取1 提取的基本概念与
2、影响因素 提取(抽提或萃取): 主要影响因素: a 欲提取的物质在所用的溶剂中的溶解度;b该物质向溶剂扩散的难易 溶解度大小:a 溶剂:相似相溶;b 温度 c等电点2 蛋白质和酶的提取 提取方法:水溶液提取、有机溶剂提取、混合提取 选择方法依据:存在部位、分子结构和溶解性质2.1水溶液提取 水、稀盐、稀酸、稀碱溶液 常用稀盐溶液和缓冲液,应注意控制盐浓度、温度、pH 2.1.1盐浓度的选择 一般用等渗盐溶液。但根据溶解度,有些蛋白质要用较高浓度盐溶液提取,而有些则用纯水提取。 2.1.2 pH的选择 不在等电点附近,但不宜太高或太低。 pH34有利于离子键分离 2.1.3温度的选择 一般010
3、(常用4),对于耐高温的蛋白质和酶,可适当提高温度,可使杂蛋白变性分离,有利于提取和进一步纯化。 2.1.4添加底物或辅酶有利于酶的提取 2.2有机溶剂提取 常用有机溶剂:乙醇、丙酮、丁醇等 注意:蛋白质提取应根据不同蛋白质的不同性质选注意:蛋白质提取应根据不同蛋白质的不同性质选用不同的提取条件用不同的提取条件3 核酸的提取 类化合物都溶于水而不溶于有机溶液,一般用水溶液提取。提取的一般都是核蛋白。 DNA-Pro.与RNA-Pro.在不同浓度电解质溶液中溶解度有明显差别: 0.14mol/L NaCl: RNA-Pro.溶解度相当大,DNA-Pro.溶解度仅为水中1。 1 mol/L NaC
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