新冠病毒核酸检测实验室设置基本要求课件.pptx

1、 新冠病毒核酸检测实验室设置基本要求目录1背景及名词4 标识标志及生物安全2实验室设置及分区3实验室图例4背景及名词012020年3月11日，世界卫生组织宣布，根据评估，世卫组织认为新冠肺炎疫情可被称为全球大流行为什么要进行 根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类：a) 第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物；b) 第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物；c) 第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般

2、情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物；. 根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，将实验室分为一级（Biosafety Level 1,BSL-1）、二级（BSL-2）、三级（BSL-3）、四级（BSL-4）。 生物安全防护水平为二级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。按照实验室是否具备机械通风系统，将 BSL-2 实验室分为普通型 BSL-2 实验室、加强型 BSL-2 实验室

3、。人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录 中华人民共和国卫生部制定 二OO六年实验室开展新冠病毒核酸检测的条件：实验室开展新冠病毒核酸检测的条件：获得临床检验扩增检验项目开展资质通过二级生物安全实验室备案省新冠肺炎疫情防控指挥部批准实时荧光（实时荧光（PCR） 在PCR进行的同时，对其过程进行监测的能力（即实时）。因此，数据可在PCR扩增过程中，而非PCR结束之后，进行收集。以反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征，而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量。PCR 聚合酶链式反应聚合酶链式反应 是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制

4、临床基因扩增（临床基因扩增（PCR）检验实验室：）检验实验室： 是指通过扩增检测特定的是指通过扩增检测特定的DNA或或RNA，进行疾病诊断、治疗检测和预后，进行疾病诊断、治疗检测和预后判定的实验室。判定的实验室。生物安全实验室生物安全实验室: 通过防护通过防护屏障屏障和和管理措施管理措施，达到生物安全要求的病原微生物实验室。，达到生物安全要求的病原微生物实验室。实验室防护区：实验室防护区： 实验室的物理分区，该区域内生物风险相对较大，需对实验室的平面设计、实验室的物理分区，该区域内生物风险相对较大，需对实验室的平面设计、围护结构的密闭性、气流，以及人员进入、个体防护等进行控制的区域。围护结构的

5、密闭性、气流，以及人员进入、个体防护等进行控制的区域。主实验室主实验室main room 是生物安全实验室中污染风险最高的房间，包括实验操作间、动物饲养间、动物解剖间等，主实验室也称核心工作间。缓冲间缓冲间buffer room 设置在被污染概率不同的实验室区域间的密闭室。需要时，可设置机械通风系统，其门具有互锁功能，不能同时处于开启状态。实验室的设置及分区02PCR反应特点01020304引物与模板引物与模板DNA特异正确的结合；特异正确的结合；碱基配对原则；碱基配对原则；Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；聚合酶合成反应的忠实性；靶基因的特异性与保守性。靶基因的特异性与保守性。PCR产物

6、的生成量是以指数方式增加的，能产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增）量级的起始待测模板扩增到微克（到微克（g=10-6）水平）水平在在24 小时完成扩增反应。扩增产小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。素，无放射性污染、易推广。不需要分离病毒或细菌及培养细胞，不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及粗制品及RNA均可作为扩增模板。均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等洗嗽液、毛发、细胞、活

7、组织等DNA扩增检测。扩增检测。 特异性强灵敏度高样本纯度要求低简便快捷新冠病毒传染性极强新冠病毒传染性极强核心思想生物安全防污染AB防样本交叉污染防检测试剂污染防扩增产物气溶胶污染工作人员、来访人员安全社区和环境安全样本及实验室安全设计依据 新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版） GB18489-2008实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求 GB50346-2011生物安全实验室建筑技术规范生物安全实验室建筑技术规范 WS233-2017病原微生物实验室生物安全通用准则病原微生物实验室生物安全通用准则 医疗机构临床基因检验实验室管理办法医疗机

8、构临床基因检验实验室管理办法卫办医政发卫办医政发【2020】194号号医疗机构临床基因检验实验室工作导则医疗机构临床基因检验实验室工作导则临床基因扩增检验实验室工作规范临床基因扩增检验实验室工作规范选址及选址及装修装修选选址：址：充分考虑生物安全和环境保护充分考虑生物安全和环境保护建建筑结构：筑结构：地面、墙面、顶板、管道、地面、墙面、顶板、管道、橱柜等在消毒、清洁、防滑、防渗漏、橱柜等在消毒、清洁、防滑、防渗漏、防积尘等方面特殊要求。防积尘等方面特殊要求。路线：路线：设设计紧急撤离路线，紧急出口计紧急撤离路线，紧急出口处应有明显的标识。处应有明显的标识。警警示：示：进进入限制措施，如警示牌、

9、警入限制措施，如警示牌、警示灯、警示线、门禁等示灯、警示线、门禁等门、窗门、窗生物安全实验室建筑技术规范生物安全实验室建筑技术规范GB 50346-2011分区样本接收区域试剂准备区标本制备区扩增区产物分析区按功能进行分区按功能进行分区试剂准备区标本制备区扩增及产物分析区物理隔离物理上完全分开的各自独立的区域物理上完全分开的各自独立的区域独立的送排风系统，实验室不能用中央空调独立的送排风系统，实验室不能用中央空调注意传递窗的密封性及传递窗的互锁注意传递窗的密封性及传递窗的互锁注意门的密封性及缓冲间的互锁注意门的密封性及缓冲间的互锁空调、通风和净化空调、通风和净化二级生物安全实验室中的a类和b1

10、类实验室可采用带循环风的空调系统。二级生物安全实验室中的b2类实验室宜采用全新风系统，防护区的排风应根据风险评估来确定是否需经高效空气过滤器过滤后排出。b1类实验室中可能产生污染物外泄的设备必类实验室中可能产生污染物外泄的设备必须设置带高效空气过滤器的局部负压排风装须设置带高效空气过滤器的局部负压排风装置，负压排风装置应具有原位检漏功能。置，负压排风装置应具有原位检漏功能。面积和环境面积和环境面积面积：根据工作量的大小、仪器设根据工作量的大小、仪器设备的配置情况，保证工作有效、互不备的配置情况，保证工作有效、互不干扰。干扰。温度、湿度、通风、照明温度、湿度、通风、照明流向及流程流向及流程 人流

11、、物流、及空气流向单向流动人流、物流、及空气流向单向流动试剂准备区试剂准备区 标本制备区标本制备区 扩增及产物分析区扩增及产物分析区超净实验室非必须超净实验室非必须样本制备区、扩增区及产物分析区负压样本制备区、扩增区及产物分析区负压原安装排风扇实验室不符合要求原安装排风扇实验室不符合要求 分区：样分区：样本接收区域本接收区域功能：功能：临床样本接收编号、血清（浆）预处理临床样本接收编号、血清（浆）预处理 及保存及保存配置：配置：生物安全柜、离心机、冰箱、加样器及其他耗材生物安全柜、离心机、冰箱、加样器及其他耗材对于对于2019-CoV二级生物安全实验室要求，个人三级防护。二级生物安全实验室要求

12、，个人三级防护。标题内容试剂准备区试剂准备区功能：试剂的存储、试剂的配制及试剂准备PCR实验室中最洁净的区域 无基因的概念 本区域的气压与相邻区域应为正压。配置：根据实际需要可配备加样器、天平、离心机等，最好有超净工作台（净化实验室不需要）。紫外灯和可移动紫外灯，专用工作服及其他用品。0Pa 试剂准备区试剂准备区 -10Pa 标本制备区标本制备区扩增及产物分析区扩增及产物分析区缓冲间缓冲间缓冲间 PCR走道室外0Pa标本制备区标本制备区功能：样本处理 核酸提取纯化 PCR反应体系加样完成直接与样本接触的区域，属于实验室的核心实验区域 气压与相邻区域应为负压。 配置：生物安全柜、病毒灭活设施、核

13、酸提取仪、冰箱（冷冻和冷藏）、加样器、离心机、移动紫外灯、洗眼设备、急救箱及其他专用耗材及用品。安全柜的摆安全柜的摆放放扩增及产物分析区扩增及产物分析区功能：PCR体系的扩增 结果判读PCR污染发生的最危险区域 关注扩增产物的密封处理 本区域气压的控制 配置：扩增仪 紫外灯 0Pa 试剂准备区试剂准备区 -10Pa 标本制备区标本制备区-20pa扩增及产物分析区扩增及产物分析区缓冲间缓冲间缓冲间-10pa 送风 PCR走道 排风室外0Pa缓冲间缓冲间缓冲间的作用是控制气流和控制压差的作用，防止污染空气进入洁净区域。污染空气有两个概念：一是扩增产物污染的空气，另一为病毒污染的空气。顶安装紫外灯

14、，水池、衣柜。安装排风，送风系统，调节压差 ，注意与实验室内压差，与外走道压差。另外，标本制备区缓冲间可兼作防护服的更换间，作为防护服更换间时应注意缓冲间的气压设置。缓冲间的门宜能互锁。传递窗传递窗传递窗作为洁净室的一种辅助设备，主要用于洁净区与洁净区、非洁净区与洁净区之间的小件物品的传递，以减少洁净室的开门次数，最大限度的降低洁净区的污染。 另外，传递窗给工作带来极大方便传递窗的要求：密封性好，能互锁 适合洁净室原理的圆弧转角 定期检查及更换紫外灯设置及分区图例03标识标志及生物安全04标识、标志标识、标志实验室门口的生物危害标识实验室门口的生物危害标识各区域明显标识各区域明显标识各区域内物

15、品明显分区标识各区域内物品明显分区标识仪器设备分区标识和状态标识仪器设备分区标识和状态标识人人流和物流标识流和物流标识门禁门禁 实验室应有门禁系实验室应有门禁系统，生物危害标识统，生物危害标识 。主实验室门可自动关闭。主实验室门可自动关闭。采采用机械通风系统，送风口和排风口应采取防雨、防风、放杂物、防用机械通风系统，送风口和排风口应采取防雨、防风、放杂物、防昆虫及其他动物的措施，送风口因远离污染源和排风口。排风系统应使昆虫及其他动物的措施，送风口因远离污染源和排风口。排风系统应使用高效空气过滤器用高效空气过滤器。排排风与送风互锁，排风先于送风开启，后于送风关闭风与送风互锁，排风先于送风开启，后于送风关闭压差：核压差：核心工作间气压对于相邻区域应为负压，压差不宜低心工作间气压对于相邻区域应为负压，压差不宜低于于10Pa。在核心工作区入口的显著位置，应安装负压状况的压。在核心工作区入口的显著位置，应安装负压状况的压力显示装置力显示装置。生生物安全柜需要定期检定物安全柜需要定期检定实验实验室内压力蒸汽灭菌设备。室内压力蒸汽灭菌设备。实验室设水池，水龙头为非手动式。宜设置在靠近出口处实验室设水池，水龙头为非手动式。宜设置在靠近出口处。感谢观看 THANKS