病毒学研究的基本方法课件.ppt

1、3、实验动物接种病毒的用途2、实验动物的等级普通级实验动物（conventional animals, CV）清洁级实验动物（clean animals, CL）无特定病原动物（specific pathogen-free animals, SPF）无菌动物（germ-free animals, GF）悉生动物（gnotobiotic animals, GA）鸡胚构造鸡胚构造接种途径接种途径1、绒毛尿囊膜接种：主要用于在绒毛尿囊膜上形成痘斑样病变的病毒。接种日龄1012日龄。2、尿囊腔接种：主要用于正粘病毒和副粘病毒的接种。接种日龄1011日龄。3、卵黄囊接种：主要用于虫媒披膜病毒、立克次氏体

2、和衣原体的接种。接种日龄68日龄。4、羊膜腔接种：正粘病毒和副粘病毒的接种。接种日龄为1012日龄鸡胚接种后的结果判定1、24小时死亡鸡胚弃去不用，不能认为是因病毒增殖致死。2、尿囊液清凉3、鸡胚死亡或鸡胚出现病变等异常组织培养1、概念：、概念：原指动物或植物组织小块的体外培养，现已泛指体外的组织、器官和细胞培养。组织（块组织（块)培养：培养：将动物组织切成小块，在固定或悬浮条件下培养。该法是最早的组织培养方法。器官培养：器官培养：取器官薄片（气管环 ）进行培养，使其基本保持原来的结构和功能。细胞培养：细胞培养：应用胰酶等细胞分散剂将动物组织消化成单个细胞悬液，加入细胞营养液，使其生长繁殖。组

3、织培养组织培养根据培养细胞类型不同1、原代细胞培养：直接从动物组织制备的单细胞进行培养优点：病毒对天然宿主细胞最敏感。适应于病毒的分离缺点:有时存在携带潜伏病毒无菌取动物活组织洗涤数次剪碎组织 消化组织洗涤消化组织机械吹打 纱布滤过滤过细胞悬液细胞计数培养液稀释所需细胞浓度分装到培养瓶 37培养2、二倍体细胞养：、二倍体细胞养： 原代细胞长成单层后，经胰蛋白酶或EDTA等细胞分散剂将细胞从培养瓶玻面上消化下来，使细胞分散，加入培养液，重新分装到培养瓶中，使细胞长成细胞单层，如此传代，细胞的染色体与原代细胞的染色体数相同，为二倍体，所以又叫二倍体细胞培养或叫继代细胞培养。优点：细胞碎片少，潜伏病

4、毒容易发现，对病毒的敏感性和原代细胞相似。缺点：不能无限制的传代下去，并不是所有的细胞都能继代下去。根据培养方法不同组织培养根据培养方法不同4、微载体细胞培养利用对细胞无毒性的微小颗粒，按一定比例放入混悬的培养的营养液中，作为细胞附着增殖的载体。 大大扩大了细胞长成单层的附着面，充分利用生长空间和营养液，达到了提高细胞产量的目的。常用的细胞培养常用的细胞培养类型 名称 原代细胞培养 恒河猴肾细胞培养，各种动物胚肾、肺等细胞培养，鸡胚成纤维细胞培养 二倍体细胞株 WI-38（人胚肺细胞株） ，HL-8（恒河猴胚细胞株） 传代细胞系 Hela 细胞，Detroit 细胞（胸骨髓细胞系） ，Chang C/I/L/K（人结膜 C，肠 I，肝 L 与肾 K细胞系） ，Vero（绿猴肾细胞系） ，BHK-21（幼地鼠肾细胞系） 病毒感染细胞后的细胞病变效应(Cytopathic effect, CPE)1.噬菌斑2.菌苔菌苔