HLA检测技术及其应用课件.pptx

1、HLA检测技术及其应用内容 血型 HLA概念 检测方法 HLA的应用 HLA与临床输血血型种类及其遗传基础 血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性标志 血液成分：红细胞，白细胞，血小板，血清蛋白 遗传多态性表现：细胞表面，血浆中的各种特异性蛋白 多态性的遗传基础：基因（染色体上的核酸序列）血型的发现 输血治疗的需要促使“血型”发现 15世纪后期开始输血 1900年Landsteiner发现人类红细胞ABO血型 1927年发现MN血型系统 1940年发现Rh血型 HLA1958年法国J.多赛发现Landsteiner血型的检测方法 免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法 凝集实验：试管法、凝胶柱法

2、、固相吸附、 流式技术 细胞生物学检测方法：混合淋巴细胞培养 分子生物学检测方法：血型基因检测 SSP、SSO、SBT HLA概念 人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂的生物学功能，非常复杂的多态性 广范存在于除白细胞表面的其他组织、体液中，与组织相容性有关，又称为组织相容性抗原HLA概念:HLA分子结构HLA-I类分子类分子HLA-II 类分子类分子HLA的生物学功能 参与内外抗原肽的处理，呈递自我识别的信号某些病毒，细菌进入细胞的受体与某些疾病的发病有关,如：B27与强直 性脊柱炎（AS）HLA功能（二）（二）HLAHLA复合体的遗传特征复合体的遗传特征 1. 单元型遗传单元

3、型遗传 2. 多态性现象多态性现象 （1）复等位基因）复等位基因 （2）共显性表达）共显性表达 3. 连锁不平衡连锁不平衡 HLA概念:HLA基因结构（6p21,3）已经发现的HLA种类、数量HLA-类分子的分布类分子的分布 1. 存在于有核细胞存在于有核细胞(含血小板和网织红细胞含血小板和网织红细胞) 表面。表面。 淋巴细胞淋巴细胞 肾、肝脏、心脏肾、肝脏、心脏 神经组织、成熟的神经组织、成熟的滋养细胞滋养细胞 2. 存在形式存在形式 （1）膜结合：有核细胞表面）膜结合：有核细胞表面 （2）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。 HLA-HLA-类

4、分子的分布类分子的分布 1. APC B1. APC B细胞、单核细胞、单核/ /巨噬细胞和树突状细胞；巨噬细胞和树突状细胞； 2. 2. 其他其他 激活的激活的T T细胞，精子和血管内皮细胞细胞，精子和血管内皮细胞。 HLA分型法原分型法原理及应用理及应用HLA的检测方法 TERASAKI 发明的微量淋巴细胞毒实验: 当特异性抗体与HLA抗原结合，激活补体，使淋巴细胞溶解，显微镜下可见到被活性染料着色的淋巴细胞 用于HLA-I类抗原分型HLA检测方法（分子生物学） 基于PCR技术的分型方法 PCR-SSP方法 操作简单、灵活 适合少量样本临床病例分型检测 通量较小PCR-SSP方法HLA检测

5、方法（分子生物学） PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针） 杂交条方法 基因芯片方法 流式荧光微珠芯片的工作原理芯片的工作原理将将HLA基因的基因的PCR产物固定在基片上产物固定在基片上荧光标记的序列荧光标记的序列特异性探针杂交特异性探针杂交探针 1探针 2探针 3探针 n .杂交图谱杂交图谱汇总每条探针数据得到所有样品的分型结果由计算机自动判由计算机自动判读分型结果读分型结果PCR-SSO 流式微珠分型SBT （DNA测序分型）几种几种常用常用HLA分型方法比较分型方法比较 HLA分型方法比较项目 PCR-SSP PCR-SSO杂交条 PCR-SSO微珠法 PCR-SSO芯片法 DNA测序

6、方法技术要求 低 低 较高 高 高 分 辨 率 中低 中低 中高 中高 高检测通量 低 一般 较高 高 较高使用设备 少 少 较多 多 较多环境污染 EB致癌 轻微 轻微 轻微 轻操作步骤 简单 简单 较复杂 复杂 较复杂检测成本 低 低 较高 高 较高适用范围 临床或小批量 临床、较大批量 中、大批量 大批量 临床、各种批量应用情况 国内临床 国内临床 骨髓库 国家芯片中心 国外常规采用HLA分型方法的发展趋势 高准确性：血清学-分子生物学 高通量： SSP-基因芯片、流式 高分辨： 低分辨-中分辨-高分辨 氨基酸残基配型：血型学-基因-AA残基 （表位）HLA的应用 免疫应答，T细胞分化

7、器官移植 与疾病关联 肿瘤关联 法医、个体识别、人类学研究免疫应答HLA与器官移植、临床输血 骨髓移植（造血干细胞移植） 肾移植 血小板输注 其他血液成分输血HLA与疾病HLA与肿瘤 恶性肿瘤细胞恶性肿瘤细胞 HLA-类分子表达减少或缺类分子表达减少或缺乏乏，肿瘤细胞逃逸免疫监视。肿瘤细胞逃逸免疫监视。 IFN- 促进肿瘤细胞促进肿瘤细胞HLA-类分子表达类分子表达 增增强强CD8+CTL细胞的特异性杀伤。细胞的特异性杀伤。法医、个体识别、人类学研究 HLA可以作为亲子鉴定的一个指标 刑侦 研究种族人群的迁徙HLA与临床输血 溶血性输血反应，临床少见 发热反应，70%发热反应是由HLA抗体引起 血小板输注无效，首要因素是HLA抗体 过敏反应，与HLA抗体有关 GVHD TRALI