医院监测检验方法课件.ppt

1、 对重点部门的室内空气、物体表面及医护人员手表面的消对重点部门的室内空气、物体表面及医护人员手表面的消毒情况的监测毒情况的监测 对使用中消毒液及灭菌剂的监测对使用中消毒液及灭菌剂的监测 对内镜消毒效果的监测对内镜消毒效果的监测 对各种灭菌器灭菌效果的生物监测对各种灭菌器灭菌效果的生物监测 对医院污水的监测对医院污水的监测 GB15982-1995医院消毒卫生标准 环境类别环境类别范范 围围标标 准准空气空气cfu/ccfu/cm m3 3物体表面物体表面cfu/cmcfu/cm2 2医护人员手医护人员手cfu/cmcfu/cm2 2类类层流洁净手术室、层流洁净病房层流洁净手术室、层流洁净病房1

2、055类类 普通手术室、产房、婴儿室、普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房症监护病房20055类类 儿科病房、妇产科检查室、注儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间各类普通病房和房间5001010类类传染病科及病房传染病科及病房-1515 不得检出致病微生物，包括：乙型溶血链球菌、不得检出致病微生物，包括：乙型溶血链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等 要求

3、在母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿要求在母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿 室及儿科病房的物体表面及医护人员手上不得室及儿科病房的物体表面及医护人员手上不得 检出沙门氏菌。检出沙门氏菌。 采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样前期间采样 采样高度：与地面垂直高度采样高度：与地面垂直高度8080150cm 150cm 布点方法：室内面积布点方法：室内面积30m30m2 2，设一条对角线上取，设一条对角线上取3 3点，即中心一点、两端各距墙点，即中心一点、两端各距墙1m1m处各取一点；处各取一点；室内面积室内面积30m30m2 2，设东、西、南

4、、北中，设东、西、南、北中5 5点，其中点，其中东、西、南、北点均距墙东、西、南、北点均距墙1m1m。 3 3采样方法：用采样方法：用9cm9cm直径普通营养琼脂平板在采直径普通营养琼脂平板在采样点暴露样点暴露5min5min。 细菌菌落总数检查：将采样好的平板放置于 37培养箱培养后，进行数落计数。 结果计算： 5000050000平均菌落数（平均菌落数（cfucfu/ /平皿）平皿） 空气细菌菌落总数（空气细菌菌落总数（cfu/mcfu/m3 3）= 平板面积（平板面积（cmcm2 2）平板暴露时间（平板暴露时间（minmin） 采样时间：选择消毒处理后采样时间：选择消毒处理后4h4h内进

5、行采样。内进行采样。 采样面积：被采表面采样面积：被采表面100cm100cm2 2，取全部表面；被，取全部表面；被采表面采表面100cm100cm2 2。 采样方法：用采样方法：用5 55cm5cm2 2的标准灭菌规格板，放在的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子棉拭子1 1支，在规格板内横竖往返各涂抹支，在规格板内横竖往返各涂抹5 5次，次，并随之转动棉拭子，连续采样并随之转动棉拭子，连续采样1 14 4个规格板面个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子装有积，剪去手接触部分，将棉拭子装有10ml10ml采样采样液的试管中

6、，门把手等小型物体则采用棉拭子液的试管中，门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。直接涂抹物体的方法采样。 细菌菌落总数检查：将含有棉拭子的采样液细菌菌落总数检查：将含有棉拭子的采样液充分混匀并进行适当稀释后，取充分混匀并进行适当稀释后，取1ml1ml采样液接采样液接种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后倒入营养琼脂倒入营养琼脂151520ml20ml，待凝固后将平板放置，待凝固后将平板放置于于3737培养箱培养，进行数落计数。培养箱培养，进行数落计数。 结果计算： 平皿上菌落的平均数平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数采样液稀释倍数 物体表面细菌

7、菌落总数（物体表面细菌菌落总数（cfu/mcfu/m2 2）= = 采样面积（采样面积（cmcm2 2） 采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 采样面积：采双手，一只手涂擦面积约30cm2，采样面积按平方厘米计算。 采样方法：被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在双手曲面从指根到指端来回涂擦各两次，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。 细菌菌落总数检查：将含有棉拭子的采样液充分混匀并进行适当稀释后，取1ml采样液接种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后倒入营养琼脂1520ml，待凝固后将平板放置于37培养箱培养，进行数落计

8、数。 结果计算： 平皿上菌落的平均数平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数采样液稀释倍数 手表面细菌菌落总数（手表面细菌菌落总数（cfu/mcfu/m2 2）= = 30302 2 1 1、检验依据、检验依据：GB15982-1995医院消毒卫生标准 2 2、卫生标准、卫生标准：要求细菌菌落总数应100cfu/mL，同样不得检出致病菌。 此外，在卫生厅印发的监测方案中还提出使用中的消毒剂及灭菌剂应监测其有效成份含量，使其符合使用的标准。 采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液械保存液 采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取采样量及方法：在无菌

9、条件下，用无菌吸管吸取1mL1mL被检样液，加入被检样液，加入9mL9mL含中和剂的稀释液中。含中和剂的稀释液中。 根据所采的样液不同，应在采样液中加入相应的根据所采的样液不同，应在采样液中加入相应的中和剂，以中和被检样液的残效作用中和剂，以中和被检样液的残效作用 对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤 对于含氯、含碘消毒剂、过氧化物消毒，需在肉对于含氯、含碘消毒剂、过氧化物消毒，需在肉汤中加入汤中加入0.1%0.1%硫代硫酸钠硫代硫酸钠 对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%3%（W/VW/V）吐

10、温）吐温8080和和0.3%0.3%卵磷脂卵磷脂 对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%0.3%甘氨酸甘氨酸 对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入汤中加入3%3%（W/VW/V）吐温）吐温8080 细菌菌落总数检查：将采样液充分混匀并进行适细菌菌落总数检查：将采样液充分混匀并进行适当稀释后，取当稀释后，取1mL1mL采样液接种于无菌平皿中，平行采样液接种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后倒入营养琼脂接种两个平皿，然后倒入营养琼脂151520ml20ml，待凝，待凝固后将平板放置于固后将平板放置于3737培养

11、箱培养，进行数落计培养箱培养，进行数落计数。数。 结果分析：平板上有菌生长，证明被检样液有残结果分析：平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在存活菌，若每个平板菌落数在1010个以下，仍可用个以下，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌），若第每个平板于消毒处理（但不能用于灭菌），若第每个平板菌落数超过菌落数超过1010个，说明每毫升被检样液含菌量已个，说明每毫升被检样液含菌量已超过超过100100个，即不宜使用。个，即不宜使用。 有效成份含量：有效成份含量： 依据卫生部依据卫生部消毒技术规范消毒技术规范20022002年版中的年版中的2.22.2消消毒产品理化检验技术规范进行毒产

12、品理化检验技术规范进行 有效氯含量测定有效氯含量测定 2.2.1.2.12.2.1.2.1 有效碘含量测定有效碘含量测定 2.2.1.2.22.2.1.2.2 过氧乙酸含量测定过氧乙酸含量测定 2.2.1.2.32.2.1.2.3 戊二醛含量测定戊二醛含量测定 2.2.1.2.92.2.1.2.9 需要指出的是，使用中消毒剂及无菌器械保存液需要指出的是，使用中消毒剂及无菌器械保存液的有效成份含量均较低，因此，滴定液的浓度要的有效成份含量均较低，因此，滴定液的浓度要适当降低。适当降低。 主要依据：内镜清洗消毒技术操作规范（主要依据：内镜清洗消毒技术操作规范（20042004年年版）第五章版）第五

13、章 卫生标准：卫生标准： 消毒后的内镜合格标准为：细菌总数消毒后的内镜合格标准为：细菌总数20cfu/20cfu/件，件，不能检出致病菌；不能检出致病菌； 灭菌后的内镜合格标准为：无菌检测合格。灭菌后的内镜合格标准为：无菌检测合格。 采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取菌注射器抽取10ml10ml含相应中和剂的缓冲液，从待含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用检内镜活检口注入，用15ml15ml无菌试管从活检出口无菌试管从活检出口收集，及时送检，收集，及时送检，2 2小时内检测。小时内检测。 菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡

14、，取菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml0.5ml， 加加 入入2 2只直径只直径90mm90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45454848营养琼脂营养琼脂15ml15ml18ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂，边倾注边摇匀，待琼脂 凝固，于凝固，于3535培养培养4848小时后计数。小时后计数。 结果判断：菌落数结果判断：菌落数/ /镜镜=2=2个平皿菌落数平均值个平皿菌落数平均值2020。 致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.2ml0.2ml分别分别接种接种90mm90mm血平皿、中国

15、兰平皿和血平皿、中国兰平皿和SSSS平皿，均匀涂布，平皿，均匀涂布，3535培养培养4848小时，观察有无致病菌生长。小时，观察有无致病菌生长。 需要检测的致病菌主要有： 溶血链球菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 依据：依据：GB/T 4789.11-2003GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验溶血性链球菌检验检检 样样葡萄糖肉汤葡萄糖肉汤血平板血平板血平板（分纯培养）血平板（分纯培养）链激酶试验链激酶试验杆菌肽敏感试验杆菌肽敏感试验观察溶血观察溶血革兰氏染色革兰氏染色报报 告告361 24h 36136124h24h 依据：依据

16、：GB7918.4-87GB7918.4-87 化妆品微生物标准检验方法化妆品微生物标准检验方法 绿绿 脓脓 杆杆 菌菌增增 菌菌 培培 养养分分 离离 培培 养养染染 色色 镜镜 检检氧化酶试验氧化酶试验绿脓菌素试验绿脓菌素试验硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验明胶液化试验明胶液化试验4242生长试验生长试验 报报 告告3737培养培养181824h24h 3737培养培养181824h24h 依据：GB7918.5-87 化妆品微生物标准检验方法化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌增增 菌菌分分 离离染色镜检染色镜检甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试

17、验报报 告告37 1837 1824h24h 37 2437 2448h48h 沙门氏菌：按国标要求，对于母婴同室、沙门氏菌：按国标要求，对于母婴同室、早产儿室、新生儿及儿科病房物表面和医早产儿室、新生儿及儿科病房物表面和医护人员手上，不得检出沙门氏菌。检验方护人员手上，不得检出沙门氏菌。检验方法主要参照法主要参照GB4789.4-2010 GB4789.4-2010 食品安全国家食品安全国家标准标准 食品微生物学检验食品微生物学检验 沙门氏菌检验沙门氏菌检验 1 1、检验依据：、检验依据： WS/T310.3-2009WS/T310.3-2009医院消毒供应中心医院消毒供应中心 第第3 3部

18、分部分 清清洗消毒及灭菌效果监测标准洗消毒及灭菌效果监测标准 GB15981-1995GB15981-1995消毒与灭菌效果评价方法与标消毒与灭菌效果评价方法与标准准、消毒技术规范、消毒技术规范 标准中要求，对灭菌质量采用物理监测法、化学标准中要求，对灭菌质量采用物理监测法、化学监测法和生物监测法进行。监测法和生物监测法进行。 压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌 物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力、时间等灭菌参数。温度波动范围的温度、压力、时间等灭菌参数。温度波动范围在在33以内，时间满足最低灭菌时间的要求，同以内，时间满足最低灭菌时间的要求

19、，同时应记录所有临界点的时间、温度与压力值，结时应记录所有临界点的时间、温度与压力值，结果应符合灭菌的要求。果应符合灭菌的要求。 压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌 化学监测法：应进行包外、包内化学指示物监测。化学监测法：应进行包外、包内化学指示物监测。具体要求为灭菌包包外应有化学指示物、高度危具体要求为灭菌包包外应有化学指示物、高度危险性物品包内应放置包内化学指示物，置于最难险性物品包内应放置包内化学指示物，置于最难灭菌部位。如果透过包装材料可直接观察包内化灭菌部位。如果透过包装材料可直接观察包内化学指示物的颜色变化，则不必放置包外化学指示学指示物的颜色变化，则不必放置包外化学指示物。通过观察化学指示

20、物颜色的变化，判定是否物。通过观察化学指示物颜色的变化，判定是否达到灭菌合格要求；采用快速压力蒸汽灭菌程序达到灭菌合格要求；采用快速压力蒸汽灭菌程序时，应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物时，应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物品旁边进行化学监测。品旁边进行化学监测。 压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌 生物监测法：应每周监测一次；紧急情况下，可生物监测法：应每周监测一次；紧急情况下，可在生物在生物PCDPCD中加用中加用5 5类化学指示物；新的包装材料类化学指示物；新的包装材料和方法进行灭菌时应进行生物监测和方法进行灭菌时应进行生物监测 B-DB-D试验：预真空压力蒸汽灭菌器应每日开始灭菌试验：预

21、真空压力蒸汽灭菌器应每日开始灭菌运行前进行运行前进行B-DB-D测试，测试合格后，方可使用。测试，测试合格后，方可使用。 干热灭菌干热灭菌 物理监测法：每灭菌批次应进行物理监测。将多物理监测法：每灭菌批次应进行物理监测。将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内、点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内、中、外各点，关好柜门，引出导线，由记录仪中中、外各点，关好柜门，引出导线，由记录仪中观察温度上升与持续时间。温度在设定时间内均观察温度上升与持续时间。温度在设定时间内均达到预置温度，则物理监测合格。达到预置温度，则物理监测合格。 干热灭菌干热灭菌 化学监测法：每一灭菌包外应使用包外化学指

22、示化学监测法：每一灭菌包外应使用包外化学指示物，每一灭菌包内应使用包内化学指示物，并置物，每一灭菌包内应使用包内化学指示物，并置于最难灭菌的部位。对于未打包的物品，应使用于最难灭菌的部位。对于未打包的物品，应使用一个或多个包内化学指示物，放在待灭菌物品附一个或多个包内化学指示物，放在待灭菌物品附近进行监测。经过一个灭菌周期后取出，据其颜近进行监测。经过一个灭菌周期后取出，据其颜色的改变判断是否达到灭菌要求。色的改变判断是否达到灭菌要求。 生物监测法：应每周监测一次生物监测法：应每周监测一次 环氧乙烷灭菌的监测环氧乙烷灭菌的监测 物理监测法：每次应连续监测并记录灭菌时的温物理监测法：每次应连续监

23、测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。灭菌参数符合灭菌度、压力和时间等灭菌参数。灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求。器的使用说明或操作手册的要求。 化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化判定是否达到灭菌合格要求。判定是否达到灭菌合格要求。 生物监测法：每灭菌批次应进行生物监测。生物监测法：每灭菌批次应进行生物监测。 过氧化氢等离子灭菌、低温甲醛蒸汽灭菌监测过氧化氢等离

24、子灭菌、低温甲醛蒸汽灭菌监测 物理监测法：每次灭菌应连续监测并详细记录灭物理监测法：每次灭菌应连续监测并详细记录灭菌过各的参数，灭菌参数符合灭菌器的使用说明菌过各的参数，灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求。或操作手册的要求。 化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定是否达到灭菌合格要求。判定是否达到灭菌合格要求。 生物监测法：过氧化氢等离子灭菌应每天至少进生物监测法：

25、过氧化氢等离子灭菌应每天至少进行一次生物监测；低温甲醛蒸汽灭菌应每周监测行一次生物监测；低温甲醛蒸汽灭菌应每周监测一次。一次。 在进行医院监测时，对于各种灭菌器的灭菌效果在进行医院监测时，对于各种灭菌器的灭菌效果监测应采用生物监测的方法。按监测应采用生物监测的方法。按消毒技术规范消毒技术规范的规定，将指示菌株制成标准生物测试包或生物的规定，将指示菌株制成标准生物测试包或生物PCDPCD，或使用一次性标准生物测试包，对灭菌器内，或使用一次性标准生物测试包，对灭菌器内的灭菌质量进行生物监测。标准生物监测包置于的灭菌质量进行生物监测。标准生物监测包置于灭菌器排气口的上方或厂家建议的灭菌器内最难灭菌器

26、排气口的上方或厂家建议的灭菌器内最难灭菌的部位，并设阳性对照及阴性对照。灭菌的部位，并设阳性对照及阴性对照。 指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽胞（指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC 7953ATCC 7953或或SSIK SSIK 3131）菌片含量为）菌片含量为5.05.010105 5cfu/cfu/片片5.05.010106 6cfu/cfu/片。片。（D121D121值值1.3min1.3min1.9min1.9min，KTKT值为值为19min19min，STST值值3.9min3.9min）。）。 培养基：溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基。培养基：溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基。 标准试验包：

27、由标准试验包：由1616条条41cm41cm66cm66cm的全棉手术巾制的全棉手术巾制成。将每条手术巾的长边折成成。将每条手术巾的长边折成3 3层，短边折成层，短边折成2 2层，层，然后叠放，制成然后叠放，制成23cm23cm23cm23cm15cm15cm大小的测试包。大小的测试包。 检测方法：将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装检测方法：将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。经入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准包中一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准包中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养的指示菌片，投入

28、溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经基中，经565611培养培养7 7天（自含式生物指示物天（自含式生物指示物按产品说明书执行）观察培养结果。按产品说明书执行）观察培养结果。 结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格；阳养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格；阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，判定为灭菌不合格；同时应进一步组培养阳性，判定为灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染菌鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染菌所致。

29、所致。 指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽胞（指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC 9372ATCC 9372），菌片），菌片含量为含量为5.05.010105 5cfu/cfu/片片5.05.010106 6cfu/cfu/片。（片。（D160D160值值1.3min1.3min1.9min1.9min，KTKT值为值为19min19min，STST值值3.9min3.9min）。）。 检测方法：将枯草杆菌黑色变种芽胞菌片分别装入灭菌检测方法：将枯草杆菌黑色变种芽胞菌片分别装入灭菌中试管内（中试管内（1 1片片/ /管）。灭菌器与每层门把手对角线内、管）。灭菌器与每层门把手对角线内、外角处放置

30、外角处放置2 2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至8080时，加盖试时，加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通营养肉汤培管帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养培养基养培养基(5ml/(5ml/管管) )，363611培养培养48h48h，观察初步结果，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第无菌生长管继续培养至第7 7日。日。 结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清，养阴性，若每个指示菌

31、片接种的肉汤管均澄清，判定为灭菌合格；阳性对照组培养阳性，阴性对判定为灭菌合格；阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，而指示菌片之一接种的肉汤管混照组培养阴性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合格；对难以判定的肉汤管，取浊，判为不合格；对难以判定的肉汤管，取0.1ml0.1ml接种于营养琼脂平板，用灭菌接种于营养琼脂平板，用灭菌L L棒或接种环涂匀，棒或接种环涂匀，置置363611培养培养48h48h，观察菌落形态，并做涂片，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为生长，判为灭菌

32、不合格；若无指示菌生长，判为灭菌合格。灭菌合格。 指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC 9372），菌片含量为5.0105cfu/片5.0106cfu/片。（在环氧乙烷剂量为600mg/L300mg/L，作用温度为542，相对湿度为60%10%条件下，其杀灭90%微生物的D值为2.6min5.8min，KT值为58min，ST值7.8min）。 常规生物测试包的制备：取一个常规生物测试包的制备：取一个20ml20ml无菌注射器，无菌注射器，去掉针头，拔出针栓，将生物指示剂放入针筒内，去掉针头，拔出针栓，将生物指示剂放入针筒内，带孔的塑料帽应朝向针头处，再将注射器的针栓带孔的塑料帽应朝向针头

33、处，再将注射器的针栓插回针筒，不要踫到生物指示物，之后用一条全插回针筒，不要踫到生物指示物，之后用一条全棉小毛巾两层包裹，置于纸塑包装袋中，封装。棉小毛巾两层包裹，置于纸塑包装袋中，封装。 检测方法：常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部位，即整个装载灭菌包的中心部位。灭菌周期完成后，应立即将生物指示物从被灭菌物品中取出，接种于含有复方中和剂的0.5%的葡萄糖肉汤培养基中，361培养7天。 结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格；阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，判定为灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染

34、菌所致。 主要依据：主要依据： GB18466-2005GB18466-2005医疗机构水污染排放标准医疗机构水污染排放标准 2 2、卫生标准要求：、卫生标准要求： 标准中规定，医疗机构门诊、病房、手术室、各标准中规定，医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机间等处排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医疗构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医疗机构污水。标准规定了污水中多项污染物排放限机构污水。标准规定了污水中多项污染物排放限值，我们主要监

35、测的指标是：粪大肠菌群及总余值，我们主要监测的指标是：粪大肠菌群及总余氯；其合格标准如下：氯；其合格标准如下： 2 2、卫生标准要求：、卫生标准要求： 对于传染病、结核病医疗机构：对于传染病、结核病医疗机构： 粪大肠菌群数粪大肠菌群数100 MPN/L ；总余氯；总余氯0.5 mg/L 2.2对于综合医疗机构和其他医疗机构：对于综合医疗机构和其他医疗机构： 粪大肠菌群数粪大肠菌群数500 MPN/L ；总余氯；总余氯0.5mg/L 采样方法采样方法 用采水器或其他灭菌容器采取污水样至少用采水器或其他灭菌容器采取污水样至少200mL200mL，放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的污水，需加放入灭菌瓶

36、内，如果是经加氯处理的污水，需加1.51.5硫代硫酸钠溶液中和余氯。硫代硫酸钠溶液中和余氯。 另外应取一瓶另外应取一瓶不加中和剂的污水，用于总余氯的检测。不加中和剂的污水，用于总余氯的检测。 粪大肠菌群的检验程序：粪大肠菌群的检验程序： 样品处理：确定样品的量，粪大肠菌群数量相对样品处理：确定样品的量，粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为较少的接种量一般为1010、1 1、0.1ml0.1ml；数量较多的；数量较多的接种量为接种量为1 1、0.10.1、0.01ml0.01ml或或0.10.1、0.010.01、0.001ml0.001ml等。接种量小于等。接种量小于1ml1ml时，水样应制成

37、稀释样品后供时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。发酵试验使用。 发酵试验：将样品接种于乳糖胆盐培养液的试管发酵试验：将样品接种于乳糖胆盐培养液的试管中（内有小倒管），中（内有小倒管），4444培养培养24h24h。污水取三个接。污水取三个接种量，每个接种量的样品分别接种于种量，每个接种量的样品分别接种于5 5个试管内，个试管内，共共1515支试管。接种方法如下：支试管。接种方法如下： 接种量为接种量为10ml10ml时，吸取时，吸取10ml10ml样品接种于样品接种于5ml5ml三倍浓三倍浓度乳糖胆盐培养液中；度乳糖胆盐培养液中； 若接种量为若接种量为1ml1ml时，吸取时，吸取1ml1m

38、l样品接种于样品接种于10ml10ml普通普通浓度乳糖胆盐培养液中；浓度乳糖胆盐培养液中； 若接种量少于若接种量少于1ml1ml时，吸取时，吸取1ml1ml稀释样品接种于稀释样品接种于10ml10ml普通浓度乳糖胆盐培养液中。普通浓度乳糖胆盐培养液中。 平板分离：将产酸产气发酵管液接种于平板分离：将产酸产气发酵管液接种于EMBEMB（伊红（伊红亚甲基蓝培养基）。产酸产气时培养液变色、小亚甲基蓝培养基）。产酸产气时培养液变色、小倒管内出现气泡。倒管内出现气泡。 鉴定：挑选可疑菌落，进行革兰氏染色和镜检。鉴定：挑选可疑菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：深紫黑色，有金属光泽；紫黑色，可疑菌落有

39、：深紫黑色，有金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心色较深的不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心色较深的菌落。菌落。 若涂片镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，则接种含若涂片镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，则接种含5ml5ml乳糖蛋白胨培养液和倒管的试管内，乳糖蛋白胨培养液和倒管的试管内，4444培养培养24h24h。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。 计数：根据产酸产气的阳性管数查计数：根据产酸产气的阳性管数查MPNMPN表。可得表。可得100ml100ml污水中粪大肠菌群污水中粪大肠菌群MPNMPN值。值。 总余氯的检测：总余氯的检测： 多采用多采用3 3，3

40、3，5 5，5-5-四甲基联苯胺比色法进行。四甲基联苯胺比色法进行。 其原理主要是：在其原理主要是：在pHpH值小于值小于2 2的酸性溶液中，余氯的酸性溶液中，余氯与与3 3，33，5 5，5-5-四甲基联苯胺反应，生成黄色四甲基联苯胺反应，生成黄色的醌式化合物，用目视比色法定量。可用重铬酸的醌式化合物，用目视比色法定量。可用重铬酸钾溶液配制永久性余氯标准比色列。（具体配制钾溶液配制永久性余氯标准比色列。（具体配制方法见方法见GB/T5750.11-2006 GB/T5750.11-2006 生活饮用水标准检验方生活饮用水标准检验方法法 消毒剂指标）消毒剂指标） 总余氯的检测：总余氯的检测： 在在50mL50mL具塞比色管中，先加入具塞比色管中，先加入2.5mL2.5mL四甲基联苯胺，四甲基联苯胺，加入澄清水样至加入澄清水样至50mL50mL刻度，混合后立即比色，所刻度，混合后立即比色，所得结果为游离余氯；放置得结果为游离余氯；放置10min10min，比色所得结果为，比色所得结果为总余氯，总余氯减去游离余氯即为化合余氯。总余氯，总余氯减去游离余氯即为化合余氯。 目前，多采用余氯、总氯、结合氯测量仪，使用目前，多采用余氯、总氯、结合氯测量仪，使用更方便、简单。更方便、简单。