第5讲PCR技术基本原理及应用(研究生课程)课件.ppt

1、5 Primer 15 Primer 2Cycle 2Cycle 15 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 Cycle 35 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 PCR扩增的扩增的平台效应平台效应 A：无外显子8,12,17,19对应条带,说明病人外显子819缺失B：病人A中未扩增外显子带的强度为C的一半,提示为区域缺失携带者C：正常人DMD基因外显子的一般扩增形式DMD基因外显子缺失的检测基因外显子缺失的检测cDNA 实时荧光定量实时荧光定量PCR仪仪梯度梯度PCR仪仪普通普通PCR仪仪 差异显示差异显示RT-PCR(Differential disp

2、lay RT-PCR)RT-PCR(Differential display RT-PCR)5 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3 Poly(A) RNA5 T12MN 3锚定引物锚定引物逆转录逆转录5 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 33M N TTTTTTTTTTTT 5变性变性5 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 33M N TTTTTTTTTTTT 5退火退火5 T12MN 3锚定引物锚定引物寡核苷酸随机引物寡核苷酸随机引物3M N TTTTTTTTTTTT 5延长延长dNTP、Taq聚合酶聚合酶3M N TTTTTTTTTTTT 55MNAAAAAAAAAAA 3变性、退火、延伸变性、退火、延伸电泳电泳显示显示T12MN(M为为A、G、C，N为为A、T、G、C) 启动启动cDNA第一链合成第一链合成不同长度的不同长度的PCR产物产物回收差异条带，再扩增，回收差异条带，再扩增，克隆测序，同源比对克隆测序，同源比对随机结合到随机结合到cDNA链上链上+55Bam H IBam H IBam H IBam H IAPCR-SSPPCR；电泳检测；电泳检测（VNTR：数目可变的串联重复序列：数目可变的串联重复序列 ）DNA fragmentscompared afterelectrophoresisCrime sceneSuspect 1Suspect 2PCR