02PCR实验室基本设置要求张琼课件.ppt

1、主要内容实验室生物安全防护分级实验室生物安全防护分级 一级最低，四级最高一级最低，四级最高 典型的一级生物安全典型的一级生物安全水平实验室水平实验室（图片由（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）提供）典型的二级生物安全水典型的二级生物安全水平实验室（图片由平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）。提供）。在生物安全柜中进行可在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程能发生气溶胶的操作程序。门保持关闭并贴上序。门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通被污染的废弃物同普通废弃物隔开。废弃物隔开。典型的三

2、级生物安全水平实验室（图片由典型的三级生物安全水平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）。提供）。实验室与公共通道分开并通过缓冲间（双门入口或二级生物安全水平的实验室与公共通道分开并通过缓冲间（双门入口或二级生物安全水平的基础实验室）或气锁室进入。处理废弃物前，在实验室内先进行高压灭基础实验室）或气锁室进入。处理废弃物前，在实验室内先进行高压灭菌以清除污染。应有非手控的水槽。形成向内气流而且涉及感染性材料菌以清除污染。应有非手控的水槽。形成向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在生物安全柜中进行。的全部工作应在生物安全柜中进行。四级生物安全水平实验室四级生物安

3、全水平实验室 在加拿大仅有一个4级实验室(Canadian Centre for Human and Animal Health in Winnipeg, Man.) 设计要求非常苛刻，要把工作人员完全与感染物质隔离开3.生物安全柜生物安全柜（biosafety cabinet）是处理危险性微生物时所用的箱是处理危险性微生物时所用的箱型空气净化安全装置型空气净化安全装置 I级生物安全柜级生物安全柜（class I biosafety cabinet） 至少装置一个高效空气过滤器对排气进至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，外部空气由操作窗行净化，外部空气由操作窗吸进吸进，而不，而不可能由操

4、作窗口可能由操作窗口逸出；逸出；100%由密接排气由密接排气导管排到室外导管排到室外 （类似于通风厨类似于通风厨） 工作状态时保证工作状态时保证工作人员工作人员不受侵害，但不受侵害，但不保证不保证实验对象实验对象不受污染不受污染。 现已很少使用现已很少使用IIIIII 至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由

5、操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出吸进，而不可能由操作窗口逸出 工作状态下遵守操作规程时既保证工作状态下遵守操作规程时既保证不受不受侵害，又保证侵害，又保证及及不受污染不受污染级级生物安全柜生物安全柜（class biosafety cabinet）IIIIII 级生物安全柜级生物安全柜（class biosafety cabinet）IIIIII隔离器隔离器美国国美国国立卫生立卫生研究所研究所美国疾美国疾病控制病控制中心中心病病 源源操操 作作一级屏障一级屏障二级屏障二级屏障P1P1BSL-1不会经常引发健康成人不会经常引发健康成人疾病疾病标准的微生物操作标准的微生物操作不要求不要求开放实验

6、台、洗开放实验台、洗手池手池P2P2BSL-2人类病源菌，因皮肤伤人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而口、吸入、黏膜曝露而发生危险发生危险BSLBSL1 1操作外加：操作外加：1 1、限制进入限制进入2 2、有生物、有生物危险警告标志危险警告标志3 3、“锐器锐器”安全措施安全措施4 4、生物安全手册，其中生物安全手册，其中规定废物消毒和医疗规定废物消毒和医疗观察观察1 1级、级、2 2级生物级生物安全柜实验安全柜实验服、手套、若服、手套、若需要则采取面需要则采取面部保护措施部保护措施 BSL-1BSL-1外加：高外加：高压灭菌锅压灭菌锅P3P3BSL-3内源性和外源性病源，内源性和外源性

7、病源，可通过气溶胶传播，能可通过气溶胶传播，能导致严重后果或生命危导致严重后果或生命危险险 BSL-3 BSL-2BSL-3 BSL-2操作外操作外加：加：1 1、控制进入、控制进入2 2、所有废物消毒所有废物消毒3 3、洗、洗涤前，实验服消毒涤前，实验服消毒4 4、有基础血清有基础血清1 1级、级、2 2级生物级生物安全柜保护性安全柜保护性实验服、手套、实验服、手套、若需要则采取若需要则采取呼吸保护措施呼吸保护措施BSL-2BSL-2外加：外加：1 1、和进入走廊隔开和进入走廊隔开2 2、双门进入，、双门进入，门自动关闭门自动关闭3 3、排出的空气不循排出的空气不循环环4 4、实验室内、实验

8、室内负压负压P4P4BSL-4对生命有高度危险的危对生命有高度危险的危险性病源或外源性病源：险性病源或外源性病源：致命、通过气溶胶而致致命、通过气溶胶而致实验室感染：或未知传实验室感染：或未知传播风险的有关病源播风险的有关病源BSL3BSL3操作外加：操作外加：1 1、进入前换衣服进入前换衣服2 2、出、出实验室前淋浴实验室前淋浴3 3、带、带出设施的所有材料消出设施的所有材料消毒毒3 3级生物安全柜级生物安全柜或或1 1级、级、2 2级生级生物安全柜加全物安全柜加全身的、供应空身的、供应空气的正压防护气的正压防护服服BSL3BSL3外加：外加：1 1、单独建筑或隔离单独建筑或隔离区域区域2

9、2、有供气、有供气系统、排气系统、系统、排气系统、真空系统、消毒真空系统、消毒系统系统3 3、其他有、其他有关要关要生物安全二级实验室目的保护操作人员保护环境保护样品PCR实验室平面设计在入口处设缓冲间缓冲间比专用走廊更有意义。有问题！ 临床临床PCRPCR实验室工作流程实验室工作流程试剂储存和准备试剂储存和准备标本制备区标本制备区扩增区扩增区产物分析区产物分析区PCRPCR实验室各区的设备配置表实验室各区的设备配置表 分区分区器材选配器材选配PCR试剂区PCR制备区PCR扩增区PCR分析区PCR仪器仪器生物安全柜生物安全柜加热模块、离心机加热模块、离心机产物分析仪产物分析仪冰箱、混匀器冰箱、混匀器移液器移液器可移动紫外车可移动紫外车办公用品、耗材办公用品、耗材建筑结构阴角 均采用圆弧线条密封洗手池谢谢！谢谢！