体内药物分析课件.ppt

1、样品制备：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集（液液萃取、固相萃取等）；样品测定：光谱分析法、色谱分析法、免疫分析法、生物学方法方法验证：特异性、标准曲线和定量范围、定量下限、精密度与准确度、稳定性、提取回收率体内药物分析：体内药物分析：（四）组织：（四）组织：（五）头发：（五）头发：（葡萄糖醛酸酶）分析方法与样品处理步骤的选择第二节、体内样品的的前处理溶剂选择合适的溶剂是成功的主要条件 了解药物与溶剂的化学结构及其性质 对药物未电离分子可溶，对电离形式分子不溶 沸点低、易挥发，毒性小与水不相混溶 不影响紫外检测 具有较高的化学稳定性和惰性 不易乳化23化合物名称化合物名称极性极性粘度

2、粘度沸点沸点吸收波长吸收波长HexaneHexane( (正己正己烷烷) )0.060.060.330.336969210210Cyclohexane(Cyclohexane(环己烷环己烷) )0.10.11 18181210210Toluene(Toluene(甲苯甲苯) )2.42.40.590.59111111285285Ethyl ether(Ethyl ether(乙醚乙醚) )2.92.90.230.233535220220Methylene chloride(Methylene chloride(二氯甲烷二氯甲烷) ) 3.43.40.440.444040245245Ethyl

3、acetateEthyl acetate（乙酸乙酯）（乙酸乙酯）4.30 4.30 0.450.457777260260Chloroform(Chloroform(氯仿氯仿) ) 4.44.40.570.576161245245生物样品宜在碱性或近中性提取，生物基质中内源性物质多为酸性，在碱性下不易被萃取出来。空白血清在pH2、pH7和pH13三种缓冲液中用乙醚提取，提取液HPLC(220nm)测定，在pH13下提取液中杂质峰最少。28固相萃取的模式及原理固相萃取的模式及原理反相固相萃取正相固相萃取离子交换固相萃取 阴离子交换 阳离子交换第一步：用甲醇润湿小柱，活化填料 第二步：用水或适当的缓

4、冲液冲洗小柱 除去大部分甲醇 第三步：加样，使样品经过小柱，弃去废液 第四步：用水或适当的缓冲液冲洗小柱，去除内源性杂质 第五步：选择适当的洗脱溶剂洗脱被分析物，收集洗脱液，挥干溶剂，备用或直接进行在线分析 血浆样品可直接上柱，样品量0.12ml，流速12ml/min31自动化固相萃取-柱切换高效液相色谱法 柱前衍生， 柱后衍生气相色谱衍生化方法：硅烷化、酰化、烷基化、不对称衍生化液相色谱衍生化方法：紫外衍生化、荧光衍生化、电化学衍生化、手性衍生化 分析方法分析方法检测限度检测限度/10-8g/ml特异性特异性/ /分离能力分离能力紫外分光光度法（紫外分光光度法（UV）100荧光分光光度法（荧

5、光分光光度法（Fluor）0.1+ +原子吸收光度法（原子吸收光度法（AA）0.1+ 气相色谱法（气相色谱法（GC） 氢火焰离子化检测器（氢火焰离子化检测器（FID）110+ 氮磷检测器（氮磷检测器（N-PD）0.10.01+ 电子捕获检测器（电子捕获检测器（ECD）0.01+ 质谱检测（质谱检测（MS）0.001+高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC） 紫外检测器（紫外检测器（UV）10+ 荧光检测器（荧光检测器（Fluor）0.1+ 电化学检测器（电化学检测器（ECD）0.010.001+ 质谱检测质谱检测 +免疫法（免疫法（RIA） 酶免疫法（酶免疫法（EIA）0.001+ 0.001+0.001体外药物分析体外药物分析标准曲线的最高标准曲线的最高Cmax与最低浓度与最低浓度Cmax/20的区的区间间不包括零点以待测药物的检测响应(如色谱峰面积或峰高) 或与内标物质的检测响应的比值(内标法)(因变量， y )对模拟血药浓度 (自变量，x)求得回归方程( yabx )及其相关系数，( ) 0.99(色谱法)或0.98(生物学方法)要求最低浓度点的偏差在20%以内、其余各浓度点的偏差在15%以内。（五）、样品稳定性萃取回收率与相对回收率的意义不同 萃取回收率考察生物样品预处理过程造成的药物的损失程度）（%100STAAR