1糖的呈色反应和定性鉴定-课件.ppt

1、欢迎同学们上生物化学实验任课教师： 高志勇 杨明园 陈颖卓 生科院2003室 实验课的目的实验课的目的n加深理论理解n培养实验技能及素质n培养实验设计及结果分析能力n培养解决科学及实践问题的能力 实验素质（10%）考考 核核 方方 式式n实验报告情况（50%） 实验操作情况（20%） 开放实验（10%） 理论考试（10%） 实验素质（10%） 预习情况 原始数据 实验结果 结果讨论不及格(60分)有下列情况者，实验项目成绩评为不及格：1不能完成基本的实验操作；2实验报告马虎、内容不全、无数据处理过程或数据处理过程不完整、实验无结论等；3抄袭实验报告；4未做实验，但模仿指导教师笔迹签字伪造原始数

2、据的;5. 无故缺席或者迟到30分钟以上者，不能补做，该次实验成绩按0分记。实验报告的书写（1）实验目的（2）实验原理（3）药品试剂（4）实验方法和步骤（5）实验结果：包括原始数据的记录和结果计算等。原始数据记录在实验报告空格处，每次实验的原始数据均需要老师签字。（6）讨论其中的实验目的和原理部分作为预习报告。有关网址和参考书目有关网址和参考书目 http:/ http:/www.kumc.edu/biochemistry/bioc800/biocindx.htm http:/cti.itc.virginia.edu/cmg/ http:/www.bio- 赵永芳. 生物化学技术原理及应用.北

3、京. 科学出版社.2002 沈同 王镜岩.生物化学.高等教育出版社.2002实 验 一 糖的呈色反应和定性鉴定 实验目的及要求 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法 学习鉴定还原糖的方法及其原理 加强对糖的结构和性质的理解糖（saccharide） Cn (H2O)n 多羟基醛或多羟基酮以及它们的聚合物或衍生物单糖 (monosaccharide)：不能被水解成更小分子的糖寡糖 (oligosaccharide)：2-10个单糖脱水后以糖苷键相连而成多糖 (polysaccharide)：由糖苷键结合的糖链，超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物 葡萄糖 （Glucose）单糖全部都是

4、还原糖，分为丙糖、丁糖、戊糖、己糖、庚糖等 酮糖醛糖果糖（Fructose）CH2OHC=OCH2OHHCOH双糖麦芽糖（maltose）乳糖（lactose）蔗糖（sucrose）还原二糖还原二糖非还原糖D-葡萄糖部分D-葡萄糖部分D-葡萄糖部分D-半乳糖部分D-葡萄糖部分D-果糖部分多糖均多糖：淀粉、纤维素等杂多糖：透明质酸等非还原糖，难溶于水，不溶于有机溶剂，在酸性条件下水解可生成寡糖或单糖单糖双糖多糖葡萄糖（醛糖）果糖（酮糖）麦芽糖乳糖纤维二糖蔗糖淀粉纤维素还原糖非还原糖还原糖淀粉纤维素目的 鉴定是否存在糖类 测定糖类的含量 鉴定酮糖和醛糖 鉴定还原糖和非还原糖 鉴定单糖与还原二糖Mo

5、lish反应蒽酮反应Seliwanoff反应Fehling试验 Benedict试验Barfoed试验 实验葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、淀粉，及水1）Molish反应 （糖定性）OH2H2SO4浓羟甲基糠醛HOH2COCHOHOH2CCSO3HHO3SOHOOOHH2SO4浓糖糠醛紫红色复合物糖 + a-萘酚 紫红色复合物 （紫环反应）浓酸 各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸、草酸、甘油醛等均产生近似的颜色反应（假阳性） 果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色Molish 实验步骤1. 对试管做标号2. 每管1ml各待测糖溶液+ 100ml Molish试剂

6、 3. 倾斜试管，沿管壁小心加入沿管壁小心加入约 1ml 浓硫酸，切勿摇动切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化4. 比较各管的颜色并记录。2）蒽酮反应 （糖定量） 该蓝绿色复合物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范围内，颜色与糖量的多少成正比。1) 勿混入沉淀； 2) 不同糖类呈色深浅不同，故仅用于单一糖类的测定。糖 + 蒽酮 蓝绿色复合物浓酸1ml 蒽酮试剂 + 100ml 各待测糖蒽酮反应蒽酮反应酮糖 + 间苯二酚 鲜红色复合物浓酸1min醛糖 + 间苯二酚 淡黄色复合物浓酸10-20 min(果糖)（葡萄糖）3）Seliwanoff 反应 （鉴定酮糖）1ml Seli

7、wanoff 试剂 + 200ml 各待测糖 加热SeliwanoffSeliwanoff 反应反应 鉴定还原糖4）Fehling试验 5）Benedict试验还原糖能在碱性溶液中将二价铜离子还原成一价氧化亚铜（红色沉淀），而糖本身氧化成各种羟酸。非还原糖则无此特性。Fehling 试剂： 氢氧化钠 + 硫酸铜 + 酒石酸钾钠Benedict试剂：氢氧化钠 + 硫酸铜 + 柠檬酸钠醛糖比较容易被氧化，甚至能被弱氧化剂氧化成酸，如Fehling试剂和Benedict试剂；而酮糖一般不易被氧化，只有在长时间或强氧化剂的作用下才被分解。FehlingFehling反应反应BenedictBenedi

8、ct反应反应6）Barfoed试验 (区分单糖和还原二糖）在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。在弱酸性Barfoed试剂（巴弗德氏试剂）的作用下，煮沸时，单糖能将Cu2+还原成砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟，而还原二糖则需20分钟左右。当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应。BarfoedBarfoed反应反应Molish 蒽酮 Seliwanoff Fehling BenedictBarfoed试剂100 ml1 ml1 ml甲1ml乙1ml2 ml2ml糖1 ml100 ml 200 ml200 ml200 ml200 mlH2SO41ml混匀沸水浴沸水浴3min沸水浴5min沸水浴3-20min观察,记录冷却冷却冷却请勿将含浓酸的溶液倒入废液缸，应倒入水池中，流水冲洗*边加热边观察，区分不同糖类的反应时间实验内容1. 用上述六种糖鉴定实验检测已知六种糖,以水为阴性对照；其中蒽酮实验只需观察颜色深浅，不需测定OD；2. 用学到的知识和实验区分和鉴定五种未知糖溶液。