北京大学药学院化学定量分析在药物分析中的应用课件.ppt

1、化学定量分析化学定量分析在在药物分析药物分析中的应用中的应用药物分类药物分类 巴比妥类药物巴比妥类药物 芳酸及其酯类药物芳酸及其酯类药物 芳胺类药物芳胺类药物 含卤素有机药物含卤素有机药物 杂环类药物杂环类药物 生物碱类药物生物碱类药物 维生素类药物维生素类药物 甾体激素类药物甾体激素类药物 抗生素类药物抗生素类药物 结构结构 决定决定 性质性质 决定决定 含量测定含量测定 杂质检查杂质检查 鉴别鉴别一、巴比妥类药物的含量测定一、巴比妥类药物的含量测定 银量法银量法 溴量法溴量法 紫外分光光度法紫外分光光度法 酸碱滴定法酸碱滴定法结结 构构CONHCONHOCCR1 R21432651，3-二

2、酰亚胺巴比妥酸（环状丙二酰脲）（一）（一）银量法银量法巴比妥类药物巴比妥类药物 AgNO3 一银盐一银盐（可溶）（可溶） 继续滴加继续滴加AgNO3 稍过量稍过量Ag+ +药物药物 二银盐沉淀二银盐沉淀 溶液变浑浊溶液变浑浊（终点终点） 滴定溶剂滴定溶剂：甲醇：甲醇+3%无水碳酸钠无水碳酸钠 终点判断终点判断：电位法指示终点（银：电位法指示终点（银玻璃电极系统）玻璃电极系统） 药典应用药典应用：苯巴比妥及钠盐；异戊巴比妥及钠盐、制剂：苯巴比妥及钠盐；异戊巴比妥及钠盐、制剂（二）（二）溴量法溴量法 含有含有双键双键的巴比妥类药物的巴比妥类药物司可巴比妥钠司可巴比妥钠 加成反应加成反应 Br2 定

3、量反应定量反应滴定反应式滴定反应式 +Br2 （已知过量）（已知过量） （司可巴比妥钠）（司可巴比妥钠） Br2 + 2KI 2KBr + I2（剩余）（剩余） I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6CONHOCCCH2HNcoHCCH2CH3CH3CH2CH2CHCONHOCCCH2NcHCCH2CH3CH3CH2CH2CHONaBrBrCONHOCCCH2HNcoHCCH2CH3CH3CH2CH2CHCONHOCCCH2NcHCCH2CH3CH3CH2CH2CHONaBrBr（三）（三）酸碱滴定法酸碱滴定法 在在水水乙醇乙醇混合溶剂中的滴定法混合溶剂中的滴定法 在在胶束胶

4、束水溶液中进行的滴定法水溶液中进行的滴定法 非水滴定法非水滴定法1、在水、在水乙醇混合溶剂中的滴定法乙醇混合溶剂中的滴定法滴定介质滴定介质：醇溶液或含水的醇溶液（醇溶液或含水的醇溶液（巴比妥类药巴比妥类药物在水中溶解度小，生成的弱酸盐易于水解物在水中溶解度小，生成的弱酸盐易于水解，影响滴，影响滴定终点）定终点）滴定剂滴定剂：标准碱标准碱NaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L）指示剂指示剂：麝香草酚蓝麝香草酚蓝终点颜色终点颜色：淡蓝色：淡蓝色例：异戊巴比妥的含量测定例：异戊巴比妥的含量测定 + NaOH + H2O 终点较难判断终点较难判断95年版药典改年版药典改 为银量法，电位滴定法指示终点

5、为银量法，电位滴定法指示终点 CONHCONHOCCH5C2CH3CHCH2CH2CH3CONHNOCCCONaH5C2CH3CHCH2CH2CH3CONHCONHOCCH5C2CH3CHCH2CH2CH3CONHNOCCCONaH5C2CH3CHCH2CH2CH32、在胶束水溶液中进行的滴定法、在胶束水溶液中进行的滴定法滴定介质滴定介质：有机表面活性剂水溶液有机表面活性剂水溶液 （溴化十六烷基三甲基苄铵（溴化十六烷基三甲基苄铵 CTMA） （氯化四癸基二甲基苄铵（氯化四癸基二甲基苄铵 TDBA） 改变巴比妥类药物的离解平衡，改变巴比妥类药物的离解平衡，Ka 滴定剂、指示剂滴定剂、指示剂：同上

6、同上终点颜色终点颜色：同上，但变化明显同上，但变化明显3、非水滴定法、非水滴定法滴定介质滴定介质：二甲基甲酰胺；甲醇、氯仿、丙酮、无水二甲基甲酰胺；甲醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、苯、乙醇、苯、 吡啶、甲醇吡啶、甲醇苯（苯（15:85）、乙醇）、乙醇氯仿氯仿（1:10）滴定剂滴定剂：甲醇钾（钠）的甲醇甲醇钾（钠）的甲醇 or 乙醇溶液；氢氧化四乙醇溶液；氢氧化四丁基铵的氯丁基铵的氯 苯溶液苯溶液指示终点方式指示终点方式：麝香草酚蓝（指示剂）；麝香草酚蓝（指示剂）； 玻璃玻璃甘汞电极（电位法）甘汞电极（电位法）优点优点：Ka ，酸性增强，终点明显。，酸性增强，终点明显。二、芳酸及其酯类药物的含量二、

7、芳酸及其酯类药物的含量测定测定 酸碱滴定法酸碱滴定法 双相滴定法双相滴定法 亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法 高效液相色谱法高效液相色谱法结结 构构 结构特点：结构特点： 苯环苯环 + 羧基羧基 （or羧基所成的羧基所成的酯酯） 共性：共性： UV吸收吸收 酸性酸性 碱碱 盐盐 易水解易水解 特性：特性： 不同取代基不同取代基 分类：分类： 水杨酸类、苯甲酸类、其它芳酸及其酯类水杨酸类、苯甲酸类、其它芳酸及其酯类典型药物的结构典型药物的结构 水杨酸水杨酸 阿司匹林阿司匹林（salicylic acid） （aspirin） 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠（sodium aminosalicylate

8、） 双水杨酯双水杨酯 水杨酸类水杨酸类（salsalate） 贝诺酯贝诺酯（benorilate）COOHOHCOONaOHNH2COOHOHOCOCOOHOCOCH3COOOCOCH3NHCOCH3COOHOHCOOHOCOCH3COONaOHNH2COOHOHOCOCOOOCOCH3NHCOCH3 苯甲酸（benzoic acid） 苯甲酸类苯甲酸类 羟苯乙酯羟苯乙酯（ethylparaben） 丙磺舒丙磺舒（probenecid）COOHCOOCH2CH3HOCOOH(CH3CH2CH2)2NSO2COOHCOOCH2CH3HOCOOH(CH3CH2CH2)2NSO2（一）（一）酸碱滴定

9、法酸碱滴定法 直接滴定法直接滴定法 水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法 两步滴定法两步滴定法1、直接滴定法、直接滴定法游离羧基游离羧基 pKa 3.49 + NaOH + H2O 1 : 1COOHOCOCH3COONaOCOCH3COOHOCOCH3COONaOCOCH3中国药典阿司匹林的含量测定中国药典阿司匹林的含量测定 本品本品0.4g，精密称定，加，精密称定，加中性乙醇中性乙醇20ml溶解，加酚酞指示液溶解，加酚酞指示液3滴，用滴，用NaOH滴定滴定液（液（0.1mol/L）滴定，每）滴定，每1ml的的NaOH滴滴定液（定液（0.1mol/L）相当于）相当于18.02mg阿司匹阿司匹林林

10、(C9H8O4)。 问题：问题：1. 为什么称中性乙醇为什么称中性乙醇? 2. 加中性乙醇目的加中性乙醇目的? 3. 如何配制中性乙醇如何配制中性乙醇? 4. 为什么选酚酞作为指示剂为什么选酚酞作为指示剂? 5. 为什么滴定在不断搅拌下稍快进行为什么滴定在不断搅拌下稍快进行?2、水解后剩余滴定法、水解后剩余滴定法酯类药物的一般含量测定方法酯类药物的一般含量测定方法 水解 +2NaOH + CH3COONa 1 : 2 2NaOH（剩余剩余） + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 2 : 1 滴定度滴定度：1ml NaOH滴定液（0.5mol/L） 相当于0.25mmol Aspirin

11、1ml H2SO4滴定液（0.25mol/L） T=180.20.25 = 45.04mg COOHOCOCH3COONaOHCOOHOCOCH3COONaOHUSP采用本法测定采用本法测定Aspirin原料药的含量原料药的含量 (V0 V) C 45.04 103含量含量(%) = 100% 0.25 W V0 ：空白试验消耗：空白试验消耗H2SO4体积体积 V ：回滴消耗：回滴消耗H2SO4体积体积 C ：硫酸滴定液实际浓度：硫酸滴定液实际浓度 0.25 ：滴定度中规定的硫酸滴定液的浓度：滴定度中规定的硫酸滴定液的浓度 W ：称样量：称样量 3、两步滴定法、两步滴定法制剂测定制剂测定 阿司

12、匹林片剂阿司匹林片剂 少量枸橼酸或酒石酸作为稳定剂少量枸橼酸或酒石酸作为稳定剂 肠溶片肠溶片 制备制备,贮藏贮藏水解水解水杨酸水杨酸+醋酸醋酸 为了消除干扰为了消除干扰 先中和共存酸先中和共存酸 两步滴定法两步滴定法 碱性水解碱性水解 剩余滴定法测含量剩余滴定法测含量 氯贝丁酯的含量测定氯贝丁酯的含量测定（二）（二）双相滴定法双相滴定法应用应用：芳酸类药物的碱金属盐：芳酸类药物的碱金属盐易溶于水易溶于水 碱性碱性HCl滴定滴定为什么加有机相？为什么加有机相？ 目的目的:(1)母体药物酸性较强母体药物酸性较强,因而其共轭碱的碱因而其共轭碱的碱 性较弱性较弱, 使滴定终点的突越不明显。使滴定终点的

13、突越不明显。 (2)滴定过程中生成的酸一般不溶于水，滴定过程中生成的酸一般不溶于水， 不利于终点的正确判断。不利于终点的正确判断。双相滴定法双相滴定法 +HCl +NaCl 水相水相 有机相有机相（乙醚）（乙醚） COONaCOOHCOOHCOOHCOOHCOONa（三）（三）亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法芳伯氨基芳伯氨基对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠 NaNO2 ，重氮化反应（HCl存在） 中国药典中国药典： 亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法永停法指示终点永停法指示终点 测对氨基水杨酸钠及制剂含量测对氨基水杨酸钠及制剂含量三、芳香胺类药物含量测定三、芳香胺类药物含量测定 亚硝酸钠法亚硝酸钠法 芳伯氨

14、基芳伯氨基 紫外分光光度法紫外分光光度法 苯环苯环 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 叔胺氮叔胺氮弱碱性弱碱性结结 构构COR2OR1NH（一）亚硝酸钠滴定法 酸性条件 芳伯氨基芳伯氨基 水解后芳伯氨基水解后芳伯氨基 苯佐卡因苯佐卡因 醋氨苯砜醋氨苯砜 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 及注射液及注射液 及注射液及注射液1. 原理原理 ArNHCOR + H2O ArNH2 + RCOOH ArNH2 + NaNO2 + 2HCl ArN2+Cl- + NaCl + H2O H+2. 测定主要条件测定主要条件 （1）加入适量溴化钾加快反应速度加入适量溴化钾加快反应速度 （2）加过量盐酸加速反应加过量盐酸加

15、速反应 （3）滴定的温度滴定的温度 （4）滴定管尖端插入液面下滴定滴定管尖端插入液面下滴定加入适量溴化钾加快反应速度加入适量溴化钾加快反应速度 重氮化反应历程重氮化反应历程： NaNO2 + HCl HNO2 + NaCl HNO2 + HCl NOCl + H2OArN H2 慢 Ar N H N O 快 Ar N= N OH 快 Ar 碱性弱，反应速度快碱性弱，反应速度快（为什么？）（为什么？） -反应快慢的内因反应快慢的内因N2Cl+_NO+Cl_ HNO2 + HBr NOBr + H2O （1） HNO2 + HCl NOCl + H2O （2） K1 300 K2 （外因）（外因）

16、K2K1加过量盐酸加速反应加过量盐酸加速反应（外因外因） （1 1）重氮化反应速度加快）重氮化反应速度加快 （2 2）重氮盐在酸性溶液中稳定）重氮盐在酸性溶液中稳定 （3 3）防止生成偶氮氨基化合物）防止生成偶氮氨基化合物 ArAr-N-N2 2+ +ClCl + H + H2 2N-ArN-Ar Ar-N=N-NH-Ar Ar-N=N-NH-Ar + + HClHCl若酸度过大若酸度过大 阻碍芳伯氨基的游离阻碍芳伯氨基的游离 反应速度反应速度 HNOHNO2 2 分解分解 芳胺类药物与盐酸的芳胺类药物与盐酸的molmol比：比：1 1 2.5 2.5 6 6滴定的温度滴定的温度 温度温度 （

17、10C） 重氮化反应速度重氮化反应速度 （2.5倍倍） 温度温度 亚硝酸亚硝酸 重氮盐分解重氮盐分解(2倍倍) Ar N2+Cl- +H2O Ar OH +N2 +HCl 测定一般在低温下进行测定一般在低温下进行. 太慢太慢 室温室温滴定管尖端插入液面下滴定滴定管尖端插入液面下滴定 重氮化反应分子反应、慢 避免避免 亚硝酸挥发和分解亚硝酸挥发和分解 滴定管尖端插入液面下约滴定管尖端插入液面下约2/32/3处处 一次将大部分亚硝酸滴定液在搅拌下迅速加入一次将大部分亚硝酸滴定液在搅拌下迅速加入 将滴定管尖端提出液面，少量水淋洗尖端，再缓缓滴定将滴定管尖端提出液面，少量水淋洗尖端，再缓缓滴定 近终点

18、，在最后一滴加入后搅拌近终点，在最后一滴加入后搅拌1 1 5 5分钟，确定终点是否真正到达分钟，确定终点是否真正到达3.指示终点的方法指示终点的方法 永停滴定法永停滴定法(中国中国) -见见P89页图页图5-3 (终点时过量亚硝酸在电极上发生氧化还原反应终点时过量亚硝酸在电极上发生氧化还原反应) 电位法电位法 (美国美国) 外指示剂法外指示剂法(中国中国) -碘化钾碘化钾-淀粉糊剂或试纸淀粉糊剂或试纸 2NaNO2 + 2KI + 4HCl NO + I2 +2KCl + 2NaCl +2H2O 缺点缺点:KI在酸性条件下遇光被空气氧化在酸性条件下遇光被空气氧化游离碘游离碘混淆终点混淆终点 多

19、次外试多次外试,损失供试品损失供试品引入误差引入误差 操作烦琐操作烦琐,终点不易掌握终点不易掌握 内指示剂法内指示剂法 缺点缺点:滴定过程中指示剂可能被亚硝酸氧化破坏滴定过程中指示剂可能被亚硝酸氧化破坏, 有的重氮盐有色有的重氮盐有色, 观察终观察终 点颜色变化比较困难点颜色变化比较困难 未能普遍推广应用未能普遍推广应用(二二)非水滴定法非水滴定法 盐酸丁卡因盐酸丁卡因 盐酸利多卡因盐酸利多卡因 HCl HCl 叔胺氮叔胺氮 弱碱性弱碱性非水滴定碱量法非水滴定碱量法：溶剂？滴定剂？指示剂？为什么加：溶剂？滴定剂？指示剂？为什么加Hg(Ac)2? 终点颜色终点颜色?COOCH2CH2N(C2H5

20、)2CH3(CH2)3NHNHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3四、四、 含卤素有机药物的分析含卤素有机药物的分析 目前常用的有机破坏的处理方法：目前常用的有机破坏的处理方法： 直接直接加热回流水解加热回流水解后测定法后测定法 碱性还原碱性还原后测定法后测定法 氧瓶燃烧氧瓶燃烧分解后测定法分解后测定法（一）加热回流水解后测定法（一）加热回流水解后测定法适合测定药物化学结构中与碳原子结合适合测定药物化学结构中与碳原子结合不牢固不牢固的卤素的卤素（卤原子与（卤原子与脂肪碳原子相连脂肪碳原子相连） 含卤素的有机药物含卤素的有机药物 溶于适当溶剂（溶于适当溶剂（乙醇乙醇） 加入加入NaOH溶液（溶

21、液（定量过量定量过量AgNO3滴定液滴定液） 加热回流水解加热回流水解 有机结合状态卤素有机结合状态卤素 卤素离子卤素离子 银量法银量法（Volhard法）法） 铁铵矾指示剂法铁铵矾指示剂法例：三氯叔丁醇的含量测定例：三氯叔丁醇的含量测定 碘苯酯中杂质（碘苯酯中杂质（直链碘直链碘）检查）检查 （二）碱性还原后测定法（二）碱性还原后测定法适用于测定含卤素药物中适用于测定含卤素药物中与苯环直接相连与苯环直接相连的的碘碘 含卤素有机药物含卤素有机药物（多为含（多为含碘碘有机药物）有机药物） NaOH 溶解溶解 锌锌 回流回流 粉粉 还原裂解还原裂解 有机结合卤素有机结合卤素卤素离子卤素离子 银量法银

22、量法（Fajans法法）例：胆影酸的含量测定例：胆影酸的含量测定 碘番酸的含量测定碘番酸的含量测定 注意注意： 滴定度？含量计算公式？滴定度？含量计算公式？（三）氧瓶燃烧分解后测定法（三）氧瓶燃烧分解后测定法 （一）氧瓶燃烧法的原理及操作（一）氧瓶燃烧法的原理及操作 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method）：是一种是一种分解分解破坏破坏有机物质的快速、简便而且有效的方法，其实有机物质的快速、简便而且有效的方法，其实质属干法破坏法。质属干法破坏法。 该法适用于该法适用于卤素卤素、硫硫、氮氮、硒硒等等元素以及含元素以及含放射性同位素放射性同位素的有机药物

23、的分析，可用的有机药物的分析，可用于这些药物的于这些药物的鉴别鉴别、检查检查和和含量测定含量测定。 C,H 元素元素 COCO2 2,H,H2 2O O有机药物有机药物 氧瓶燃烧氧瓶燃烧 待测元素待测元素 离子离子 吸收液吸收液定量完全定量完全吸收吸收 分析分析, ,计算计算 五、杂环类药物含量测定五、杂环类药物含量测定 异烟肼异烟肼的含量测定的含量测定 溴酸钾法溴酸钾法 溴量法溴量法 剩余碘量法剩余碘量法 异烟腙异烟腙及及尼可刹米尼可刹米的含量测定的含量测定 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 紫外分光光度法紫外分光光度法（一）（一）异烟肼的含量测定异烟肼的含量测定依据：还原性依据：还原性 1.

24、溴酸钾法溴酸钾法: 3 + 2KBrO3 HCl 3 + 3N2 + 3H2O + 2KBr 指示剂：指示剂：甲基橙甲基橙 （粉红色消失）（粉红色消失） 反应计量关系：反应计量关系：KBrO3 : = 2:3 滴定度滴定度:每每1ml的溴酸钾滴定液的溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于相当于3.429mg的的C6H7N3O 中国药典和部颁标准规定异烟肼片及其注射剂采用本法测含量中国药典和部颁标准规定异烟肼片及其注射剂采用本法测含量NCONHNH2NCOOHNCONHNH2异烟肼的含量测定异烟肼的含量测定 2. 溴量法溴量法: ( ( 中国药典中国药典19631963年年, 1977,

25、 1977年版改为溴酸钾法年版改为溴酸钾法) ) KBrO3 + 5KBr +6HCl 3Br2 +6KCl + 3H2O + 2Br2 + H2O HCl +N2 + 4HBr (定量过量定量过量) 剩余剩余: Br2 + 2KI I2 + 2KBr 碘量法碘量法 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6NCONHNH2NCOOH异烟肼的含量测定异烟肼的含量测定 3.剩余碘量法剩余碘量法: + 2I2 + 5NaHCO3 +N2 +4NaI+5CO2+4H2O (定量过量定量过量) I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6NCONHNH2NCOONa(二二)异

26、烟腙及尼可刹米的含量测定异烟腙及尼可刹米的含量测定 1.非水溶液滴定法非水溶液滴定法: (异烟腙及其片剂异烟腙及其片剂; 尼可刹米原料尼可刹米原料) 电位滴定法电位滴定法 结晶紫结晶紫 2.紫外分光光度法紫外分光光度法: (尼可刹米注射剂尼可刹米注射剂) =262nm, =2921cm1%E六、生物碱类含量测定六、生物碱类含量测定生物碱类药物的含量测定多利用其生物碱类药物的含量测定多利用其碱性碱性 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 提取酸碱滴定法提取酸碱滴定法 酸性染料比色法酸性染料比色法 高效液相色谱法高效液相色谱法 气相色谱气相色谱法法（一）非水溶液滴定法（一）非水溶液滴定法 原理和方法：原理

27、和方法： 游离生物碱游离生物碱：B + HClO4 BH+ ClO 生物碱盐生物碱盐： BH+ A + HClO4 BH+ ClO +HA （置换反应置换反应） 测定方法：取经适当方法测定方法：取经适当方法干燥的供试品干燥的供试品适量，加冰醋酸适量，加冰醋酸1030ml溶解。若供试品为溶解。若供试品为氢卤酸盐氢卤酸盐，应加，应加5%醋酸汞醋酸汞的冰醋的冰醋酸溶液酸溶液35ml，用，用0.1mol/L的的高氯酸滴定液高氯酸滴定液滴定至终点，并将滴定至终点，并将滴定结果用滴定结果用空白试验空白试验校正。校正。 在冰醋酸中，只要在水溶液的在冰醋酸中，只要在水溶液的Kb 值大于值大于10-10 ，都能

28、，都能顺利滴定顺利滴定。4_4_（二）提取酸碱滴定法（二）提取酸碱滴定法 生物碱制剂生物碱制剂 其它组分干扰其它组分干扰 提取分离提取分离 滴定滴定 含生物碱的中药及其制剂含生物碱的中药及其制剂 为什么？为什么？ 怎么做？怎么做？提取酸碱滴定法提取酸碱滴定法：利用：利用生物碱生物碱及其及其盐类盐类的的溶溶解性质差异解性质差异，经，经碱化碱化、有机溶剂提取有机溶剂提取后，再后，再用酸碱滴定的容量分析，适合于一些用酸碱滴定的容量分析，适合于一些碱性较碱性较强强（pKb =69）生物碱类药物的分析。）生物碱类药物的分析。七、维生素七、维生素B1含量测定含量测定 硅钨酸重量法硅钨酸重量法 硫色素荧光法

29、硫色素荧光法 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 -中国药典测定中国药典测定原料药原料药 紫外分光光度法紫外分光光度法 -中国药典测定中国药典测定片剂片剂及及注射液注射液维生素维生素C含量测定含量测定 理论基础：理论基础： 维生素维生素C 具有较强的具有较强的还原性还原性 可被不同氧化剂可被不同氧化剂定量氧化定量氧化 碘量法碘量法；2,6-二氯吲哚酚法二氯吲哚酚法 (各国药典各国药典) 比色法、紫外分光光度法、比色法、紫外分光光度法、HPLC法（自学）法（自学）（复方制剂、体液中微量维生素复方制剂、体液中微量维生素C的测定的测定）碘量法碘量法 原理原理: + I2 + 2HI 问题问题： 应用应用:

30、(:(简便简便、快速快速) ) 1. 1. 加稀醋酸的目的加稀醋酸的目的? ? 中国药典中国药典测维生素测维生素C C 及其制剂含量及其制剂含量 2. 2. 为什么加新沸过的冷水为什么加新沸过的冷水? ? 美美、英英、日日等国均采用等国均采用碘量法碘量法 3. 3. 终点如何判断终点如何判断? ? 测定维生素测定维生素C C的含量的含量 4. 4. 含量如何计算含量如何计算? ?OOHNaOCHOHCH2OHOOCHOHCH2OHOOOH+八、甾体激素类药物含量测定八、甾体激素类药物含量测定依据依据：不同类别不同类别的的特征基团特征基团的性质的性质方法方法：紫外分光光度法紫外分光光度法、比色法

31、比色法、色谱法色谱法 高效液相色谱法高效液相色谱法 紫外分光光度法紫外分光光度法 四氮唑盐比色法四氮唑盐比色法 异烟肼比色法异烟肼比色法 柯柏比色法柯柏比色法九、九、 -内酰胺类内酰胺类抗生素含量测定抗生素含量测定 微生物法微生物法 理化测定法理化测定法 碘量法碘量法、汞量法汞量法 紫外分光光度法紫外分光光度法 高效液相色谱法高效液相色谱法目前文献报道的目前文献报道的理化测定法很多理化测定法很多碘量法碘量法 原理：原理：NSOCH3CH3COOHHNRCOHNSCH3CH3COONaHNRCOHHNaOOCNaOHNSCH3CH3COONaHNRCOHHNaOOC+ 4I2 + 5H2O + 2HClCH(COOH)2NHCOR+CCHCOOHH3CH3CSO3HNH2+ NaCl + 8HI