微生物生化反应课件.ppt

1、+鉴定细菌的生化反应主要有哪些类别鉴定细菌的生化反应主要有哪些类别+常用的生化试验操作方法与结果判断常用的生化试验操作方法与结果判断+不同细菌产生的酶不同，对底物的分解能力不同，代谢产不同细菌产生的酶不同，对底物的分解能力不同，代谢产物不同。物不同。+微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。生物。+种类种类n碳水化合物代谢试验碳水化合物代谢试验n蛋白质、氨基酸代谢试验蛋白质、氨基酸代谢试验n碳源利用试验碳源利用试验n酶类试验酶

2、类试验n其他试验其他试验+原理：各种细菌含有不同的分解糖原理：各种细菌含有不同的分解糖( (苷、醇苷、醇) )的酶，对糖的酶，对糖( (苷、醇苷、醇) )分解能力也各不相同，可用来鉴别细菌。分解能力也各不相同，可用来鉴别细菌。 +方法：将待检细菌接种葡萄糖、乳糖或其他发酵管，方法：将待检细菌接种葡萄糖、乳糖或其他发酵管，3535培养培养181824h24h观察结果。观察结果。+结果：首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊结果：首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状，再确定细菌对糖类分解情况状，再确定细菌对糖类分解情况n不分解糖，培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以不分解糖，培养

3、基颜色与接种前相比无变化，记录时以“-”-”表示；表示；n分解糖产酸不产气，培养基中的指示剂变色，记录时以分解糖产酸不产气，培养基中的指示剂变色，记录时以“+”+”表示；表示；n分解糖产酸产气，除培养基中的指示剂变化外，液体培养分解糖产酸产气，除培养基中的指示剂变化外，液体培养基的倒管中还有气泡；若为半固体培养基，则培养基内出基的倒管中还有气泡；若为半固体培养基，则培养基内出现气泡或琼脂断裂，记录时以现气泡或琼脂断裂，记录时以“ ”表示。表示。溴甲酚紫指示剂溴甲酚紫指示剂+糖氧化发酵糖氧化发酵(O-F)(O-F)试验：该试验是由试验：该试验是由HughHugh和和LeifsonLeifson创

4、立，创立，故又称故又称Hugh-Leifson(HL)Hugh-Leifson(HL)试验。试验。+原理：细菌对糖的代谢，分为氧化和发酵原理：细菌对糖的代谢，分为氧化和发酵2 2种类型，不分种类型，不分解葡萄糖的细菌，称为产碱型。利用此试验可区别细菌的解葡萄糖的细菌，称为产碱型。利用此试验可区别细菌的代谢类型。代谢类型。+方法：取方法：取2 2支支HLHL培养基。指示剂为溴麝香草酚蓝培养基。指示剂为溴麝香草酚蓝 ，煮沸，煮沸1010分钟以驱逐培养基中的氧气。冷却后将被检细菌接种到分钟以驱逐培养基中的氧气。冷却后将被检细菌接种到2 2支培养基中，其中一支加灭菌的液体石蜡或凡士林厚约支培养基中，其

5、中一支加灭菌的液体石蜡或凡士林厚约lcmlcm，置于，置于3535培养培养3 34 4天，观察结果。天，观察结果。+结果：结果：2 2管均不产酸管均不产酸( (不变色不变色) )为阴性；为阴性；2 2管均产酸管均产酸( (变黄变黄) )为为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。化型。+应用：绿脓杆菌为应用：绿脓杆菌为O O型，产碱杆菌为产碱型型，产碱杆菌为产碱型 产碱型产碱型发酵型发酵型氧化型氧化型溴麝香草酚蓝指示剂溴麝香草酚蓝指示剂+原理：细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一原理：细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一种是半乳糖苷渗透

6、酶，另一种为种是半乳糖苷渗透酶，另一种为-半乳糖半乳糖苷酶。苷酶。ONPGONPG可迅速进入细菌细胞，被半乳可迅速进入细菌细胞，被半乳糖苷酶水解，释出黄色的糖苷酶水解，释出黄色的ONPONP，故由培养基，故由培养基液变黄可迅速测知液变黄可迅速测知-半乳糖苷酶的存在。半乳糖苷酶的存在。+方法：取一环细菌纯培养物接种在方法：取一环细菌纯培养物接种在ONPGONPG培培养基上置养基上置3737培养培养1 13h3h或或24h24h+结果：结果：如有如有-半乳糖苷酶，会在半乳糖苷酶，会在3h3h内产生内产生黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在24h24h内不内不变色。变色。+应

7、用：大肠杆菌阳性，伤寒杆菌阴性应用：大肠杆菌阳性，伤寒杆菌阴性+原理：某些细菌具有七叶苷酶，水解七叶原理：某些细菌具有七叶苷酶，水解七叶苷后产生七叶素与亚铁离子反应形成黑色苷后产生七叶素与亚铁离子反应形成黑色酚铁络合物，使培养基变黑。酚铁络合物，使培养基变黑。+方法：将被检菌接种于七叶苷培养基，方法：将被检菌接种于七叶苷培养基， 3737培养培养181824h24h+结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性+应用：应用：D D群链球菌为阳性，其他链球菌为阴群链球菌为阳性，其他链球菌为阴性性+原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮

8、酸可进一步分解为甲酸、乙酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基酸等酸性物质，故培养基pHpH在在4.54.5以以下，加入甲基红指示剂后呈红色下，加入甲基红指示剂后呈红色( (阳阳性性) )。有些细菌分解葡萄糖产生的酸。有些细菌分解葡萄糖产生的酸进一步转化为醇、酮等非酸性物质，进一步转化为醇、酮等非酸性物质，使培养基使培养基pHpH在在6.26.2以上，加入甲基红以上，加入甲基红试剂呈黄色试剂呈黄色( (阴性阴性) )。+方法：将待检菌接种葡萄糖蛋白胨水方法：将待检菌接种葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养基中， 3737培养培养181824h24h+结果：在培养物中加入甲基红指示剂结果

9、：在培养物中加入甲基红指示剂2 23 3滴，立即观察，红色为阳性，黄滴，立即观察，红色为阳性，黄色为阴性。色为阴性。+应用：大肠埃希菌阳性，产气肠杆菌应用：大肠埃希菌阳性，产气肠杆菌阴性。阴性。 +原理：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，原理：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为色胍缩二乙酰，为VPVP试验阳性。若培养试验阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化基中胍基含量少，加入

10、少量含胍基的化合物如肌酸肌酐，以加速其反应。合物如肌酸肌酐，以加速其反应。+方法：将待检接种于葡萄糖蛋白胨水中，方法：将待检接种于葡萄糖蛋白胨水中，3737培养培养242448h48h，于培养物中加入，于培养物中加入VPVP试试剂（剂（a-a-萘酚无水乙醇溶液和萘酚无水乙醇溶液和含肌酸或肌含肌酸或肌酐的氢氧化钾溶液酐的氢氧化钾溶液）各）各1 1滴，充分摇动试滴，充分摇动试管，观察结果。管，观察结果。+结果：如立即或于数分钟内出现红色反结果：如立即或于数分钟内出现红色反应者为阳性；若为阴性应将试管置应者为阳性；若为阴性应将试管置3737中中4h4h后再进行观察，仍无红色者为阴性。后再进行观察，仍

11、无红色者为阴性。+应用：大肠埃希菌阴性，产气肠杆菌阳应用：大肠埃希菌阴性，产气肠杆菌阳性。性。 +原理原理: :某些细菌能产生色氨酸酶，某些细菌能产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸而生可分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质成靛基质( (吲哚吲哚) )，后者与对二，后者与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色甲氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰靛基质的玫瑰靛基质( (玫瑰吲哚玫瑰吲哚) )。+方法方法: :将待检菌接种于蛋白胨水将待检菌接种于蛋白胨水培养基中，经培养基中，经3535培养培养24244848小时，取出后加上述试剂数滴，小时，取出后加上述试剂数滴，观察两层液面的颜色。观察两层液面的颜色。+结果结果

12、: :出现红色液面为阳性，黄出现红色液面为阳性，黄色液面为阴性。色液面为阴性。+应用应用: :大肠杆菌为阳性，产气肠大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。杆菌为阴性。+原理：有些细菌分解含硫氨基酸产生硫化原理：有些细菌分解含硫氨基酸产生硫化氢，遇到培养基中铅离子和二价铁离子会氢，遇到培养基中铅离子和二价铁离子会产生黑色沉淀产生黑色沉淀+方法：方法：将待检菌接种于含铅或含亚铁离子将待检菌接种于含铅或含亚铁离子培养基中，经培养基中，经3535培养培养181824h24h小时小时+结果：有黑色沉淀产生为阳性结果：有黑色沉淀产生为阳性+应用：大肠杆菌阴性，变形杆菌阳性应用：大肠杆菌阴性，变形杆菌阳性+原理

13、：能产生尿素酶的细菌，原理：能产生尿素酶的细菌，能水解尿素生成氨和能水解尿素生成氨和COCO2 2，氨及其化合物使培养基呈碱氨及其化合物使培养基呈碱性。性。+方法：将待检菌接种于尿素方法：将待检菌接种于尿素培养基中，置于培养基中，置于3535培养培养2 24 4小时或过夜，取出观察。小时或过夜，取出观察。如阴性者继续培养如阴性者继续培养4 4天再观天再观察。察。+结果：培养基呈红色反应为结果：培养基呈红色反应为阳性；不变色或呈黄色为阴阳性；不变色或呈黄色为阴性。性。+应用：大肠杆菌阴性，变形应用：大肠杆菌阴性，变形杆菌阳性杆菌阳性酚红指示剂酚红指示剂+原理：某些细菌原理：某些细菌( (如变形杆

14、菌属如变形杆菌属) )，可产生苯，可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨生成苯丙酮丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨生成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂与苯丙酮酸螯合后形酸，加入三氯化铁试剂与苯丙酮酸螯合后形成绿色化合物。成绿色化合物。+方法：将待检菌接种于苯丙氨酸琼脂斜面上，方法：将待检菌接种于苯丙氨酸琼脂斜面上，于于3535培养培养181824h24h。+结果：在斜面培养物上滴加结果：在斜面培养物上滴加1010三氯化铁溶三氯化铁溶液观察结果，出现绿色为阳性。液观察结果，出现绿色为阳性。+应用：变形杆菌为阳性，大肠埃希菌为阴性。应用：变形杆菌为阳性，大肠埃希菌为阴性。+快速纸片法：取待检菌涂于快速纸片法：

15、取待检菌涂于苯丙氨酸脱氨酶苯丙氨酸脱氨酶试纸上，试纸上，35 15min35 15min后滴加后滴加1010三氯化铁溶三氯化铁溶液，观察。绿色为阳性，无色为阴性。液，观察。绿色为阳性，无色为阴性。+原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，分解氨基酸，使其脱掉羧基，生成胺和原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，分解氨基酸，使其脱掉羧基，生成胺和COCO2 2，称脱羧反应；并使培养基变碱，可用指示剂显示出来。，称脱羧反应；并使培养基变碱，可用指示剂显示出来。+最常用的氨基酸有三种，最常用的氨基酸有三种，L-L-赖氨酸脱羧形成尸胺，赖氨酸脱羧形成尸胺，L-L-鸟氨酸脱羧形成腐胺，鸟氨酸脱羧形成腐胺，L-L-精氨酸脱羧

16、形成精胺。精氨酸脱羧形成精胺。+方法：将待检菌接种氨基酸脱羧酶培养基和对照培养基，并加入无菌液体方法：将待检菌接种氨基酸脱羧酶培养基和对照培养基，并加入无菌液体石蜡，于石蜡，于3535培养培养1 14 4天，每天观察结果。天，每天观察结果。+结果：对照管在培养结果：对照管在培养181824h24h后，应保持黄色。氨基酸测定管由黄变紫后，应保持黄色。氨基酸测定管由黄变紫( (溴溴甲酚紫为指示剂甲酚紫为指示剂) )或由绿变蓝或由绿变蓝( (溴麝香草酚蓝为指示剂溴麝香草酚蓝为指示剂) )为阳性，黄色为阴性。为阳性，黄色为阴性。如对照管为阳性如对照管为阳性( (紫色或蓝色紫色或蓝色) )，则所有氨基酸

17、脱羧酶试验皆无效，不能作，则所有氨基酸脱羧酶试验皆无效，不能作出判定。出判定。+应用：乙型副伤寒沙门菌为阳性，普通变形杆菌为阴性。应用：乙型副伤寒沙门菌为阳性，普通变形杆菌为阴性。+沙门菌属中除伤寒沙门菌和鸡沙门菌外，为鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均沙门菌属中除伤寒沙门菌和鸡沙门菌外，为鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均阳性；志贺菌属中除宋内志贺菌外，为鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均为阴阳性；志贺菌属中除宋内志贺菌外，为鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均为阴性。除奇异变形杆菌为鸟氨酸阳性外，其余变形杆菌鸟氨酸和赖氨酸脱羧性。除奇异变形杆菌为鸟氨酸阳性外，其余变形杆菌鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均阴性。酶试验均阴性。+原理

18、：当细菌可以利用铵盐作为惟一的原理：当细菌可以利用铵盐作为惟一的氮源，同时利用柠檬酸盐作为惟一碳源氮源，同时利用柠檬酸盐作为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，并分时，可在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，解柠檬酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂变色。若细菌不能利用柠檬酸盐指示剂变色。若细菌不能利用柠檬酸盐为碳源，则细菌不能生长，培养基不变为碳源，则细菌不能生长，培养基不变色。色。+方法：将待检菌接种于柠檬酸盐培养基方法：将待检菌接种于柠檬酸盐培养基中，中，3535培养培养242448h48h观察结果。观察结果。+结果：若有菌苔出现，培养基变为深蓝结果：若有菌苔出现

19、，培养基变为深蓝色为阳性。细菌不能生长，培养基不变色为阳性。细菌不能生长，培养基不变色，为柠檬酸盐利用试验阴性。色，为柠檬酸盐利用试验阴性。+应用：产气肠杆菌为阳性，大肠埃希菌应用：产气肠杆菌为阳性，大肠埃希菌为阴性。为阴性。吲哚试验吲哚试验（I)I)甲基红试验甲基红试验(M(M）VPVP试验试验（V V）枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验（C C）+原理：某些细菌原理：某些细菌( (如脑膜炎奈瑟菌、铜如脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌等绿假单胞菌等) )具有氧化酶，能将盐酸具有氧化酶，能将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺氧化成紫红色的醌类化合物。胺氧化成紫红色的

20、醌类化合物。+方法：用滤纸条沾取被检菌落，用毛方法：用滤纸条沾取被检菌落，用毛细管吸取氧化酶试剂，滴加于滤纸条细管吸取氧化酶试剂，滴加于滤纸条菌落上菌落上( (或直接将试剂滴加于培养皿菌或直接将试剂滴加于培养皿菌落上落上) )。+结果：阳性者立刻出现红色，继而逐结果：阳性者立刻出现红色，继而逐渐加深渐加深( (如加的试剂是盐酸四甲基对苯如加的试剂是盐酸四甲基对苯二胺，阳性呈蓝色二胺，阳性呈蓝色) )。阴性不变色。阴性不变色。+应用：脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌应用：脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌为阳性，肠杆菌科细菌为阴性。为阳性，肠杆菌科细菌为阴性。+纸片法：取菌落涂在氧化酶试纸上，纸片法：取菌落涂

21、在氧化酶试纸上，10s10s内成深紫色为阳性，内成深紫色为阳性，1min1min后仍不变后仍不变色为阴性。色为阴性。 +原理：有些细菌具有过氧化氢酶，能分解过氧化氢，释放原理：有些细菌具有过氧化氢酶，能分解过氧化氢，释放出初生态氧，生成氧分子而出现气泡。出初生态氧，生成氧分子而出现气泡。+方法：分别挑取固体培养基上的待检菌落，置于洁净玻片方法：分别挑取固体培养基上的待检菌落，置于洁净玻片上，滴加上，滴加3 3过氧化氢溶液数滴，观察结果。过氧化氢溶液数滴，观察结果。+结果：于半分钟内有气泡产生者为阳性，不产生气泡者为结果：于半分钟内有气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。阴性。+应用：常用金黄色

22、葡萄球菌作阳性对照，链球菌作阴性对应用：常用金黄色葡萄球菌作阳性对照，链球菌作阴性对照。照。+原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐，生成亚硝酸盐、氨和氮等。原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐，生成亚硝酸盐、氨和氮等。一般硝酸盐还原试验，系测定还原过程中所生成的亚硝酸盐。如培养一般硝酸盐还原试验，系测定还原过程中所生成的亚硝酸盐。如培养基中有亚硝酸盐存在，与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺基中有亚硝酸盐存在，与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，成为重氮苯磺酸，后者与酸作用，成为重氮苯磺酸，后者与a-a-萘胺结合为红色的萘胺结合为红色的N-a-N-a-萘胺偶氮萘胺偶氮苯磺酸。苯

23、磺酸。+方法：将待检菌分别接种硝酸盐培养基，方法：将待检菌分别接种硝酸盐培养基，3535培养培养1 14 4天，每天吸取天，每天吸取培养液培养液0.50.51ml1ml，加入硝酸盐还原试剂，加入硝酸盐还原试剂( (甲、乙液等量混合甲、乙液等量混合)O.1ml)O.1ml观观察结果。察结果。+结果：阳性者立刻或于结果：阳性者立刻或于10min10min内呈红色，阴性者不变色。如欲检查有内呈红色，阴性者不变色。如欲检查有无氮气产生，可于培养基内加一只小倒管，管内有气泡产生，表示有无氮气产生，可于培养基内加一只小倒管，管内有气泡产生，表示有氮气生成。如加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否被还原

24、，氮气生成。如加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否被还原，可于原试管内再加少许锌粉，如出现红色，表示硝酸盐仍然存在。若可于原试管内再加少许锌粉，如出现红色，表示硝酸盐仍然存在。若不出现红色，表示硝酸盐已被还原为氨和氮。不出现红色，表示硝酸盐已被还原为氨和氮。+应用：肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐，铜绿假单胞菌能产应用：肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐，铜绿假单胞菌能产生氮气，醋酸钙不动杆菌为阴性。生氮气，醋酸钙不动杆菌为阴性。肠杆菌科细菌均能还原肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐。硝酸盐为亚硝酸盐。有些细菌能使硝酸盐或有些细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如亚硝酸盐还原为氮，

25、如假单胞菌等，硝酸盐或假单胞菌等，硝酸盐或亚硝酸盐还原生成气体亚硝酸盐还原生成气体氮或氧化氮，称为脱硝氮或氧化氮，称为脱硝化或脱氮化作用。化或脱氮化作用。+原理：致病性葡萄球菌产生血浆原理：致病性葡萄球菌产生血浆凝固酶可使血浆凝固。凝固酶可使血浆凝固。+方法：方法：+玻片法：玻片上滴加生理盐水后玻片法：玻片上滴加生理盐水后挑菌混匀，无自凝现象发生则挑挑菌混匀，无自凝现象发生则挑取取2 23 3环人（兔）血浆混合，环人（兔）血浆混合，10s10s内出现凝集为阳性，同时应设阴内出现凝集为阳性，同时应设阴性对照。性对照。+试管法：用稀释试管法：用稀释1 1：4 4的人（兔）的人（兔）血浆血浆0.5m

26、l0.5ml与一大环待检菌混合，与一大环待检菌混合，3513514h4h后出现凝块为阳性，同后出现凝块为阳性，同时应设阳性与阴性对照时应设阳性与阴性对照+应用：鉴定致病性葡萄球菌应用：鉴定致病性葡萄球菌+原理：产生原理：产生DNADNA酶的细菌能水酶的细菌能水解解DNADNA成寡核苷酸链，成寡核苷酸链，DNADNA长长链可被酸沉淀，寡核苷酸链链可被酸沉淀，寡核苷酸链则能溶于酸则能溶于酸+方法：将待检菌接种于方法：将待检菌接种于DNADNA琼琼脂平板，脂平板， 3535培养培养181824h24h，用用1mol/L HCl1mol/L HCl浸没菌落，观浸没菌落，观察结果。察结果。+结果：菌落周

27、围出现透明环结果：菌落周围出现透明环为阳性，否则为阴性为阳性，否则为阴性+应用：常用于金黄色葡萄球应用：常用于金黄色葡萄球菌、沙雷菌和变形杆菌鉴定，菌、沙雷菌和变形杆菌鉴定，为阳性。为阳性。+原理：胆盐、去胆盐酸钠和牛黄胆酸原理：胆盐、去胆盐酸钠和牛黄胆酸能选择性溶解肺炎链球菌而对其他链能选择性溶解肺炎链球菌而对其他链球菌无作用。球菌无作用。+方法：方法：+平板法：取一接种环平板法：取一接种环100g/L100g/L去氧胆酸去氧胆酸钠放在待检菌落上，钠放在待检菌落上，3530min3530min观察观察结果，菌落被溶解消失为阳性。结果，菌落被溶解消失为阳性。+试管法：取试管法：取0.9ml 1

28、80.9ml 1824h24h液体培养液体培养物内加入物内加入100g/L100g/L去氧胆酸钠去氧胆酸钠0.1ml0.1ml，混匀，混匀，3737水浴水浴101030min30min，培养液，培养液清凉者为阳性。同时设生理盐水对照。清凉者为阳性。同时设生理盐水对照。+应用：肺炎链球菌阳性，甲型链球菌应用：肺炎链球菌阳性，甲型链球菌阴性。阴性。+原理：原理：B B群链球菌能产生群链球菌能产生CAMPCAMP因子，增强金黄色葡因子，增强金黄色葡萄球菌的溶血能力，在两菌交界处出现箭头样溶萄球菌的溶血能力，在两菌交界处出现箭头样溶血区。血区。+方法：先用产溶血素的金黄色葡萄球菌在血平板方法：先用产溶

29、血素的金黄色葡萄球菌在血平板上划一横线，再取待检链球菌作一垂直划线接种，上划一横线，再取待检链球菌作一垂直划线接种，两者相距两者相距0.50.51cm1cm， 3535培养培养181824h24h观察结果。观察结果。用用B B群链球菌作阳性对照，群链球菌作阳性对照，A A群或群或D D群作阴性对照。群作阴性对照。+结果：在两种细菌划线交界处，出现箭头形透明结果：在两种细菌划线交界处，出现箭头形透明溶血区为阳性。溶血区为阳性。+杆菌肽试验：杆菌肽试验：A A群链球菌群链球菌+OptochinOptochin敏感试验：肺炎球菌敏感试验：肺炎球菌+O/129O/129抑菌试验：弧菌、邻单胞菌抑菌试验

30、：弧菌、邻单胞菌+原理：该培养基用酚红作指示剂，在酸性时呈黄色，原理：该培养基用酚红作指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸碱性时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气，则斜面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发产气，则斜面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡萄糖含量较少酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡萄糖含量较少( (占乳糖量占乳糖量的十分之一的十分之一) )，斜面所生成的少量酸可因接触空气而，斜面所生成的少量酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层由于是在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖

31、所生成由于是在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化挥发而仍保持黄色。如细菌分的酸类物质不被氧化挥发而仍保持黄色。如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫化亚铁作用生成黑色解蛋白质产生硫化氢，则与硫化亚铁作用生成黑色的硫化铁，使培养基变黑。的硫化铁，使培养基变黑。+方法：将待检菌接种于克氏双糖铁培方法：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基养基( (底层穿刺，上层斜面划线底层穿刺，上层斜面划线) )，3535培养培养24h24h。+结果：如待检菌发酵乳糖和葡萄糖产结果：如待检菌发酵乳糖和葡萄糖产酸又产气，则上层和底层均呈黄色且酸又产气，则上层和底层均呈黄色且有气泡产生；如待检菌只发酵葡萄糖有气泡产生；如待检菌只发酵葡萄糖而不发酵乳糖，则底层变黄，上层仍而不发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层变黑，说明该菌能产为红色。如底层变黑，说明该菌能产生硫化氢，生成黑色的硫化铁沉淀。生硫化氢，生成黑色的硫化铁沉淀。+应用：肠杆菌科鉴定等。应用：肠杆菌科鉴定等。+什么是什么是IMViCIMViC试验，有何作用？试验，有何作用？+什么是什么是KIAKIA试验，如何判断结果。试验，如何判断结果。+常用的细菌生化试验方法、结果判断、应常用的细菌生化试验方法、结果判断、应用用