柱层析.doc

1、一实验目的1 了解柱层析的基本原理。2 掌握柱层析的操作技术。二实验原理层析法是一种物理分离方法。柱层析法是层析方法中的一个类型，分为吸附柱层析法和分配柱层析法。本实验仅介绍吸附柱层析法。吸附柱层析法是分离、纯化和鉴定有机物的重要方法。它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。吸附柱层析法通常是在玻璃层析柱中装入表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂（常用的吸附剂有氧化铝、硅胶等）。当混合物溶液流过吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶不断加入溶剂（洗脱剂）洗脱。由

2、于不同化合物吸附能力不同，从而随着溶剂下移的速度不同，于是混合物中各组分按吸附剂对它们所吸附的强弱顺序在柱中自上而下形成了若干色带，如图1所示。 图1 色层的展开在洗脱过程中，柱中连续不断地发生吸附和溶解的交替现象。被吸附的组分被溶解吸出来，随着溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒，把组分从溶液中吸附出来，而继续流下的新溶剂又使组分溶解而向下移动，这样经过适当时间移动后，各种组分就可以完全分开，继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，再继续加溶剂直至各组分依次全部由柱中洗出为止，分别收集各组分。三材料1仪器 层析柱，烧杯，铁架台，长玻棒，小量筒，脱脂棉。 2药品 硅胶 ，丙酮 ，石油醚

3、。3. 材料：菠菜叶。四方法1装柱 取一支洁净干燥的层析柱玻管，自柱口塞入少许脱脂棉并用长玻棒推至柱底压平（塞时不宜太紧）。然后用漏斗从柱口小心装入约5g硅胶（100160目）（四分之三高度，干法装柱），边装边用手指敲打层析柱，使填装紧密均匀。再在柱顶加入一薄层脱脂棉花（约0.5cm厚）。将此层析柱固定在铁架台上。2加样 称取研磨研细的菠菜叶2.03.0g于25mL烧杯中，量取10mL石油醚：丙酮=1:1（体积比）的混合液溶解浸泡，用封口薄膜封住杯口，浸泡10min,倒出浸出液静置分层，用刻度胶头滴管吸取1.0mL上样分析，注意上样应沿管壁。（注意：胶头刻度滴管应是干燥的）3洗脱、分离 慢慢加

4、入石油醚：丙酮=95:5（体积比）的洗脱液约10mL洗脱，在柱上可以看到黄色的色带。再继续加石油醚：丙酮=2:8（体积比）的洗脱液约10mL洗脱，在柱上可以看到绿色的色带。实验完毕，让洗脱剂全部流出至吸附剂变干，然后将吸附剂（硅胶）倒入指定的容器中，并把层析柱洗净倒立于铁架台上晾干。五注意事项1层析柱装填紧密与否, 对分离效果影响很大。若柱中留有气泡或各部分松紧不匀（更不能有断层）时，会影响渗透速度和显色的均匀。2在吸附柱上端加入脱脂棉是为了加样品和洗脱剂时不致把吸附剂冲起，影响分离效果；在吸附柱下端加入脱脂棉是为了防止吸附剂细粒流出。3为了保持吸附柱的均一性，应该使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中，即从第一次注入石油醚：丙酮=95:5（体积比）的洗脱液起直至实验完毕，绝不能让柱内液体之液面降至棉花层之下。否则当柱中溶剂或溶液流干时，会使柱身干裂。若再重新加入溶剂，会使吸附柱的各部分不均匀而影响分离效果。六思考题1为什么极性较大的物质要用极性较大的溶剂洗脱？2层析柱中若留有空气或装填不匀，会怎样影响分离效果？如何避免？3. 柱层析的分离原理是什么？