微量凯氏定氮法的催化剂课件.ppt

1、（1）食品中的蛋白质含量及测定意义（2）蛋白质系数（3）蛋白质测定方法食品中的蛋白质含量食品中的蛋白质含量牛肉 猪肉 兔肉 鸡肉 20 9.5 21 20大豆 米 面粉 菠菜 苹果 40 8.5 10 2.4 0.4（2）蛋白质系数）蛋白质系数 熟悉熟悉凯氏定氮装置的组件和安装、使用知凯氏定氮装置的组件和安装、使用知识识 了解了解凯氏定氮法原理和方法，氨基酸和氨凯氏定氮法原理和方法，氨基酸和氨基酸态氮的测定原理；基酸态氮的测定原理； 1、通过学习觊氏定氮法的原理，我们可知道操作分为哪几个大的步骤？2、加入硫酸钾、硫酸铜的作用是什么？.常量凯氏定氮法观察与思考：观察与思考：1、样品中加入浓硫酸后

2、，溶液的颜色立、样品中加入浓硫酸后，溶液的颜色立即发生什么变化？即发生什么变化？2、消化过程中是否有大量的泡冲到瓶颈，、消化过程中是否有大量的泡冲到瓶颈，原因是什么？原因是什么？3、如何判断消化的终点？、如何判断消化的终点？思考：1、为什么在蒸汽发生瓶中要加入指示剂甲基橙和硫酸？加入数粒玻璃珠的作用是什么？2.蒸馏蒸馏 (5) 结果计算式中W蛋白质的质量分数，%； V0滴定空白蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL； V1滴定样品蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL； V2蒸馏时吸取样品稀释液体积，mL； C盐酸标准液的浓度，mol/L； 0.014氮的毫摩尔质量，g/mmol； F蛋白质系数； m样品质量

3、，g。%100100014. 0)(201VmFcVVW：提高溶液的沸点提高溶液的沸点（2） 催化剂催化剂 ： CuSO4 、 氧化汞、汞、氧化汞、汞、硒粉硒粉 都是都是良好的催化剂，但后良好的催化剂，但后三种有剧毒；三种有剧毒； （3）氧化剂）氧化剂 ： 过氧化氢过氧化氢 催化剂催化剂 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2+O2 Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2 此反应不断进行，待有机物被消化完此反应不断进行，待有机物被消化完后，后，不再有硫酸亚不再有硫酸亚铜铜（褐色）（褐色）生成，溶液呈现清澈生成，溶液呈现清澈的蓝的蓝绿色。绿色。 可以指示可以指示消化消化终点的

4、到达终点的到达 下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。（1） 所用试剂应用所用试剂应用无氨蒸馏水无氨蒸馏水配制。加指示剂数滴及配制。加指示剂数滴及硫酸数毫升，以保持水呈硫酸数毫升，以保持水呈酸性。酸性。（2） 若样品含脂肪或糖较多时，应注意发生的大量若样品含脂肪或糖较多时，应注意发生的大量泡沫泡沫 应加入应加入少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂，防止其溢少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂，防止其溢出瓶外，并注意适当控制热源强度。出瓶外，并注意适当控制热源强度。（3） 若样品消化液不易澄清透明，可加入若样品消化液不易澄清透明，可加入300g/L23ml 过氧化氢过氧化氢后再

5、加热。后再加热。（4） 硫酸铜硫酸铜起到催化作用，加速氧化分解。硫起到催化作用，加速氧化分解。硫酸铜也是蒸馏时样品酸铜也是蒸馏时样品液液碱化的碱化的指示剂指示剂，若所加，若所加碱量不足，分解液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，碱量不足，分解液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，需需再再增加氢氧化钠用量。增加氢氧化钠用量。（5） 若取样量较大，如干试样超过若取样量较大，如干试样超过5g，可按每可按每克试样克试样5ml的比例增加硫酸用量。的比例增加硫酸用量。（6）消化时间一般约消化时间一般约4小时左右即可，消化时间过长会小时左右即可，消化时间过长会引起氨的损失。一般消化至透明后继续引起氨的损失。一般消化至透明后继续

6、30分钟即可分钟即可. 双指示剂甲醛滴定法：原理、双指示剂甲醛滴定法：原理、试剂、测定方法、结果计算、试剂、测定方法、结果计算、说明说明电位滴定法：原理、试剂、电位滴定法：原理、试剂、仪器、测定方法、结果计算仪器、测定方法、结果计算氨基酸具有酸性的氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的基和碱性的-NH2基。它们相互作用而使氨基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2基与甲醛结合，从基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定-COOH基，并基，并用间接的方法测定氨基酸的

7、总量。用间接的方法测定氨基酸的总量。RCHH3N CCOR CCOHOHNH2+HCHORCCOOHHN CH2+NaOHRCHCOOHNH CH2OH或R CH COOHN(CH2OH)2或RCH COONaNCH2或 R CHNHCOOHCHO(3) 说明及注意事项说明及注意事项 此法适用于测定食品中的游离氨基酸。此法适用于测定食品中的游离氨基酸。 固体样品应先粉碎，准确称样后用水萃取，测定固体样品应先粉碎，准确称样后用水萃取，测定萃取液，液体试样可直接测定。萃取在萃取液，液体试样可直接测定。萃取在50水浴水浴中进行中进行0.5h。 若样品颜色较深，可加适量活性炭脱色，或用电若样品颜色较深

8、，可加适量活性炭脱色，或用电位滴定法测定。位滴定法测定。 与本法类似的还有单指示剂与本法类似的还有单指示剂(百里酚酞百里酚酞)甲醛滴定甲醛滴定法，此法用标准碱完全中和法，此法用标准碱完全中和COOH时的时的pH值为值为8.59.5，但分析结果稍偏低。，但分析结果稍偏低。(4) 结果计算结果计算100014. 0)(12mcVV 氨基酸态氮（%）6.3.2 电位滴定法电位滴定法(1) 原理原理 根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，电极

9、及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定，依据酸度计指示的用氢氧化钠标准溶液滴定，依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。值判断和控制滴定终点。(2) 仪器仪器 酸度计（附磁力搅拦器）；酸度计（附磁力搅拦器）；（3）按下式计算）按下式计算NaOH标准溶液的量浓度标准溶液的量浓度C=G(V-V0) 10-3204.2204.2(4)试验步骤试验步骤 吸取含氨基酸约吸取含氨基酸约20mg的样品溶液（的样品溶液（5mL酱油），置于酱油），置于100mL容量瓶中，容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取加水至刻度，混匀后吸取20.0mL烧杯中，加烧杯中，加60mL水，开动磁力搅拌器，水，开

10、动磁力搅拌器，用用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2（记下消耗（记下消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数，可计算总酸含量）。氢氧化钠标准溶液的毫升数，可计算总酸含量）。 加入加入10.0mL甲醛溶液，混匀。再用甲醛溶液，混匀。再用0.05mol/L氢氧化钠标准的溶液继续氢氧化钠标准的溶液继续滴定至滴定至pH9.2，记下消耗，记下消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数。氢氧化钠标准溶液的毫升数。 同时取同时取80mL水，先用水，先用0.05mol/L氢氧化钠溶液调节至氢氧化钠溶液调节至pH为为8.2，再加入，再加入10.0mL甲醛溶液，用甲醛溶液，用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至氢氧化钠标准溶液滴定至pH9.2，做试剂，做试剂空白试验。空白试验。 计算计算