天然药物化学(黄酮类化合物)课件.ppt

1、第六章 黄酮类化合物 Chapter 6 Flavonoids1ppt课件课件第一节第一节 概概 述述 黄酮类化合物广泛存在于自然界。 黄酮类化合物多具颜色。 在自然界中，黄酮类化合物的主要存在形式是 与糖结合成苷，也有游离体。 黄酮类化合物的生理活性多种多样；总数超过9000个。2ppt课件课件 色原酮色原酮 2-苯基色原酮苯基色原酮 （苯并（苯并- -吡喃酮）吡喃酮）OO 经典含义：经典含义：主要是指基本母核为主要是指基本母核为2-苯基色原酮苯基色原酮的一的一系列化合物。由于该类化合物大多呈淡黄色或黄色系列化合物。由于该类化合物大多呈淡黄色或黄色，且分子中多具酮基，因此称为黄酮。，且分子中

2、多具酮基，因此称为黄酮。OO12345678一、定义一、定义3ppt课件课件 泛指两个苯环（泛指两个苯环（A-环与环与B-环）通过中央三碳环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。原子相互连接而成的一系列化合物。常有羟基、常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等取代基。甲氧基、甲基、异戊烯基等取代基。O12345678910123456ABC（C6-C3-C6）4ppt课件课件OOOOflavoneisoflavoneOOflavoneOOHchalconeflavoneflavanoneOOOORRa.中央三碳链的氧化程度中央三碳链的氧化程度b.B-环联接位置（环联接位置（2-或或3-位）位

3、）c.三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状二、二、 分类分类5ppt课件课件主要黄酮类化合物结构类型：主要黄酮类化合物结构类型：6ppt课件课件其他黄酮类化合物结构类型：其他黄酮类化合物结构类型：7ppt课件课件OOOOOHOOHOOHOHOHOOOOHHOOOHOHOHCOOH木犀草素，木犀草素，抗菌作用抗菌作用OOHOOHOHOHOR黄芩苷，黄芩苷，清热解毒清热解毒槲皮素：槲皮素：R = H芦芦 丁：丁：R = 芸香糖芸香糖最常见的黄酮醇类化合物最常见的黄酮醇类化合物黄酮、黄酮醇黄酮、黄酮醇8ppt课件课件OOOOOHOOOHOCH3OHOrutinoseOOOHOHHOOOOHHOOHO

4、OCH2OHOHOCH3二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇9ppt课件课件OOOOOOOOCH3OCH3OOOOR3R2OR1大豆素：R1=R2=R3=H大豆苷：R1=R3=H, R2=Glc大豆素-7,4-二葡萄糖苷：R1=H, R2=R3=Glc葛根素：R1=Glc, R2=R3=H葛根素-7-木糖苷：R1=Glc, R2= Xyl, R3=H异黄酮、二氢异黄酮异黄酮、二氢异黄酮10ppt课件课件大豆异黄酮对身体雌激素的双向调节作用对身体雌激素的双向调节作用 抗癌作用抗癌作用 降低胆固醇，预防动脉硬化降低胆固醇，预防动脉硬化 改善骨质疏松改善骨质疏松 预防冠心病预防冠心病 美国的食品

5、药物管理局（美国的食品药物管理局（FDAFDA）把大豆列为）把大豆列为能够能够“真正降低心脏病危险的食品真正降低心脏病危险的食品”之一之一 11ppt课件课件654732O1OCH165432456123O165432OHOOCHHOOHOH查耳酮、橙酮查耳酮、橙酮12ppt课件课件OOHOOHOHR2R1OHHO矢车菊素：矢车菊素：R1 = OH, R2 = H飞燕草素：飞燕草素：R1 = R2 = OH天竺葵素：天竺葵素：R1 = R2 = H锦葵花素：锦葵花素：R1 = R2 = OCH3OOHR黄烷黄烷-3-醇醇R = H黄烷黄烷-3,4-二醇二醇R = OH儿茶素：儿茶素：抗癌活性抗

6、癌活性OOHOHHOOHOHOOHOHHOOHOHOOHOHHOOHOOHOHHOOHOOHOHHOOOHOHHOOO麻黄宁麻黄宁A/B：抗癌活性抗癌活性花色素、黄烷醇花色素、黄烷醇13ppt课件课件 羟基羟基 甲氧基甲氧基 亚甲二氧基亚甲二氧基 -OCH2O- 异戊烯基异戊烯基 常和糖形成苷常和糖形成苷三、黄酮类化合物中常见的取代基三、黄酮类化合物中常见的取代基14ppt课件课件黄酮苷：黄酮苷： 糖的种类：糖的种类：v 单糖苷单糖苷v 双糖苷双糖苷v 叁糖苷叁糖苷v 酰化糖苷酰化糖苷 糖的连接方式：糖的连接方式：v O-糖苷糖苷v C-键苷键苷葛根素（葛根素（puerarin）扩张冠状动脉扩

7、张冠状动脉OOOHHOOHOHOHOOH15ppt课件课件中文名英文名缩写D-葡萄糖D-glucoseD-GlcD-半乳糖D-galactoseD-GalD-甘露糖D-mannoseD-ManD-葡萄糖醛酸D-glucuronic acidD-GluAD-半乳糖醛酸D-galacturonic acidD-GalAL-鼠李糖L-rhamnoseL-RhaL-阿拉伯糖L-arabinoseL-AraD-木糖D-xyloseD-Xyl黄酮苷中常见的单糖黄酮苷中常见的单糖16ppt课件课件四、黄酮类化合物命名母核加上取代基OO12345678123456OHOHHO7, 3 , 4 -三羟基黄酮三羟

8、基黄酮7, 3 , 4 -trihydroxyflavone5, 7, 3 -三羟基三羟基-4 -甲氧基二甲氧基二氢黄酮氢黄酮5, 7, 3 -trihydroxy- 4 -methoxy-flavanoneOOOHHOOHOCH317ppt课件课件OOOOHglc7, 4 -二羟基黄酮二羟基黄酮-7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷7, 4 -dihydroxy-flavone-7-O-glucosideOOOOHOOOCH37, 4 -二羟基黄酮二羟基黄酮-7-O-鼠李糖基（鼠李糖基（ 16 ）葡萄糖苷）葡萄糖苷7, 4 -dihydroxy-flavone-7-O- -L-rhamnosyl （16

9、） -D-glucoside18ppt课件课件1.对对心血管系统心血管系统的作用的作用 降低血管脆性及异常的通透性降低血管脆性及异常的通透性 芦丁、橙皮苷芦丁、橙皮苷 扩冠作用扩冠作用 如：如：槲皮素、葛根素槲皮素、葛根素 降低血脂及胆固醇的作用降低血脂及胆固醇的作用2.有有抗肝脏毒抗肝脏毒活性活性 如：如：水飞蓟素、儿茶素水飞蓟素、儿茶素3.抗炎抗炎作用作用 如：如：芦丁、羟乙基芦丁等芦丁、羟乙基芦丁等 4.雌激素雌激素样作用样作用 如：如：染料木素、大豆素染料木素、大豆素等等19ppt课件课件5.抗菌抗菌作用作用 如：如：木犀草素、黄芩素、黄芩苷木犀草素、黄芩素、黄芩苷6.抗病毒抗病毒作用

10、作用 如：如：槲皮素、山柰酚槲皮素、山柰酚等等7.泻下泻下作用作用 如：如：营实苷营实苷A8.解痉解痉作用作用 如：如：异甘草素、大豆素异甘草素、大豆素等等9.其它作用其它作用 止咳、祛痰、平喘等作用止咳、祛痰、平喘等作用20ppt课件课件性性 状状： 黄酮类化合物多为晶性固体，少数为无定形粉末。黄酮类化合物多为晶性固体，少数为无定形粉末。 第二节 黄酮类化合物的理化性质 及显色反应一、性状一、性状游离苷元游离苷元：二氢黄酮（醇）、黄烷（醇）有旋光性二氢黄酮（醇）、黄烷（醇）有旋光性 其余黄酮类化合物无旋光性。其余黄酮类化合物无旋光性。 苷苷 类类：因为糖分子的引入，具有旋光性，且多为左因为糖

11、分子的引入，具有旋光性，且多为左旋。旋。旋光性：旋光性：21ppt课件课件OOOOOOHOOHOO颜颜 色色： 黄酮（醇）及其苷黄酮（醇）及其苷：显灰黄：显灰黄-黄色。黄色。 若若7-及及4-位引入位引入-OH 和和OCH3等，颜色加深。等，颜色加深。 查尔酮查尔酮：显黄：显黄-橙黄色。橙黄色。 二氢黄酮（醇）及异黄酮二氢黄酮（醇）及异黄酮：不显色或显微黄色。：不显色或显微黄色。 花色苷及苷元花色苷及苷元：颜色随：颜色随pH不同而变化不同而变化 ： pH8.5 显兰色显兰色。OOOOOO+_+灰黄灰黄黄黄无色无色无色无色红色红色22ppt课件课件溶于水、乙醇、甲醇等强极性溶剂中，羟基越多，溶于

12、水、乙醇、甲醇等强极性溶剂中，羟基越多，糖链越长，则水溶性越大。糖链越长，则水溶性越大。 二、溶解度二、溶解度苷元苷元：难溶或不溶于水，易溶于有机溶剂及稀碱液中。难溶或不溶于水，易溶于有机溶剂及稀碱液中。黄酮、黄酮醇、查尔酮等平面型分子难溶于水；黄酮、黄酮醇、查尔酮等平面型分子难溶于水；二氢黄酮、二氢黄酮醇等因系非平面型分子，二氢黄酮、二氢黄酮醇等因系非平面型分子， 水溶性稍大。水溶性稍大。黄酮苷黄酮苷：黄酮（醇），查耳酮黄酮（醇），查耳酮 平面型分子平面型分子 二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇） 非平面型分子非平面型分子花色素花色素 离子离子23ppt课件课件因分子中多有酚羟基，故显酸性，可溶于碱

13、性水因分子中多有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酚羟基溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酚羟基数目及位置对酸性影响：数目及位置对酸性影响：三、酸性和碱性三、酸性和碱性（一）酸性（一）酸性7，4 -二二OH7或或4 -OH一般酚一般酚OH5-OH7或或4 -OH 5-OH 一般酚一般酚OHOOHOOHOHOH24ppt课件课件PH梯度萃取：梯度萃取：7 、4二二OH 7或或4OH 一般酚一般酚OH 5OH 3OH 7，4-OH 7或或4-OH 其他酚其他酚-OH 5-OH NaHCO3 + - - - Na2CO3 + + - - NaOH + + + + 2

14、5ppt课件课件OHOOOH32OOHOHO1OOHOOH4OHOOOH26ppt课件课件 （二）（二） 碱性碱性 -吡喃酮环上的吡喃酮环上的1-位氧原子位氧原子，因有未共用的电子对，故，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，但生成的盐，但生成的钅羊钅羊盐盐极不稳定，加水后即可分解。极不稳定，加水后即可分解。 黄酮类化合物溶于浓黄酮类化合物溶于浓H2SO4中生成的盐，常常表现特殊中生成的盐，常常表现特殊的颜色（深黄色），可用于鉴别。的颜色（深黄色），可用于鉴别。也可以与生物碱试剂反应，发生沉淀。也可以与生物

15、碱试剂反应，发生沉淀。 OOOOHClHClH2O27ppt课件课件四、显色反应四、显色反应黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚OH及及吡喃酮环有关：吡喃酮环有关：类别黄酮黄酮醇二氢黄酮查耳酮 异黄酮橙酮盐酸- -镁粉黄红 红紫红红、紫、蓝盐酸- -锌粉红紫红紫红硼氢化钠蓝紫红硼酸- -柠檬酸绿黄绿黄黄醋酸镁黄黄蓝黄黄三氯化铝黄黄绿蓝绿黄黄淡黄氢氧化钠水溶液黄深黄黄橙( (冷) )深红紫( (热) )橙红黄红紫红浓硫酸黄橙黄橙橙紫橙、紫黄红、洋红28ppt课件课件1. 盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应 含黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）含黄酮（醇）、二氢黄酮（醇） （+

16、）橙红色）橙红色-紫红色紫红色 查耳酮、橙酮、黄烷（醇）类查耳酮、橙酮、黄烷（醇）类 （-）不显色）不显色 操作方法：操作方法：1ml 样品样品 + Mg粉粉 + 几滴浓几滴浓HCl花色素及部分橙酮、查耳酮在浓盐酸中也会变色花色素及部分橙酮、查耳酮在浓盐酸中也会变色 （一）还原反应（一）还原反应29ppt课件课件2. 四氢硼钠反应四氢硼钠反应对二氢黄酮（醇）类化合物专属性较高对二氢黄酮（醇）类化合物专属性较高OHOOHHHHHOHOOHOOHHHHHOCHOHCHCHOHX-OHCHHOCHCHOHX-H+-H2ONaBH4红色或紫红色红色或紫红色操作：操作：在试管中加入在试管中加入0.1ml

17、含有样品的乙醇溶液，再加等量含有样品的乙醇溶液，再加等量2%NaBH4的甲醇溶液，一分钟后加浓盐酸或浓硫酸数滴。的甲醇溶液，一分钟后加浓盐酸或浓硫酸数滴。30ppt课件课件OHOOOHOOHOH（二）金属盐类试剂的络合反应（二）金属盐类试剂的络合反应有上述结构的化合物与铝盐，铅盐，锆盐，镁盐有上述结构的化合物与铝盐，铅盐，锆盐，镁盐等试剂反应生成有色络合物。等试剂反应生成有色络合物。31ppt课件课件OOOOOOOOAlAlOOAl ClCl2Cl21. 三氯化铝显色反应三氯化铝显色反应与与AlCl3反应显黄色或黄色加深，反应显黄色或黄色加深，UV下呈现荧下呈现荧光增强。光增强。32ppt课件

18、课件OOOZrHOOHOHOHOClH2O3-或或5-OH黄酮：生成黄色络合物黄酮：生成黄色络合物3-OH络合物比络合物比5-OH络合物稳定络合物稳定加入枸橼酸（柠檬酸）加入枸橼酸（柠檬酸） 5-OH络合物解离络合物解离 2. 2. 锆盐锆盐-枸橼酸显色反应枸橼酸显色反应 2%二氯氧锆（二氯氧锆（ZrOCl2 ）甲醇溶液）甲醇溶液33ppt课件课件OSrO+H2OOHOHSr2+/ OH-在氨性甲醇溶液中，邻二酚羟基黄酮类化合在氨性甲醇溶液中，邻二酚羟基黄酮类化合物生成物生成绿色绿色棕色棕色黑色沉淀。黑色沉淀。4. 氨性氯化锶（氨性氯化锶（SrCl2）反应）反应3.镁盐：镁盐： 醋酸镁甲醇溶液

19、：二氢黄酮（醇）醋酸镁甲醇溶液：二氢黄酮（醇）-天蓝色荧光天蓝色荧光 黄酮（醇）及异黄酮黄酮（醇）及异黄酮-黄黄-橙橙-褐褐34ppt课件课件CABD用显色反应鉴别下列化合物：用显色反应鉴别下列化合物：35ppt课件课件盐酸盐酸-镁粉：镁粉：四氢硼钠：四氢硼钠：AlCl3反应：反应：Mg(OAc)2反应：反应：ZrOCl2+柠檬酸：柠檬酸：总结：总结：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）二氢黄酮二氢黄酮3-OH, 5-OH和邻二酚羟基和邻二酚羟基二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）判断判断3-OH或或5-OH36ppt课件课件鉴别鉴别( (化学方法化学方法) )OOOHOHHOOOOH

20、OHHOOOOHOHHOOHOGlcOOOHOHHOOH37ppt课件课件练习：写出下列化合物的结构式并用化学反应鉴别1.5, 7, 4 -三羟基-黄酮醇和5,7, 3 ,4 -三羟基-黄酮醇2. 5, 7, 4 -三羟基-黄酮醇和5,7, 4 -三羟基-黄酮3. 5, 7, 4 -三羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷 和5,7, 4 -三羟基-黄酮38ppt课件课件氯仿、乙醚、乙酸乙酯等氯仿、乙醚、乙酸乙酯等第三节 黄酮类化合物的提取与分离一、提取一、提取黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，一般多以苷黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，一般多以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中，则多以游离苷的形式存在

21、，而在木部坚硬组织中，则多以游离苷元形式存在。元形式存在。苷及极性稍大苷元：苷及极性稍大苷元：丙酮、乙酸乙酯、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、乙醇、甲醇、水或极性较大的水或极性较大的混合溶剂混合溶剂苷元：苷元： 甲氧基苷元：苯甲氧基苷元：苯39ppt课件课件常用粗提物的精制方法：常用粗提物的精制方法： （一）碱提取酸沉淀法（一）碱提取酸沉淀法 （二）溶剂萃取法（二）溶剂萃取法 40ppt课件课件（一）碱提取酸沉淀法：（一）碱提取酸沉淀法： 由于黄酮苷易溶于碱性水，故可用碱性水提取，然后加由于黄酮苷易溶于碱性水，故可用碱性水提取，然后加酸使之沉淀出来。酸使之沉淀出来。槐花米6倍量水，煮沸缓慢加入石灰

22、乳至pH8-9, 微沸20-30分钟，过滤滤液 药渣6倍量水，煮沸缓慢加入石灰乳至pH8-9, 微沸20-30min，过滤滤液 药渣60-70下用HCl调pH至5.0静置24h,抽滤滤液沉淀（弃去）水洗至中性，60干燥总黄酮（主要为芦丁）41ppt课件课件石灰乳提取黄酮类化合物的优、缺点：石灰乳提取黄酮类化合物的优、缺点：优点：使含有多羟基的鞣质，或含有羧基的果胶、粘优点：使含有多羟基的鞣质，或含有羧基的果胶、粘 液质等水溶性的杂质生成钙盐沉淀，不被溶液质等水溶性的杂质生成钙盐沉淀，不被溶 岀，有利于浸岀液的纯化。岀，有利于浸岀液的纯化。缺点：浸岀效果可能不如稀缺点：浸岀效果可能不如稀NaOH

23、水溶液，且有些黄酮水溶液，且有些黄酮 类化合物可能与钙结合成不溶性物质不被溶岀。类化合物可能与钙结合成不溶性物质不被溶岀。注意：在碱提酸沉法中，酸、碱的浓度不宜过高。注意：在碱提酸沉法中，酸、碱的浓度不宜过高。 碱性过高，破坏母核；酸性过强，生成碱性过高，破坏母核；酸性过强，生成钅羊钅羊 盐盐42ppt课件课件（二）溶剂萃取法：（二）溶剂萃取法：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂的醇浸液，可用

24、石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。溶性色素。而某些水提取液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去而某些水提取液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。蛋白质、多糖类等水溶性杂质。一方面去除杂质，另一方面将黄酮按极性大小分离。一方面去除杂质，另一方面将黄酮按极性大小分离。脂溶性杂质：脂溶性杂质：叶绿素、胡萝叶绿素、胡萝卜素等卜素等黄酮苷元黄酮苷元黄酮苷黄酮苷正丁醇药材醇提液悬浮于水中石油醚氯仿43ppt课件课件 二、分离二、分离 （一）（一）pHpH梯度萃取法梯度萃取法 （二）柱色谱法（二）柱色谱法 44ppt课件课件（一）（一）pH梯度萃取法梯度萃取法Na2CO3不同

25、浓度NaOHNaHCO3酸性： 7，4-二OH 7-或4-OH 一般酚OH 5-OHOOHOHOOOOHOOHOHOOHOOHOHOOH45ppt课件课件（二）柱色谱法（二）柱色谱法 常用吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等，常用吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等，也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土。1硅胶柱色谱：硅胶柱色谱：此法应用范围最广，此法应用范围最广，主要适于主要适于苷元的苷元的分离分离，异黄酮、异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化的黄酮及黄酮二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化的黄酮及黄酮醇类醇类。少数情况下，在加水去活化后也可用于分离少数情况下，在加

26、水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。常用常用CHCl3-MeOH作为流动相。作为流动相。46ppt课件课件硅胶柱上各种溶剂的洗脱能力：硅胶柱上各种溶剂的洗脱能力： 石油醚石油醚 苯苯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 醋酸乙酯醋酸乙酯 吡啶吡啶 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水OOHOOHOHOOHOOHOHOH硅胶柱色谱，以硅胶柱色谱，以CHCl3-MeOH作为流动相作为流动相47ppt课件课件 通过分子中的酰胺羰基与黄酮类化合物分子上的酚羟通过分子中的酰胺羰基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生吸附作用。基形成氢键缔合

27、而产生吸附作用。 吸附的强度取决于分子中羟基的数目、位置及溶剂与吸附的强度取决于分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。 聚酰胺柱上溶剂的洗脱能力：聚酰胺柱上溶剂的洗脱能力：2聚酰胺柱色谱聚酰胺柱色谱 原理：原理：水水 甲醇甲醇 丙酮丙酮 NaOH水溶液水溶液 甲酰胺甲酰胺 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺 具有羰基具有羰基对对位（或间位）位（或间位）OH黄酮类化合物的洗脱规律：黄酮类化合物的洗脱规律：（1）苷元相同，三糖苷）苷元相同，三糖苷 二糖苷二糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元 （2）母核上增加）母核上增加-O

28、H，洗脱速度减慢（注意形成分子内，洗脱速度减慢（注意形成分子内氢键的特殊情况）。氢键的特殊情况）。OOHOHOOOHOOH OOHOHOOOHOOOHOHOOH49ppt课件课件（4）分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强）分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强 如二氢黄酮如二氢黄酮查尔酮。查尔酮。（3）异黄酮）异黄酮二氢黄酮醇二氢黄酮醇黄酮黄酮黄酮醇黄酮醇OOHOOHOHOHOOHOOHOHOOHOHOOHOHOOOH50ppt课件课件OOHOHOOHOHOOHOHOOHOHOHOOHOHOOHOHHOOOOHOOHOHrha-glcABCDOH51ppt课件课件v 黄酮类化合物的检识与结构测定现在

29、多依赖于黄酮类化合物的检识与结构测定现在多依赖于各种类型光谱的综合解析，化学方法和色谱方法各种类型光谱的综合解析，化学方法和色谱方法已降至辅助地位。已降至辅助地位。v 对于一个未知的黄酮类化合物的鉴定，首先测对于一个未知的黄酮类化合物的鉴定，首先测定分子式，与标准品或文献对照定分子式，与标准品或文献对照PC或或TLC的的Rf值，值，测测UV，加入各种诊断试剂，观察光谱的变化，根，加入各种诊断试剂，观察光谱的变化，根据各种化学试剂确定某些基团。但更说明问题的据各种化学试剂确定某些基团。但更说明问题的是是1H NMR、13C NMR和和MS。第四节 鉴 定52ppt课件课件一、黄酮类化合物的色谱检

30、识方法1.薄层色谱法（TLC）2. 纸色谱法（PC)53ppt课件课件1. 薄层色谱法薄层色谱法 一般采用吸附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚酰胺。一般采用吸附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚酰胺。（1）硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱: 用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物 分离苷元常用展开剂：甲苯分离苷元常用展开剂：甲苯-甲酸甲酯甲酸甲酯-甲酸；氯仿甲酸；氯仿-甲醇等。甲醇等。 （2）聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱：分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元。：分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元。 展开剂：具有较强的极性，大多含有醇、酸或水展开剂：具有较强的极性，大多含有醇、酸或水 如：乙醇水（如：

31、乙醇水（3：2），）， 水乙醇甲酸乙酰丙酮水乙醇甲酸乙酰丙酮(5:1.5:1:0.5)54ppt课件课件PC原 点B A WCBAOOOHOHOHOHOHOOOHOCH3OHOHOHOOH3COOCH3OHOHOHABC55ppt课件课件聚酰胺薄层聚酰胺薄层(乙醇水）乙醇水）BADCOOOHglc-OAOOOHglc-OBOOOHglc-OOHOOOHglc-OOHCDOH56ppt课件课件2纸色谱法（纸色谱法（PC) PC适于分离各种天然黄酮类化合物及其苷适于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类的混合物。类的混合物。黄酮苷：一般采用双向展开黄酮苷：一般采用双向展开 样BAW第一向第二向样HOAc

32、57ppt课件课件58第二相展开采用水性展开剂第二相展开采用水性展开剂 如：如：26% HOAc水溶液水溶液 3% NaCl 水溶液水溶液 HOAc:浓浓HCl:H2O= 30: 3 : 10层析行为层析行为: 连接糖链越长连接糖链越长, Rf 越大越大(0.5); 苷元苷元Rf较小，有的留在原点。较小，有的留在原点。ABCDABCD58ppt课件课件 第第I向向 醇性展开剂醇性展开剂 第第II向向 水性展开剂水性展开剂（BAW、TBA、水饱和正丁醇）、水饱和正丁醇） （28%HAc、3%NaCl、1%HCl） 正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱固定相（水）极性固定相（水）极性 流动相流动相

33、（ 有认为是吸附原理）有认为是吸附原理）Rf规律：极性小的化合物规律：极性小的化合物Rf大大 极性大的化合物极性大的化合物Rf大大 苷元苷元单糖苷单糖苷双糖苷双糖苷 Rf规律与左边相反规律与左边相反母核相同，二母核相同，二-OH三三-OH四四-OH五五-OH黄酮黄酮 主要应用：苷元的分离鉴别主要应用：苷元的分离鉴别 黄酮苷及花色素类的分离鉴别黄酮苷及花色素类的分离鉴别双相色谱双相色谱59ppt课件课件60纸层析（纸层析（PC）：采用双向纸层析）：采用双向纸层析。苷元苷元:平面型分子平面型分子: 黄酮黄酮(醇醇)、查耳酮的、查耳酮的Rf小小, 几乎留在几乎留在 原点不动原点不动(Rf 0.02)

34、;非平面型分子非平面型分子: 二氢黄酮二氢黄酮(醇醇)、二氢查耳酮的、二氢查耳酮的Rf大大, 因亲水性较强因亲水性较强(Rf 0.10-0.30)。层析检查方法：层析检查方法：观察荧光观察荧光,用紫外光灯照射看到有色斑点，用紫外光灯照射看到有色斑点，NH3处处理理 产生明显的色变。产生明显的色变。用用2%AlCl3甲醇液喷雾甲醇液喷雾,UV灯下呈亮黄色荧光斑点灯下呈亮黄色荧光斑点。60ppt课件课件有下列四种黄酮类化合物有下列四种黄酮类化合物A、R1R2HB、R1H, R2RhaC、R1Glc, R2HD、R1Glc, R2RhaOR2OOHOOHOR1比较其酸性及极性的大小比较其酸性及极性的

35、大小: 酸性酸性( )( )( )( ) 极性极性( )( )( )( )比较这四种化合物在如下三种色谱中比较这四种化合物在如下三种色谱中Rf值大小顺序值大小顺序:(1)硅胶硅胶TLC(条件条件CHCl3MeOH 4:1展开展开), Rf值值( )( )( )( )(2)聚酰胺聚酰胺TLC(条件条件60%甲醇甲醇水展开水展开), Rf值值( )( )( )( )(3)纸色谱纸色谱(条件条件8%醋酸水展开醋酸水展开), Rf值值( )( )( )( )61ppt课件课件第五节第五节 结构测定结构测定一般研究程序：一般研究程序：（1）测定试样在甲醇溶液中的）测定试样在甲醇溶液中的UV光谱；光谱；（

36、2）测定试样在甲醇溶液中加入各种诊断）测定试样在甲醇溶液中加入各种诊断 试剂后得到的试剂后得到的UV及可见光谱，进行比较及可见光谱，进行比较诊断试剂：诊断试剂：NaOCH3 ,NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl（3）各种）各种UV-可见光谱图的对比分析。可见光谱图的对比分析。62ppt课件课件OO（一）在甲醇中的紫外光谱（一）在甲醇中的紫外光谱 判断骨架类型判断骨架类型63ppt课件课件1黄酮及黄酮醇类：黄酮及黄酮醇类：带带与带与带图形相似图形相似（1）区别：带）区别：带位置不同：位置不同： 黄酮类：黄酮类： 304350 nm 黄酮醇（黄酮醇（3OH游离

37、）：游离）：352385 nm 黄酮醇（黄酮醇（3OH取代）：取代）：328357 nmOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOOH带带I350 nm64ppt课件课件带带：母核上引入：母核上引入OH或或OCH3等供电基，红移等供电基，红移3，5，7三羟基黄酮（高良姜素）三羟基黄酮（高良姜素） 3593，5，7，4四羟基黄酮（山奈酚）四羟基黄酮（山奈酚） 367 红红3，5，7，3，4五羟基黄酮（槲皮素）五羟基黄酮（槲皮素） 370 移移3，5，7，3，4，5六羟基黄酮（杨梅素）六羟基黄酮（杨梅素） 374（2）变化规律：）变化规律：65ppt课件课件黄酮黄酮 2507-羟基黄酮羟基黄酮 25

38、25-羟基黄酮及羟基黄酮及5,7-二羟基黄酮二羟基黄酮 262 红移红移5,6,7-三羟基黄酮三羟基黄酮 2745,7,8-三羟基黄酮三羟基黄酮 281 4氧取代：氧取代： 单峰单峰 3,4二氧取代：二氧取代： 双峰（或肩峰）双峰（或肩峰）带带：主要受：主要受A 环影响，环影响，A环上引入环上引入OH或或OCH3，红移；，红移； B环上引入环上引入OH或或OCH3，仅改变峰形，仅改变峰形A:B:66ppt课件课件2查耳酮及橙酮：查耳酮及橙酮：带带 很强，而带很强，而带较弱较弱 查耳酮查耳酮 带带：220270nm 带带：340390 Ia：340 390 nm Ib：300 320 nm引入引

39、入OH或或OCH3，红移，尤其带，红移，尤其带，2-OH影响最大影响最大 查耳酮查耳酮 312 4-羟基查耳酮羟基查耳酮 320 4-羟基查耳酮羟基查耳酮 350 2,4,4-三羟基查耳酮三羟基查耳酮 370OHO12345612345667ppt课件课件OHHOOHOOCHOHOHHOO带带I390 nm68ppt课件课件3异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇：异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇：带带带带, 带带常表现为肩峰。常表现为肩峰。 异黄酮：带异黄酮：带245270nm 二氢黄酮、二氢黄酮醇：带二氢黄酮、二氢黄酮醇：带：270295nm69ppt课件课件OOHglcOOrhamOHOOHOHOOH

40、带带II270 nm70ppt课件课件71峰形峰形带带II（240285nm，苯甲酰系统）苯甲酰系统）带带I（300400nm，桂皮酰系统）桂皮酰系统）类型类型取代取代240-285304-350黄酮类黄酮类OH取代可以取代可以使相应的带使相应的带I或或I I红移，环红移，环具有具有,4羟羟基，带基，带II为双为双峰峰328-385黄酮醇类黄酮醇类（3-OR）352-385黄酮醇类黄酮醇类（3-OH）245-270300-400异黄酮类异黄酮类B环环OH和和OMe对带对带I影响不大影响不大270-295二氢黄酮二氢黄酮220-270340-390查尔酮类查尔酮类2-OH使带使带I红红移移370

41、-430橙酮类橙酮类带带I有有3-4个小个小峰峰71ppt课件课件（二）加入诊断试剂后的紫外光谱（二）加入诊断试剂后的紫外光谱常用的诊断试剂：常用的诊断试剂： 甲醇钠甲醇钠(NaOCH3) 醋酸钠醋酸钠(NaOAc) 醋酸钠醋酸钠/硼酸硼酸(NaOAc/H3BO3) 三氯化铝三氯化铝(AlCl3) 三氯化铝三氯化铝/盐酸盐酸(AlCl3/HCl)72ppt课件课件1. NaOMe：碱性强，酚碱性强，酚OH易形成钠盐。易形成钠盐。PhOHPhO-Na+，从而增加电子云密度和流动性，从而增加电子云密度和流动性 红移红移。2. NaOAc： 未熔融未熔融: 碱性较弱，只能使黄酮母核上酸性较强碱性较弱

42、，只能使黄酮母核上酸性较强 的酚的酚OH解离而使解离而使UV谱谱红移红移。 熔熔 融融：碱性碱性 ,表现出与表现出与NaOMe类似的效果。类似的效果。73ppt课件课件3. NaOAc/H3BO3：用于鉴定邻二酚用于鉴定邻二酚OH。 在醋酸钠碱性下，邻二酚在醋酸钠碱性下，邻二酚OH与硼酸络合，引起峰与硼酸络合，引起峰带带红移红移。OOOOBOHOH74ppt课件课件 4. AlCl3: 5. AlCl3 /HCl： 分子中有分子中有3-OH，5-OH，邻二酚，邻二酚OH时，可与时，可与Al3+络合，引络合，引 起吸收峰起吸收峰红移红移。 铝络合物稳定性铝络合物稳定性： 黄酮醇黄酮醇3-OH 黄

43、酮黄酮5-OH 二氢黄酮二氢黄酮5-OH 邻二酚邻二酚OH 二氢黄酮醇二氢黄酮醇3-OHOOOOAl+HOOAl+75ppt课件课件加入诊断试剂后的紫外光谱加入诊断试剂后的紫外光谱 确定取代基（确定取代基（OH）位置）位置1. MeOH+MeONa 确定确定4-OH， 3-OHNaOMe碱性强，酚碱性强，酚OH易形成钠盐。易形成钠盐。PhOHPhO-Na+，从而增加电子云密度和流动性从而增加电子云密度和流动性 红移红移。如带如带I红移红移40-60nm，强度不变或增强，示有强度不变或增强，示有4-OH。如带如带I红移红移50-60nm，强度减弱，示有强度减弱，示有3-OH，无无4-OH。含有含

44、有3,4-二二OH，或或3,3,4-三三OH，5,6,7或或5,7,8或或5,3,4-三三OH黄酮，在甲醇钠碱性下氧化分解，吸收带随测定时间延长黄酮，在甲醇钠碱性下氧化分解，吸收带随测定时间延长而衰退。而衰退。 76ppt课件课件268333386OOGlcOOHOH267367OOHOOHOMeOH411280MeOHMeONa200 300 400 500200 300 400 50077ppt课件课件 醋酸钠的碱性比甲醇钠小，只能使黄酮类化合物醋酸钠的碱性比甲醇钠小，只能使黄酮类化合物母核上酸性较强的酚羟基解离。母核上酸性较强的酚羟基解离。7-OH: 带带II向红位移向红位移5-20nm

45、； 带带I长波一侧有明显肩峰，示有长波一侧有明显肩峰，示有4-OH， 但但无无3-及及7-OH。4-OH：带带I红移红移40-65nm，强度下降。强度下降。 78ppt课件课件 7-OH 带带 II红移红移 5-20 nm269327276358OOHOOHOHMeOHNaOAc200 300 400 50079ppt课件课件3. MeOH+NaOAc+H3BO3 确定邻二酚确定邻二酚OH黄酮类化合物中如果具有邻二酚羟基结构时，可黄酮类化合物中如果具有邻二酚羟基结构时，可在醋酸钠碱性下，与硼酸络合，并使相应吸收带在醋酸钠碱性下，与硼酸络合，并使相应吸收带向红位移。向红位移。黄酮类化合物与硼酸形

46、成的络合物黄酮类化合物与硼酸形成的络合物B环有邻二酚羟基带环有邻二酚羟基带I向红位移向红位移12-30nm；A环有邻二酚羟基带环有邻二酚羟基带II向红位移向红位移5-10nm。 OOOOBOHOHOOBHOHOAB80ppt课件课件OHOOHOHOHOOHOOHOHOHOOH81ppt课件课件OOOOAl2+OOOHOHHOHCl/H2OOOOHOHHOHOOHOAlOAl2+2+AlCl3OOOOAl+OAlOOOHOHOHHO2+HCl/H2OOOOHOHOAl2+HOHOAlCl3OOOOAl2+OOOHOHHOHOHCl/H2OAlCl3 4. AlCl3及及AlCl3/HCl 确定确

47、定3-OH，5-OH，邻二酚，邻二酚OH络合物稳定性：络合物稳定性：3-OH（黄酮醇）（黄酮醇）5-OH（黄酮）（黄酮） 5-OH（二氢黄酮）（二氢黄酮）邻二酚羟邻二酚羟3-OH（二氢黄酮醇）（二氢黄酮醇）82ppt课件课件 4. AlCl3及及AlCl3/HCl3-OH,4-C=O5-OH,4-C=O邻二邻二Ar-OHAlCl3HCl 不分解不分解 不分解不分解 分解分解稳定性稳定性AlCl3/HCl AlCl3 MeOH判断邻二判断邻二Ar-OH的有无、位的有无、位置置判断分子中判断分子中3-OH,5-OH的有的有无无83ppt课件课件3-OH,4-C=O5-OH,4-C=O邻二邻二Ar-

48、OHAlCl3HCl 不分解不分解 不分解不分解 分解分解稳定性稳定性AlCl3/HCl AlCl3 无邻二无邻二Ar-OHAlCl3/HCl AlCl3 有邻二有邻二Ar-OH带带 - 3040nm B环有环有 - 5060nm A、B环均可能有环均可能有84ppt课件课件OOOHHOOHOHOglc 61rhaAlCl3 AlCl3/HCl -43nmB环有邻二环有邻二Ar-OH85ppt课件课件3-OH,4-C=O5-OH,4-C=O邻二邻二Ar-OHAlCl3HCl 不分解不分解 不分解不分解 分解分解稳定性稳定性AlCl3/HCl MeOH 无无3-OH，无，无5-OHAlCl3/H

49、Cl MeOH 可能有可能有3-OH、5-OH带带 + 3555nm 只有只有5-OH + 60nm 只有只有3-OH + 5060nm 可能同时有可能同时有3-OH、5-OH + 1720nm 除除5-OH,尙有尙有6-O-86ppt课件课件252307268333MeOHAlCl3AlCl3/HClOOHOOOGlcOOHOHAlCl3/HCl = AlCl3AlCl3/HCl = AlCl3=MeOH200 300 400 500200 300 400 50087ppt课件课件OOOHOHAlCl3/HCl = MeOHMeOHAlCl3AlCl3/HCl200 300 400 5008

50、8ppt课件课件89诊断试剂对黄酮类化合物UV谱图的影响及结构的关系诊断试剂诊断试剂带带II带带I归属归属NaOCH3红移红移40-60nm, 强度不降强度不降示有示有4-OH红移红移50-60nm, 强度下降强度下降示有示有3-OH, 但无但无4-OH吸收谱随时间延长而衰退吸收谱随时间延长而衰退示有对碱敏感的取代方式示有对碱敏感的取代方式NaOAc（未熔融）（未熔融）红移红移5-20nm在长波一侧有在长波一侧有明显肩峰明显肩峰示有示有7-OH示有示有4-OH，但无，但无3或或7-OHNaOAc（熔融）（熔融）红移红移40-65nm强度下降强度下降示有示有4-OH吸收谱随时间延长而衰退吸收谱随