生物科学专业毕业论文范本(干旱胁迫对大黄种子萌发的影响).doc
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1、XXX年度本科生毕业论文(设计)干旱胁迫对大黄种子萌发的影响院 系:生命科学与技术学院 专 业:生物科学 年 级:XX 学生姓名:XX 学 号:XXXX 导师及职称:XXXXX 20XX年XX月2018 Annual Graduation Thesis (Project) of the College Undergraduate Effect of Drought Stress on Rheum palmatum L. Seed GerminationDepartment: College of Life Science and TechnologyMajor: BioscienceGrade
2、: 2014Students Name: Zhou ting-qingStudent No.: 201401130142Tutor: Lecturer Shen Yun-meiApril, 2018毕业论文(设计)原创性声明本人所呈交的毕业论文(设计)是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文(设计)不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本论文(设计)的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名: 日期: 毕业论文(设计)授权使用说明本论文(设计)作者完全了解XX学院有关保留、使用毕业论文(设计)的规定,
3、学校有权保留论文(设计)并向相关部门送交论文(设计)的电子版和纸质版。有权将论文(设计)用于非赢利目的的少量复制并允许论文(设计)进入学校图书馆被查阅。学校可以公布论文(设计)的全部或部分内容。保密的论文(设计)在解密后适用本规定。 作者签名: 指导教师签名:日期: 日期: XXXX 毕业论文(设计)答辩委员会(答辩小组)成员名单姓名职称单位备注教授组长讲师高级实验师讲师 XX学院本科毕业论文 (设计)摘 要本文探究大黄种子萌发对不同浓度PEG干旱胁迫的响应规律,以大黄种子为实验材料,设置5个不同的PEG浓度0、5、10、20、25,对大黄种子进行处理试验,测定大黄种子的发芽指标及抗氧化酶的活
4、性。结果表明,在不同浓度PEG作用下,随着浓度的增大,不同浓度的PEG溶液对大黄种子的萌发呈“低促高抑”的规律;幼苗根长呈先上升后下降的趋势,苗高呈下降趋势;CAT酶活性呈上升的趋势,SOD酶和POD酶活性则呈先上升后下降的趋势。结论:干旱胁迫对大黄种子萌发的影响规律是“低促高抑”,低浓度促进大黄种子萌发和幼苗根的生长,高浓度抑制大黄种子萌发和幼苗根的生长。关键词:聚乙二醇;干旱胁迫;大黄种子;发芽指标;抗氧化酶ABSTRACTThis article explores Rheum palmatum L. seeds germination of different concentration
5、s of PEG drougut stress response. It sets up five different concentrations of PEG were :0、5、10、20、25,to deal with Rheum palmatum L. seeds. Then we measured the germination indexs,and the activity of antioxidant enzymes. The results showed that ,Under the action of different concentration PEG, with t
6、he increase of concentration, the burdock seeds germination inhibition. Rheum palmatum L.germination of was low and high.;CAT enzyme shows ascendant trend, SOD and POD enzyme is a trend of decline after rising first. Conclusion: lDrought stress on the influence law of Rheum palmatum L seed germinati
7、on is promote high suppression low, low concentration promotes Rheum palmatum L seed germination and seedling root growth, high concentration of inhibition of Rheum palmatum L seed germination and seedling root growth.Key words: Polyethylene glycol(PEG);Drought stress;Rheum palmatum L;Indicators of
8、germination;Antioxidant enzymes 目录1.前言11.1国内外研究现状11.2研究目的及意义12.材料与方法32.1实验材料32.2实验仪器与试剂32.3实验方法33.实验结果与分析73.1干旱胁迫对大黄种子萌发影响73.2干旱胁迫对大黄幼苗体内抗氧化酶活性的影响74.讨论114.1干旱胁迫对大黄种子萌发的影响呈“低促高抑”的规律114.2不同浓度PEG处理对大黄幼苗CAT活性的影响114.3不同浓度PEG处理对大黄幼苗POD活性的影响114.4不同浓度PEG处理对大黄幼苗SOD活性的影响124.5大黄与其它物种的抗逆境响应规律是否一致124.6干旱胁迫下大黄种子发
9、芽特征135.结论14参考文献15致谢18IIIXX学院本科毕业论文 (设计)1.前言1.1 国内外研究现状大黄(Rheum palmatum L.)为被子植物门双子叶植物纲蓼科(Polygonaceae) 大黄属(Rheum)多年生草本植物。是我国重要的传统大宗中药材、道地药材,也是多功效、多道地产区中药材的典型代表,用药部分主要是根状茎及根13。大黄含有蒽醌类化合物、蒽酮类化合物、二苯乙烯类化合物、鞣质类化合物、苯丁酮类化合物、色酮类化合物、挥发性化合物等化学成分,具有泻下攻积、活血化瘀、清热解毒、消炎镇痛、抗感染、抗衰老抗氧化、能够调节免疫系统、抗炎、解热、抗病原微生物、降血脂、止血等药
10、理作用34。干旱胁迫对植物的影响体现在对细胞活性、器官和组织功能的影响上,植物受到干旱胁迫后,植物个体或群体生长受抑制,形态发生变化,生物量或产量受到影响。为了在干旱胁迫条件下保证生存或保持生物量,植物会相应的做出一系列响应。如通过自身的细胞对干旱信号的感知和转导、调节基因表达、产生新蛋白质从而引起大量的生理和代谢上的变化;光合速率会降低,代谢途径会发生改变,可溶性物质累积,合成脯氨酸及甜菜碱;一些原来存在体内的蛋白质消失、分解,同时产生参与各种代谢调节相关的酶,组成抗氧化防御系统抵抗干旱,从而减轻干旱所造成的伤害。聚乙二醇(polyethylene glycol PEG)是一种渗透调节剂,是
11、亲水性很强的大分子有机物,常被用来模拟干旱胁迫进行植物的抗旱试验,用PEG溶液渗透方法模拟干旱条件具有周期短、简单方便、重复性好等优点,所以近年以来干旱胁迫被广泛的应用于植物种子萌发期的耐旱性研究。1.2 研究目的及意义国内大黄蕴藏量并不丰富,属于稀少品种,主要分布在甘肃、青海、四川、云南等地,生长于降水多、海拔高、日照时间长、湿度不大的地区,甘肃境内的道地产区以栽培为主,其他地区以野生资源为主。目前野生资源已近濒危,栽培的由于栽培技术不规范,气候等问题,药材产量不太理想。据统计,中国约有1/3的土地处于干旱区,水资源缺乏是制约这些地区经济、社会发展和生态环境建设的主要因素之一11。水是植物赖
12、以生存的物质基础,充足的水分保障是植物正常生长发育的前提条件。干旱严重影响植物的生长发育、光合作用、呼吸作用以及氮的代谢,造成农作物减产,制约着农业的发展。土地干旱现象的不断加重,人们对各种作物耐旱性的研究越来越重视,其中对蔬菜、牧草耐旱性研究报道较多,就抗旱性的研究目前主要有以下几种作物:青稞13、胡枝子14、景天属植物23、栓皮栎24、鸭茅26、羊毛属植物29、决明32等。但是目前对药材,尤其是针对野生资源已近濒危、引种种植受气候影响的大黄来说,对环境的响应规律研究报道相对较少,因此揭示干旱胁迫对大黄幼苗生长的影响,对于引种种植大黄,争取全苗、壮苗、提高产量都具有重要意义。本实验以大黄种子
13、为材料,对其进行培养、处理、采样分析,进而探讨不同浓度PEG对大黄种子萌发、幼苗生长及抗氧化酶活性的影响,从而反应大黄对干旱逆境的响应规律,为大黄的系统研究奠定理论基础。55XX学院本科毕业论文 (设计)2.材料与方法2.1实验材料大黄种子网购于“安国中药材推广站”店铺,2017年产自甘肃陇西。2.2实验仪器与试剂2.2.1实验仪器数显恒温水浴锅(国华电器有限公司,HH-4)、冰箱(合肥美菱股份有限公司,BCD-256VBY)、低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司,SC-3610)、紫外可见分光光度计(T6新世纪)、电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司,BSA223S)、移液枪(DX47
14、538)2.2.2实验耗材研钵、玻璃棒、15mL离心管、1/2/5mL移液管、50/100/500/1000mL烧杯、25mL容量瓶、50mL锥形瓶、试剂瓶2.2.2 实验试剂聚乙二醇(PEG)、无水乙醇(分析纯)、核黄素(生化试剂)次氯酸钠(分析纯)、过氧化氢、愈创木酚(生化试剂)、磷酸氢二钠(分析纯)、磷酸二氢钠(分析纯)、甲硫氨酸(Met)、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)、蒸馏水2.3实验方法2.3.1 大黄种子的处理及萌发采用PEG溶液进行干旱处理,浓度设置为5、10、20、25,以蒸馏水为对照(CK)。挑选饱满大小均匀一致的大黄种子,无菌蒸馏水冲洗多次,
15、经无菌蒸馏水中浸泡24小时后,在直径为9cm的培养皿中垫入双层无菌滤纸并加入不同浓度的PEG溶液至滤纸完全湿润,每个培养皿里的溶液总体积为7mL,然后将浸种的种子点入培养皿中,加盖封口,放入温度242的培养室中萌发。以胚轴长于2mm为发芽标准,每天统计种子发芽数。由统计数据分析可以得到,萌发13天后不再有种子萌发,所以第13天结束萌发实验,测定根长和苗高,并取萌发的整株幼苗测定POD、SOD以及CAT的活性。2.3.2 种子活力的测定发芽标准是以种子胚根生长到1mm时为准,每天记录种子发芽数,记录至不再萌发为止。在测定生理指标之前,测量其根长和苗高。发芽势(%)5d内供试种子的发芽数供试种子数
16、100%发芽率(%)10d内供试种子的发芽数供试种子数100% 发芽指数(Gt /Dt)Gt 为供试种子在t日的发芽数Dt为发芽日数。2.3.3 叶片过氧化氢酶活性测定2.3.3.1 酶液制备精确称取大黄幼苗0.1g置研钵中,加入2mL在4冰箱下预冷的pH=7.0磷酸缓冲液,在冰浴中研磨成匀浆,转入25mL容量瓶中,用pH=7.0的缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到25mL。混合均匀后将容量瓶置于4冰箱中静置10min,取上清液10mL放入离心管中,在4000r/min下离心15min,取出,该上清液即为过氧化氢酶粗提液。放入4下的冰箱中保存备用。2.3.3.2 CAT活性测定CAT活性
17、测定用紫外吸收法18。取4支试管,加入1mL0.3%H2O2溶液和1.95mLH2O,最后加0.05mL酶液(样品管),启动反应(每加完一管立即计时),测定240nm处OD降低速度,每隔1min读数1次,共测3min。将每分钟OD减少0.01定义为1个活力单位。3个重复。待3支管全部测定完后,计算CAT的活性。 2.3.3.3 酶活性计算CAT总活性(U /g /min)=(A240 /min V)/0.01VtW 以每克鲜重酶单位表示 CAT总活性240/min为每分钟增加的OD值V为样液总体积(mL)Vt为测定时样品用量(mL)W为样品鲜重(g)0.01A240为每下降0.01为一个酶活单
18、位2.3.4 叶片过氧化物酶活性测定2.3.4.1 酶液制备 精确称取大黄幼苗0.25g置研钵中,加入2mL在4冰箱下预冷的pH=7.0磷酸缓冲液,在冰浴中研磨成匀浆,转入25mL容量瓶中,用pH=7.0的缓冲溶液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到25mL。混合均匀后将容量瓶置4冰箱中静置10min,取上清液10mL放入离心管中,在4000r/min下离心15min,取出,该上清液即为过氧化氢酶粗提液。放入4下的冰箱保存备用。2.3.4.2 POD活性测定 POD活性测定用愈创木酚氧化法18。取4支试管,加入1mL0.3%H2O2溶液和0.95mL0.2%愈创木酚溶液及1mL0.05mol/L
19、pH=7.0PBS,最后加入0.05mL粗酶液启动反应(3个重复)(对照用0.05mol/L PBS代替酶液),记录470nm处OD增加速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。比色时加酶液,混合后即刻计时。2.3.4.3 POD的活性计算POD活性(U/g/min)=(A470/minV)/0.01VtW以每克鲜重酶单位表示POD总活性470/min为每分钟增加的OD值V为样液总体积(mL)Vt为测定时样品用量(mL)W为样品鲜重(g)0.01A470为每下降0.01为一个酶活单位2.3.5 叶片超氧化物歧化酶活性测定超氧化物歧化酶(SOD)活性测定用氮蓝四唑(NBT)法1819。
20、2.3.5.1 酶液提取精确称取大黄幼苗0.2g,加入2.5mLpH7.8磷酸盐缓冲液(PBS),研磨成匀浆,再加入2.5mLPBS混匀,410000r/min离心15min,上清液即为粗酶液。2.3.5.2 SOD活性测定表1:SOD反应体系试 剂 用 量(mL)终浓度(比色时)0.05mol/L PBS1.5130mmol/L Met0.30.313mmol/L750mol/L NBT0.30.375mmol/L30mol/L 核黄素0.310mol/L100mol/L EDTANa0.310mol/L蒸馏水0.2酶液0.1对照组PBS缓冲液代替酶液总体积3.0取10mL玻璃试管7支,3支
21、测定样品,4支作对照(即3个重复),按表2添加试剂组成3mL反应体系:上述试剂混匀后,1支用铝箔包被避光,其余对照管和样品管一起置于4000x日光灯下反应20min(要求各管受光一致)。在560nm测定反应液的吸光度。以不光照的对照管作参比,分别测各管的吸光度。以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示SOD活性单位。2.3.5.3 SOD活性计算SOD总活性(U/g)=(ACKAE)V/(ACK0.5WVt)SOD总活性以U/gFW表示ACK为对照管的吸光度AE为样品管的吸光度V为样液总体积(mL)Vt为测定时样品用量(本研究为0.05mL)W为样品鲜重(g)2.4 数据统计与分析实验
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