碱性磷酸酶标记的链霉亲和素-生物素法(SAP法).课件.ppt

1、免疫组织化学实验二l1、小鼠胰腺的石蜡切片；、小鼠胰腺的石蜡切片；l2、胰岛素抗体（鼠抗人单克隆抗体）；、胰岛素抗体（鼠抗人单克隆抗体）；l3、SAP检测试剂盒；检测试剂盒；l4、正常羊血清；、正常羊血清；l5、 0.01M PBS（pH7.27.6） ；l6、BCIP/NBT显色试剂；显色试剂；l7、孵育湿盒。、孵育湿盒。实验原理实验原理结果结果 胰岛内可见蓝色或紫蓝色着色的阳性细胞，阳性产物见于细胞质多聚鳌合物酶法多聚鳌合物酶法 HRP-HRP-多聚化合物多聚化合物-抗体抗体 一、一、Epos法法 Enhanced polymer one-step staining组织抗原组织抗原一抗一抗

2、HRP多多聚化合物骨架聚化合物骨架EPOS 方法方法原理：原理：采用一种具有惰性的多聚采用一种具有惰性的多聚 化合物作为骨架，将特异化合物作为骨架，将特异 性抗体和性抗体和HRP，同时标记同时标记 在多聚合物分子上，形成在多聚合物分子上，形成 HRP-多聚化合物多聚化合物-特异特异 性抗体。性抗体。 步骤：步骤：一步法一步法特点：特点：快速，简便，特异性强，快速，简便，特异性强， 敏感性高敏感性高 但商品化种类不全，但商品化种类不全， 价格昂贵价格昂贵二、二、EnVision法法（或（或PowerVison） Enhanced Labelled Polymer System 原理：原理：HRP -多聚化合物多聚化合物-第二第二 抗体抗体组织抗原组织抗原一抗一抗二抗二抗酶酶多多聚化合物骨架聚化合物骨架第一步第一步第二步第二步PowerVision方法方法特点：特点：敏感性高：敏感性高：（每个多聚鳌合物中含（每个多聚鳌合物中含70个个 HRP分分子和子和10 个第二抗体）个第二抗体） 特异性强：特异性强： 复合物内无内源性复合物内无内源性Avidin和和Biotin的干扰。的干扰。基本操作步骤基本操作步骤 1. 抗原修复抗原修复2.内源性过氧化内源性过氧化 物抑制物抑制3. 正常血清封闭正常血清封闭4. 第一抗体第一抗体5. 多聚骨架复合物多聚骨架复合物6. 显色显色 结果：结果：