植物生理学实验指导-ppt课件.ppt

1、 试验目的 了解测定植物组织水势的方法 原理 将植物放在已知水势的一系列溶液中，如果组织的水势与溶液的水势不相等，则组织吸水或失水或维持平衡，引起溶液的浓度、密度、电导率等参数发生变化。然后根据这些变化情况确定植物组织的水势。 器材与试剂器材与试剂实验仪器：试管，移液管，毛细滴管，打孔器，镊子；实验试剂：1.00 mol.L-1蔗糖溶液，甲烯蓝；实验材料：玉米、菠菜或其它植物叶片。 实验步骤实验步骤取8支试管，编号，配制0.10.8mol.L-1的溶液，加好塞子，作为对照组；另取8支试管，对应于对照组编号，然后从对照组的试管中分别取4ml溶液移入对应编号的试验组试管中，加塞；用打孔器在叶片上打

2、孔，随机取样，向试验组的每一试管中放入20片，加塞，放置30分钟，其间摇动数次。到时间后，用大头针沾取少许甲烯蓝粉末加入每一试验试管。用8支毛细滴管从试验组的各管中依次吸取少许着色的液体少许，缓慢插入对照组相应试管的中部，缓慢横向放出一滴溶液，观察蓝色液滴的移动方向。 液滴向上运动说明？ 液滴向下运动说明？ 液滴静止不动说明？ 蔗糖溶液的密度大于纯水的密度！ 计算叶片细胞的水势 cell= out=-icRT; 其中：cell为植物细胞水势； out为外界溶液渗透式； i为解离系数，蔗糖为1； c为液体浓度（mol.L-1）； R为摩尔气体常数，0.083105 L.Pa/mol.K T绝对温

3、度值，=t+273 实验报告 1、实验的结果； 2、产生误差的原因。 实验目的 熟悉测定未经分离的叶绿素ab的方法与计算； 实验原理 叶绿素a和b分别在663nm和645nm处有吸收峰； Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663l 器材与试剂1、实验仪器 高级分光光度计，离心机，天平，剪刀、研钵，漏斗，移液管，20ml棕色容量瓶；2、实验试剂 丙酮，碳酸钙3、植物叶片：同一种植物的阴叶和阳叶；l 实验步骤1、色素的提取取新鲜叶片0.5g，放入研钵，加入纯丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加入80%丙酮酸5ml，将匀浆移入离心管，并用

4、适量80%丙酮清洗研钵。5000rpm离心5分钟，取上清液用80%丙酮定容至20ml2、测定光密度 取上述色素提取液1ml，加80%丙酮溶液4ml，转入比色杯中中，以80%丙酮为对照，分别测定663和645nm时的吸收值；3、计算l实验报告1、比较阴阳叶叶绿素ab的含量比值的差异。 实验原理 将植物对称叶片的一部分遮光或取下置于暗处，另一部分则进行光合作用，过一定时间后，在这两部分叶片的对应部位去同等面积，分别烘干称重。开始时视为相等，照光后叶片重量超过暗中的重量，超过部分即为光合产物的产量，并通过一定的计算可得到光合作用强度。 器材与试剂1、仪器2、试剂 三氯乙酸（10%）3、代表性植物叶片

5、 实验步骤1、选择测定样品 选择光照条件好、叶龄一致的叶片20片，编号。2、叶基部处理 用5%三氯乙酸处理叶柄基部。注意：可见灼伤，但叶片姿势保持不变。3、剪取样品 基部处理完成之后，剪取样品，同时准确记录取样时间（精确到分钟）；剪取时注意不要伤及主脉。 样品用湿纱布保存，置于4暗处保存。4、光和后取样 45小时候，取样，方法同上 5、称重比较 测定打孔器面积；每叶片打孔15片。分别置于不同的培养皿中。80烘干至恒重，称重。 6、计算结果 A=干重增加数（mg）/(叶面积*光照时数) 【实验原理】 利用Ba(OH)2溶液吸收呼吸过程中释放的CO2，试验结束时，用草酸溶液滴定残留的Ba(OH)2

6、，从空白和样品两者消耗草酸溶液之差，计算出呼吸过程中释放的CO2。 【器材与仪器】1. 实验仪器 广口瓶，温度计，酸式滴定管，干燥管，尼龙网制小篮。2. 实验试剂 0.05mol.L-1 Ba(OH)2； 0.1%麝香草酚酞酒精溶液； 1/44mol.L-1草酸溶液。重结晶草酸2.8652g，蒸馏水定容至1000ml。3. 实验材料 发芽的小麦种子或其它植物活体。 【实验步骤】1. 实验装置2. 称取萌发的小麦种子15.00g，装于小篮内，然后将小蓝挂于广口瓶内，同时加入25.0 ml Ba(OH)2溶液，立即塞紧瓶塞，并用融化的石蜡密封瓶口；每隔10分钟，轻轻摇动广口瓶。 注意：勿让小篮侵入

7、溶液中！3. 1h后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮，加入2滴指示剂，立即重新塞紧瓶塞。然后拔出小橡皮塞，经滴定管插入小孔中，用草酸滴定，直到蓝绿色变成无色为止。记录滴定所含用的草酸溶液的体积（ml）数。4. 对照测定：材料为沸水煮死的种子，其余步骤同上；5. 计算 呼吸强度(CO2，mg/g.h)=(v1-v0)/种子鲜重(g) 时间(h)*本实验应按照分析化学实验的要求，对每个实验步骤严格操作，才能有实验结果！ 【实验原理】 糖在浓硫酸作用下生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 由于反应液中的浓硫酸可以把多糖水解

8、成单糖，因此，蒽酮法能测出溶液中全部可溶性碳水化合物总量。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm 。 【实验材料、试剂与仪器设备】（一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 葡萄糖标准溶液（ 100 g/ml ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 ml ，使用时再稀释 10 倍（ 100g/mL ）。 2 蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 3 周。 （三） 仪器设备 分光光度

9、计，分析天平，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、 0.5 ml ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸,镊子。 【实验步骤】 1 样品中可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，摖净表面污物，剪碎混匀，称取新鲜样品 0.5 1.0 g （或干样粉末 5 100 mg ），放入大试管中，加入 15 ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min （为什么？），取出冷却，过滤入 100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2 标准曲线制作 取 6 支大试管，从 0 5 分别编号，按下表 加入各试剂。试试 剂剂 管管 号号 0 1 2 3 4 5 100 g/ml 葡萄糖溶液葡

10、萄糖溶液（ ml ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（蒸馏水（ ml ） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂（蒽酮试剂（ ml ） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量（葡萄糖量（ g ） 0 20 40 60 80 100 空白对照 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（g ）为横坐标绘制标准曲线。05001000150020002500020040060080010001200Solar=-7.98018 + 0.50802 * P

11、AR(P0.0001)总辐射Solar radiance (w.m-2)光合有效辐射 PAR (umol photon.m-2.s-1) 3. 样品测定 取待测样品提取液 1.0 ml 加蒽酮试剂 5 ml ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。 四、结果计算四、结果计算 可溶性糖可溶性糖(g/g)= (CV1/V2)/W 式中： C 从标准曲线查得葡萄糖量， g 。 V1 样品提取液总体积，ml。 V2 显色时取样品液量， ml。 W 样品重（ g ）。 【实验报告】1、本法测定的可溶性糖包含哪些种类？提高试验精确度要注意那些步骤？【实验目的】熟悉测定MDA的常用方法；【实验原理】植物遭

12、遇逆境，丙二醛含量升高；1. 丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）在酸性和高温条件下呈红色，在532nm处有吸收峰；2. 加入低浓度的Fe3+，增加450nm的糖吸收；提取液C糖/（mmol/L）=11.71OD450提取液C醛/（mol/L）=6.45OD532-0.560OD450 TBA与可溶性糖同样能反应，在450nm处有吸收峰；实验材料实验步骤】1.MDA提取：取叶片1g，尽量剪碎，然后加入少量石英砂，2ml三氯乙酸（准确）；研磨，加入8ml三氯乙酸充分研磨（准确），4000r/min离心10分钟。2.显色：吸取2ml上清液，加入2ml 0.6% TBA液，在试管上加盖塞，沸水浴中沸煮15min，然后取出冷却，4000r/min离心5分钟。3.以水为对照，分别测定532nm和450nm处的吸收值OD 【实验作业】 比较正常状况下植物组织中的MDA含量与逆境情况下的有何不同？