人体及动物生理学实验课件PPT课件.ppt

1、中国海洋大学生物基础实验中心12目目录录3实实 4【目的要求目的要求】1.1.学习学习蛙类动物双毁髓蛙类动物双毁髓的实验方法。的实验方法。2.2.学习并掌握坐骨神经学习并掌握坐骨神经- -腓肠肌标本的制备方法。腓肠肌标本的制备方法。5【动物与器材动物与器材】 蟾蜍或蛙、常用蛙类手术器械、蛙板、玻璃蟾蜍或蛙、常用蛙类手术器械、蛙板、玻璃板、固定针、锌铜弓、培养皿、滴管、纱布、粗板、固定针、锌铜弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。棉线、任氏液。6【方法与步骤方法与步骤】1.1.损毁脑和脊髓：讲握蟾蜍方法，进针部位和损毁方损毁脑和脊髓：讲握蟾蜍方法，进针部位和损毁方法。法。2.2.去除躯干上部及

2、内脏。去除躯干上部及内脏。3.3.剥皮。剥皮。4.4.分离两后肢：注意操作要小心，切勿剪断坐骨神经。分离两后肢：注意操作要小心，切勿剪断坐骨神经。取一只后肢继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。取一只后肢继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。5.5.制备坐骨神经制备坐骨神经- -腓肠肌标本；游离坐骨神经；完成腓肠肌标本；游离坐骨神经；完成坐骨神经坐骨神经- -小腿标本小腿标本 。6.6.制备完整的制备完整的坐骨神经坐骨神经- -腓肠肌标本腓肠肌标本。7.7.检验标本的兴奋性。检验标本的兴奋性。7【注意事项注意事项】 制备标本过程中经常用任氏液湿润去皮的制备标本过程中经常用任氏液湿润去皮的标本。

3、标本。8【思考题思考题】1 1剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？什么？2 2金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌，金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？可能引起哪些不良后果？3 3如何保持标本的机能正常？如何保持标本的机能正常？9 10 【目的要求目的要求】1 1学习肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩学习肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。的记录方法。2 2观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。11【基本原理基本原理】 腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不

4、同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩发应，此时的强度过小时，不引起肌肉发生收缩发应，此时的刺激为阈下刺激。当全部肌纤维同时收缩时，则刺激为阈下刺激。当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大收缩发应。这时，即使再增大刺激强度，出现最大收缩发应。这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大。可以引起肌肉肌肉收缩的力量也不再随之加大。可以引起肌肉发生最大收缩发应的最小刺激强度为最适刺激强发生最大收缩发应的最小刺激强度为最适刺激强度。度。 12【动物与器材动物与器材】蟾蜍（或蛙）的腓肠肌标本、常用手术器械、蟾蜍（或蛙）的腓

5、肠肌标本、常用手术器械、计算机采集系统、计算机采集系统、张力传感器张力传感器（30g）、刺激电）、刺激电极、支架、双凹夹、肌槽、瓷盘、滴管、任氏液、极、支架、双凹夹、肌槽、瓷盘、滴管、任氏液、橡皮泥、棉线。橡皮泥、棉线。 13【方法与步骤方法与步骤】1 1开启刺激，观察肌肉收缩反应。如果肌肉无收缩反开启刺激，观察肌肉收缩反应。如果肌肉无收缩反应，则适当增加刺激强度，其他刺激参数保持不变。间应，则适当增加刺激强度，其他刺激参数保持不变。间隔少许时间，同法进行第二次刺激，直到出现最小收缩。隔少许时间，同法进行第二次刺激，直到出现最小收缩。测量收缩幅度并记下刺激强度，此时的刺激强度为阈强测量收缩幅度

6、并记下刺激强度，此时的刺激强度为阈强度。度。2 2同法逐渐增强刺激强度，观察刺激强度与肌肉收缩同法逐渐增强刺激强度，观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。反应的关系。3 3当刺激强度达到某一数值后，肌肉收缩幅度不再随当刺激强度达到某一数值后，肌肉收缩幅度不再随刺激强度的增加而升高，记录刺激强度的增加而升高，记录3 34 4次同等高度的收缩曲次同等高度的收缩曲线和刺激强度。线和刺激强度。4 4将结果填入表中。将结果填入表中。 14【注意事项注意事项】1 1实验过程经常用任氏液浸润标本。实验过程经常用任氏液浸润标本。2 2每次刺激标本时间不超过每次刺激标本时间不超过5 5秒。秒。3 3每次刺激后，标本

7、休息每次刺激后，标本休息3030秒。秒。 15【思考题思考题】1 1如何保持标本在实验过程中机能稳定？如何保持标本在实验过程中机能稳定？2 2何为标本的最适刺激强度？何为标本的最适刺激强度？3 3观察实验中同一标本的阈刺激强度与最观察实验中同一标本的阈刺激强度与最适刺激强度是否会变化？为什么？适刺激强度是否会变化？为什么？ 1617【目的要求目的要求】1.1.了解骨骼肌收缩的总和现象。了解骨骼肌收缩的总和现象。2.2.观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的改变。式的改变。18【基本原理基本原理】 两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经两个同等强度的阈上刺激

8、，相继作用于神经- -肌肉肌肉标本，如果刺激间隔大于单收缩的时程，肌肉则出现两标本，如果刺激间隔大于单收缩的时程，肌肉则出现两个分离的单收缩；如果刺激间隔小于单收缩的时程，则个分离的单收缩；如果刺激间隔小于单收缩的时程，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。当同等强出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，出现多个收缩反应的度的连续阈上刺激作用于标本时，出现多个收缩反应的融合，称为强直收缩。后一收缩发生在前一收缩的舒张融合，称为强直收缩。后一收缩发生在前一收缩的舒张期时，称为不完全强直收缩。后一收缩发生在前一收缩期时，称为不完全强直收缩。后一收缩发生在前

9、一收缩的收缩期时，各自的收缩完全融合，肌肉处于持续的收的收缩期时，各自的收缩完全融合，肌肉处于持续的收缩状态，称为完全强直收缩。缩状态，称为完全强直收缩。19【动物与器材动物与器材】 蟾蜍或蛙、常用手术器械、肌槽、计蟾蜍或蛙、常用手术器械、肌槽、计算机采集系统、张力换能器、培养皿、滴算机采集系统、张力换能器、培养皿、滴管、任氏液。管、任氏液。20【方法与步骤方法与步骤】1.1.制备坐骨神经制备坐骨神经- -腓肠肌标本并将其固定在肌槽上。选腓肠肌标本并将其固定在肌槽上。选择适当刺激强度，以单脉冲刺激神经，记录肌肉收缩曲择适当刺激强度，以单脉冲刺激神经，记录肌肉收缩曲线。线。2.2.刺激强度不变，

10、以较长的间隔输出两个单脉冲刺激刺激强度不变，以较长的间隔输出两个单脉冲刺激标本，肌肉则出现两个分离的单收缩，记录收缩曲线。标本，肌肉则出现两个分离的单收缩，记录收缩曲线。3.3.用同等刺激强度，缩短刺激间隔，刺激标本，记录用同等刺激强度，缩短刺激间隔，刺激标本，记录肌肉收缩曲线。肌肉收缩曲线。4.4.改用连续刺激，以改用连续刺激，以2 2次次/s/s的频率刺激标本，记录肌肉的频率刺激标本，记录肌肉收缩曲线。收缩曲线。5.5.依次改变依次改变刺激频率刺激频率为为6 6次次/s/s、1010次次/s/s、2020次次/s/s和和2525次次/s/s，记录肌肉收缩曲线。，记录肌肉收缩曲线。21【注意

11、事项注意事项】 实验过程中要经常用任氏液湿润标本，每实验过程中要经常用任氏液湿润标本，每次刺激后应使肌肉休息次刺激后应使肌肉休息30s30s。连续刺激不可超过。连续刺激不可超过5s5s。22【思考题思考题】1.1.讨论肌肉发生不完全强直收缩及完全强直讨论肌肉发生不完全强直收缩及完全强直收缩的条件与机制。收缩的条件与机制。2.2.人们日常生活中哪些动作属于强直收缩？人们日常生活中哪些动作属于强直收缩？23 24【目的要求目的要求】 1 1学习学习蟾蜍坐骨神经干标本的制备蟾蜍坐骨神经干标本的制备方法。方法。 2 2观察蛙坐骨神经干复合动作电位的波形，观察蛙坐骨神经干复合动作电位的波形，并了解其产生

12、的基本原理。并了解其产生的基本原理。25【基本原理基本原理】 神经干受到有效刺激后，可以产生神经干受到有效刺激后，可以产生动作电位动作电位，在另一端可以引导出双相的动作电位，如果在两在另一端可以引导出双相的动作电位，如果在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相动作电位。动作电位即为单相动作电位。 坐骨神经干是以由很多不同类型的神经纤维坐骨神经干是以由很多不同类型的神经纤维组成的，所以，神经干的动作电位是组成的，所以，神经干的动作电位是复合动作电复合动作电位位。复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随。复合动作电位的幅值在一定刺激强度

13、下是随刺激强度的变化而变化的。刺激强度的变化而变化的。 26【动物器材动物器材】蟾蜍或蛙、常用手术器械、蟾蜍或蛙、常用手术器械、计算机采集系统计算机采集系统、神经屏蔽盒神经屏蔽盒、任氏液。、任氏液。27【方法步骤方法步骤】1 1制备蛙或蟾蜍坐骨神经干标本。制备蛙或蟾蜍坐骨神经干标本。2 2将蛙的坐骨神经干标本置于屏蔽盒内的电极上，神将蛙的坐骨神经干标本置于屏蔽盒内的电极上，神经干的中枢端置于刺激电极一侧，从末梢端引导动作电经干的中枢端置于刺激电极一侧，从末梢端引导动作电位。位。3 3实验观察与记录实验观察与记录（1 1）神经干兴奋阈值的测定）神经干兴奋阈值的测定（2 2）双相动作电位）双相动作

14、电位（3 3）单相动作电位）单相动作电位28【注意事项注意事项】1 1注意保持标本的活性良好，经常用任氏注意保持标本的活性良好，经常用任氏液湿润之。液湿润之。2 2如果发现动作电位图形倒置，将引导电如果发现动作电位图形倒置，将引导电极位置交换即可。极位置交换即可。 29【思考题思考题】1 1通常记录到的双相动作电位的第一相和第二相为通常记录到的双相动作电位的第一相和第二相为何在波形、幅值上不对称？在什么情况下可记录到对称何在波形、幅值上不对称？在什么情况下可记录到对称的双相动作电位？在什么情况下可记录到单相动作电位？的双相动作电位？在什么情况下可记录到单相动作电位？2 2在一定范围内，神经干动

15、作电位的幅度为何随刺在一定范围内，神经干动作电位的幅度为何随刺激强度的增大而增大？这与动作电位的激强度的增大而增大？这与动作电位的“全或无全或无”规律规律是否矛盾？是否矛盾？3031【目的要求目的要求】1 1进一步学习电刺激器、计算机处理系统进一步学习电刺激器、计算机处理系统的使用方法。的使用方法。2 2了解神经干动作电位传导速度测定的基了解神经干动作电位传导速度测定的基本原理和方法。本原理和方法。32【基本原理基本原理】 神经纤维的生理特性之一是具有高度的传导性。不神经纤维的生理特性之一是具有高度的传导性。不同类型的神经纤维传导速度不同，其传导速度主要受神同类型的神经纤维传导速度不同，其传导

16、速度主要受神经纤维的直径、内阻及有无髓鞘的影响。如测得神经冲经纤维的直径、内阻及有无髓鞘的影响。如测得神经冲动在神经干上传导的距离与时间，可根据速度（动在神经干上传导的距离与时间，可根据速度（v v）距）距离（离（s s）时间（）时间（t t）求出神经冲动传导速度。两栖类的）求出神经冲动传导速度。两栖类的坐骨神经是混合神经，包含多种粗细不等的神经纤维，坐骨神经是混合神经，包含多种粗细不等的神经纤维，其直径约为其直径约为3-29m3-29m。坐骨神经中以。坐骨神经中以A A类纤维为主，传导类纤维为主，传导速度约为速度约为35-40m/s35-40m/s。33【动物器材动物器材】 蟾蜍或蛙、常用手

17、术器械、计算机采集系蟾蜍或蛙、常用手术器械、计算机采集系统、神经屏蔽盒、任氏液。统、神经屏蔽盒、任氏液。34【方法步骤方法步骤】1.1.制备坐骨神经标本制备坐骨神经标本。要求神经干尽量分离得长些。要求神经干尽量分离得长些。2.2.连接计算机采集系统与神经标本屏蔽盒，将坐骨神经连接计算机采集系统与神经标本屏蔽盒，将坐骨神经标本置于屏蔽盒内，中枢端置于刺激电极一侧，两对引导标本置于屏蔽盒内，中枢端置于刺激电极一侧，两对引导电极的距离愈远愈好。电极的距离愈远愈好。3.3.两对引导电极分别接两对引导电极分别接1 1和和2 2通道。通道。4.4.点击刺激后，点击刺激后，1 1和和2 2通道分别引导出动作

18、电位图形。通道分别引导出动作电位图形。5.5.测量神经屏蔽盒内两对电极之间的距离测量神经屏蔽盒内两对电极之间的距离(s)(s)。6 6按公式按公式v vs st t计算神经冲动传导的速度。计算神经冲动传导的速度。35【注意事项注意事项】1 1标本应平直地放在电极上与电极密切接触。经常标本应平直地放在电极上与电极密切接触。经常湿润，但要用滤纸吸去过多的任氏液，以防短路。湿润，但要用滤纸吸去过多的任氏液，以防短路。2 2动作电位如果先下后上时，可将示波器输入导线动作电位如果先下后上时，可将示波器输入导线端口对调。端口对调。3 3一定要将神经干粗端放于刺激电极一侧。一定要将神经干粗端放于刺激电极一侧

19、。36【思考题思考题】1 1为什么实验要求两对引导电极之间的距为什么实验要求两对引导电极之间的距离愈远愈好？离愈远愈好？3738【目的要求目的要求】1.1.学习测定神经不应期的基本原理和方学习测定神经不应期的基本原理和方 法。法。 2.2.掌握电生理仪的使用方法。掌握电生理仪的使用方法。 39【基本原理基本原理】神经在一次兴奋后，其兴奋性发生周期性的变化，神经在一次兴奋后，其兴奋性发生周期性的变化，而后才恢复正常。一般把这些变化分为四个时期：绝对而后才恢复正常。一般把这些变化分为四个时期：绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期。应用电生理学不应期、相对不应期、超常期和低常期。应用电生理学方法可

20、以观察或测定神经的不应期。方法可以观察或测定神经的不应期。通过调节刺激器输出的连续双脉冲的时间间隔，可测通过调节刺激器输出的连续双脉冲的时间间隔，可测定坐骨神经的不应期。当双脉冲的间隔时间为定坐骨神经的不应期。当双脉冲的间隔时间为20ms20ms左右左右时，它们引起的动作电位的幅值大小基本相同。逐渐缩时，它们引起的动作电位的幅值大小基本相同。逐渐缩短两脉冲之间的间隔，第二个动作电位逐渐向第一个动短两脉冲之间的间隔，第二个动作电位逐渐向第一个动作电位靠近，振幅也随之降低，最后可因落在第一个作电位靠近，振幅也随之降低，最后可因落在第一个动作电位的绝对不应期内而完全消失。动作电位的绝对不应期内而完全

21、消失。40【动物与器材动物与器材】 蟾蜍、手术器械一套、蛙板、蟾蜍、手术器械一套、蛙板、RM6240RM6240数据数据采集系统、滴管、细线、任氏液。采集系统、滴管、细线、任氏液。 41【方法与步骤方法与步骤】 1. 1. 按照实验按照实验4 4的方法制备蟾蜍的坐骨神经干标本。的方法制备蟾蜍的坐骨神经干标本。 2.2.连接计算机采集系统与神经标本屏蔽盒，将坐骨连接计算机采集系统与神经标本屏蔽盒，将坐骨神经标本置于屏蔽盒内，中枢端置于刺激电极一侧，一神经标本置于屏蔽盒内，中枢端置于刺激电极一侧，一对引导电极的与标本屏蔽盒准确连接。对引导电极的与标本屏蔽盒准确连接。 3.3.点击实验，选择自动测试

22、神经干不应期。点击实验，选择自动测试神经干不应期。42【注意事项注意事项】1注意保持标本的活性良好，经常用任氏注意保持标本的活性良好，经常用任氏液湿润之。液湿润之。2如果发现动作电位图形倒置，将引导电如果发现动作电位图形倒置，将引导电极位置交换即可。极位置交换即可。43【思考题思考题】1.1.什么是绝对不应期和相对不应期。什么是绝对不应期和相对不应期。2.2.绝对不应期的长短有什么生理学意义？绝对不应期的长短有什么生理学意义？4445【目的要求目的要求】观察蟾蜍心脏起搏点、观察蟾蜍心脏起搏点、心脏心脏各部分活动顺各部分活动顺序及心脏不同部位自律性的高低。序及心脏不同部位自律性的高低。 46【基

23、本原理基本原理】心脏活动具有自律性心脏活动具有自律性, ,但各部分的自律性高低不同但各部分的自律性高低不同. .窦房结的自律性最高窦房结的自律性最高. .其每次兴奋依次激动心房、心室其每次兴奋依次激动心房、心室. .引起心脏各部分的顺序活动。正常生理情况下窦房结为引起心脏各部分的顺序活动。正常生理情况下窦房结为心脏的正常起搏点心脏的正常起搏点, ,其他部位的自律细胞称为潜在起搏点其他部位的自律细胞称为潜在起搏点, ,当窦房结的兴奋传导受阻时当窦房结的兴奋传导受阻时, ,潜在起搏点可取代窦房结引潜在起搏点可取代窦房结引发心房或心室活动发心房或心室活动. .两栖类动物的心脏起搏点称静脉窦两栖类动物

24、的心脏起搏点称静脉窦. .47【动物与器材动物与器材】 蟾蜍或蛙、手术器械一套、蛙板、玻璃板、蟾蜍或蛙、手术器械一套、蛙板、玻璃板、蛙心夹、滴管、细线、秒表、任氏液。蛙心夹、滴管、细线、秒表、任氏液。 48【方法与步骤方法与步骤】1.1.破坏蟾蜍脑和脊髓后破坏蟾蜍脑和脊髓后, ,仰卧于蛙板上。用眼科剪刀仰卧于蛙板上。用眼科剪刀仔细剪开心包仔细剪开心包, ,暴露出心脏。暴露出心脏。2.2.识别蛙心静脉窦、心房、心室识别蛙心静脉窦、心房、心室, ,在心房与静脉窦之在心房与静脉窦之间有一半月形白线，即窦房沟。间有一半月形白线，即窦房沟。3.3.观察项目观察项目(1) (1) 静脉窦、心房、心室跳动顺

25、序及频率。静脉窦、心房、心室跳动顺序及频率。(2)(2)沿窦房沟进行结扎（斯氏第一结扎）沿窦房沟进行结扎（斯氏第一结扎）, ,观察心房、观察心房、静脉窦活动情况。静脉窦活动情况。(3)(3)待心房、心室恢复跳动后待心房、心室恢复跳动后, ,在心房、心室的交界处在心房、心室的交界处（房室沟）做斯氏第二结扎（房室沟）做斯氏第二结扎, ,观察心房、心室活动变化观察心房、心室活动变化情况。情况。49【注意事项注意事项】1.1.复习心脏兴奋的发生与传播等理论知识。复习心脏兴奋的发生与传播等理论知识。2.2.手术过程要小心手术过程要小心, ,避免出血。结扎应迅速避免出血。结扎应迅速扎紧。扎紧。3.3.实验

26、中经常滴加任氏液实验中经常滴加任氏液, ,使心脏保持湿润。使心脏保持湿润。50【思考题思考题】1.1.第一斯氏结扎后和第二斯氏结扎后的心第一斯氏结扎后和第二斯氏结扎后的心室搏动频率是否相同？为什么？室搏动频率是否相同？为什么？5152【目的要求目的要求】1.1.观察心室收缩活动的不同时相对额外刺激观察心室收缩活动的不同时相对额外刺激的反应。的反应。2.2.了解心肌的生理特性。了解心肌的生理特性。3.3.通过实验阐述心肌产生期外收缩的条件与通过实验阐述心肌产生期外收缩的条件与代偿间歇出现的机理。代偿间歇出现的机理。53【基本原理基本原理】 心肌收缩的机能特性之一是具有较长的不应期心肌收缩的机能特

27、性之一是具有较长的不应期, ,整整个收缩期和舒张早期都是不应期。在心室收缩期给任个收缩期和舒张早期都是不应期。在心室收缩期给任何刺激何刺激, ,心室都不发生反应心室都不发生反应. .在心室舒张期给单个阈上在心室舒张期给单个阈上刺激刺激, ,则产生一次正常的节律以外的收缩反应则产生一次正常的节律以外的收缩反应, ,称为期称为期外收缩。当静脉窦传来的节律性兴奋恰好落在期外收外收缩。当静脉窦传来的节律性兴奋恰好落在期外收缩的收缩期时缩的收缩期时, ,心室则不发生兴奋心室则不发生兴奋, ,须静脉窦传来下一须静脉窦传来下一次兴奋才会收缩。因此次兴奋才会收缩。因此, ,在期外收缩之后在期外收缩之后, ,就

28、会出现一就会出现一个较长时间的间歇期个较长时间的间歇期, ,称为代偿间歇。称为代偿间歇。54 动物与器材动物与器材 蟾蜍或蛙、常用手术器械、蛙板蟾蜍或蛙、常用手术器械、蛙板( (或蜡或蜡盘盘) )、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、滴管、双针形露丝刺激电极、支架、双凹夹、滴管、双针形露丝刺激电极、培养皿培养皿( (或小烧杯或小烧杯) )、纱布、棉线、橡皮泥、任、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。氏液。55【方法与步骤方法与步骤】1.1.按实验七的方法暴露心脏按实验七的方法暴露心脏, ,并记录心搏曲线。将刺并记录心搏曲线。将刺激电极安放在心室外壁激电

29、极安放在心室外壁, ,使之既不影响心搏又能使心室使之既不影响心搏又能使心室紧密接触。紧密接触。2.2.记录正常的心搏曲线作对照。记录正常的心搏曲线作对照。3.3.选择能引起心室发生期外收缩的刺激强度选择能引起心室发生期外收缩的刺激强度( (与心室与心室舒张起调试舒张起调试),),分别与心室收缩期和舒张期的早、中、晚分别与心室收缩期和舒张期的早、中、晚给与单个刺激给与单个刺激( (注意注意: :刺激前后要有刺激前后要有3-43-4正常心搏曲线作正常心搏曲线作对照对照, ,不可连续输出两个刺激不可连续输出两个刺激) )。观察心搏有无变化。观察心搏有无变化, ,重重复并肯定实验结果。复并肯定实验结果

30、。 56【思考题思考题】1.1.实验结果同骨骼肌比较实验结果同骨骼肌比较, ,表明心肌有何特性表明心肌有何特性2.2.心肌的不应期长有何生理意义心肌的不应期长有何生理意义5758【目的要求目的要求】1.1.学习学习斯氏离体蛙心灌流法斯氏离体蛙心灌流法。2.2.了解心肌的生理特性。了解心肌的生理特性。3.3.观察观察NaNa+ +、K K+ +、CaCa2+2+及肾上腺素及肾上腺素( Adr) ,( Adr) ,乙乙酰胆碱酰胆碱(ACh)(ACh)等对离体心脏的影响。等对离体心脏的影响。59【基本原理基本原理】 心肌具有自动节律收缩的特性，可用人工心肌具有自动节律收缩的特性，可用人工灌流的方法，

31、观察心脏活动的规律及特点，还灌流的方法，观察心脏活动的规律及特点，还可用灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。可用灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。60【动物与器材动物与器材】 蛙或蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双蛙或蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、滴管、心夹、计算机采集系统、张力传感器、滴管、培养皿、污物缸、纱布、棉线、橡皮泥、任氏培养皿、污物缸、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液、液、0.65% NaCl0.65% NaCl、5% NaCl5% NaCl、2%CaCl2%CaCl2

32、 2、1% KCl1% KCl、1:50001:5000肾上腺、肾上腺、1:100001:10000乙酰胆碱、乙酰胆碱、300U/ml300U/ml肝肝素。素。 61【方法与步骤方法与步骤】1.1.离体心脏套管由动脉圆锥插入心室内。离体心脏套管由动脉圆锥插入心室内。2.2.将套管固定在支架上将套管固定在支架上, ,连接实验装置。连接实验装置。3.3.实验步骤实验步骤(1) (1) 记录正常心搏曲线。记录正常心搏曲线。(2) (2) 改用改用0.65%NaCl0.65%NaCl溶液灌流溶液灌流, , 观察心搏变化。观察心搏变化。 (3) (3) 加入加入2-62-6滴滴5%NaCl5%NaCl溶

33、液溶液, ,观察心搏曲线变化。观察心搏曲线变化。(4) (4) 加入加入1-31-3滴滴1%CaCl1%CaCl2 2溶液溶液, ,观察心搏曲线变化。观察心搏曲线变化。(5) (5) 加入加入1-21-2滴滴1%KCl1%KCl溶液溶液, ,观察心搏曲线变化。观察心搏曲线变化。 (6) (6) 加入加入1-21-2滴滴Adr(1:5000)Adr(1:5000)后观察心搏曲线变化。后观察心搏曲线变化。(7) (7) 加入加入1-21-2滴滴Ach(1:10000)Ach(1:10000)后观察心搏曲线变化。后观察心搏曲线变化。4.4.整理实验记录。整理实验记录。62【注意事项注意事项】更换药物

34、时，避免相互交叉污染。更换药物时，避免相互交叉污染。63【思考题思考题】 1.1.本实验说明心肌的那些生理特征。本实验说明心肌的那些生理特征。2.2.用实验说明内环境相对恒定的意义。用实验说明内环境相对恒定的意义。 3 3试分析任氏液中适量离子，钙离子，钾离子对心试分析任氏液中适量离子，钙离子，钾离子对心肌的影响。肌的影响。4 4为何强调实验保持灌流液面的恒定？灌流量对心为何强调实验保持灌流液面的恒定？灌流量对心脏活动的有什么影响。脏活动的有什么影响。5 5试想，活的机体在心交感神经兴奋时或迷走神经试想，活的机体在心交感神经兴奋时或迷走神经兴奋时对心脏有何影响。兴奋时对心脏有何影响。6465【

35、目的要求目的要求】1. 1. 学习学习ABOABO血型的鉴定方法血型的鉴定方法2. 2. 观察红细胞的凝集现象。掌握观察红细胞的凝集现象。掌握ABOABO血型鉴定的原理，血型鉴定的原理，3. 3. 熟悉交叉配血试验的方法，认识交叉配血试验在临熟悉交叉配血试验的方法，认识交叉配血试验在临床输血中的重要性。床输血中的重要性。66【基本原理基本原理】在人类血清中含有与凝集原相对应的天然凝集素在人类血清中含有与凝集原相对应的天然凝集素（抗（抗A A、抗、抗B B凝集素）。当凝集原与其相对应的凝集素凝集素）。当凝集原与其相对应的凝集素相遇时将发生红细胞凝集反应，因此，将受试者的红相遇时将发生红细胞凝集反

36、应，因此，将受试者的红细胞分别加入已知的标准细胞分别加入已知的标准A A型血清（含抗型血清（含抗B B凝集素）与凝集素）与标准标准B B型血清（含抗型血清（含抗A A凝集素）中，观察有无凝集现象，凝集素）中，观察有无凝集现象，即可判定红细胞膜上有无即可判定红细胞膜上有无A A或（和）或（和）B B凝集原，从而鉴凝集原，从而鉴定受试者的血型。定受试者的血型。 交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混和，观察有无凝集现象。当配血者的血清与红细胞混和，观察有无凝集现象。当配血相合时，方可进行输血。相合时，方可进行输血。67【器材和药品器材

37、和药品】 显微镜、双凹玻片、消毒注射器、一次性显微镜、双凹玻片、消毒注射器、一次性采血针、玻棒、试管、离心机、消毒牙签、标采血针、玻棒、试管、离心机、消毒牙签、标准血清、准血清、7575酒精、酒精、2 2碘酒、生理盐水。碘酒、生理盐水。68【方法与步骤方法与步骤】1. 1. ABOABO血型鉴定血型鉴定（玻片法）（玻片法）（1 1）在载玻片中滴入抗）在载玻片中滴入抗A A血清和抗血清和抗B B血清。血清。（2 2）消毒）消毒, ,采血。用牙签蘸血与采血。用牙签蘸血与A A血清相混匀，再用血清相混匀，再用牙签另一端蘸血与牙签另一端蘸血与B B血清相混匀。血清相混匀。（3 3）观察有无凝集现象。）

38、观察有无凝集现象。（4 4）结果判定：）结果判定： 双侧均无凝集反应，即为双侧均无凝集反应，即为O O型血。型血。如双侧均有凝集反应则为如双侧均有凝集反应则为ABAB血型。如果抗血型。如果抗A A侧无凝侧无凝集反应，而抗集反应，而抗B B侧有凝集反应，则为侧有凝集反应，则为B B型血，如果抗型血，如果抗A A侧侧有凝集反应，而抗有凝集反应，而抗B B侧无凝集反应，则为侧无凝集反应，则为A A型血型血 。69【注意事项注意事项】 1. 1. 标准标准A A型血清和型血清和B B型血清绝对不能相混。标准血清型血清绝对不能相混。标准血清存放时间不宜太长。存放时间不宜太长。2. 2. 最好使用一次性采血针和注射器，一人一针，不最好使用一次性采血针和注射器，一人一针，不能混用。能混用。3. 3. 肉眼看不清凝集现象时，应在显微镜下观察。肉眼看不清凝集现象时，应在显微镜下观察。4. 4. 制备红细胞悬液不宜太浓，否则易发生红细胞叠制备红细胞悬液不宜太浓，否则易发生红细胞叠连而聚集。连而聚集。70【思考题思考题】1 1试述试述ABOABO血型分型的依据及其与输血的关系。血型分型的依据及其与输血的关系。2 2哪些方面可影响本实验的准确性？哪些方面可影响本实验的准确性？ 7172坐骨神经腓肠肌标本坐骨神经腓肠肌标本73747576777879808182