PCR诱变ppt课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《PCR诱变ppt课件.ppt》由用户(三亚风情)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- PCR 诱变 ppt 课件
- 资源描述:
-
1、ppt课件.1PCRPCR诱变诱变ppt课件.2PCRPCR诱变诱变(1 1)PCRPCR定点诱变定点诱变(2 2)几种碱基变化的)几种碱基变化的PCRPCR引入引入(3 3)PCRPCR随机诱变(易错随机诱变(易错PCRPCR)ppt课件.3一、一、PCRPCR定点诱变定点诱变 应用应用PCRPCR原理,可以直接进行定点诱变,并原理,可以直接进行定点诱变,并且不需要采用噬菌体且不需要采用噬菌体M13.M13. 首先,把需诱变的基因克隆于质粒上,把首先,把需诱变的基因克隆于质粒上,把带有诱变目标基因的质粒,分成两个反应管,带有诱变目标基因的质粒,分成两个反应管,每个反应管加入不同的引物,每个反
2、应管的每个反应管加入不同的引物,每个反应管的一对引物中,有一个引物需按诱变意图改变一对引物中,有一个引物需按诱变意图改变碱基,即该碱基是错配的,每对引物的互补碱基,即该碱基是错配的,每对引物的互补位置不同,同一管中每条几乎处于同一起点位置不同,同一管中每条几乎处于同一起点但放向相反。但放向相反。ppt课件.4经经PCRPCR后,每个管产生了含有改变了特定碱基后,每个管产生了含有改变了特定碱基的产物,但留有缺口。因此,产物是线状的的产物,但留有缺口。因此,产物是线状的DNADNA链,由于引物互补位置不同,两个管的产链,由于引物互补位置不同,两个管的产物的缺口位置也不同,当把两个反应管的产物的缺口
3、位置也不同,当把两个反应管的产物混合,经变性和退火处理,来自不同反应物混合,经变性和退火处理,来自不同反应管的线状管的线状DNADNA链可杂交形成双链环状的链可杂交形成双链环状的DNADNA分分子,但仍有缺口。由于环化分子可以转化大子,但仍有缺口。由于环化分子可以转化大肠埃希菌,在体内可把缺口修复,这样可以肠埃希菌,在体内可把缺口修复,这样可以获得定点改变了特低碱基的基因。获得定点改变了特低碱基的基因。ppt课件.5ppt课件.61 1、重叠延伸、重叠延伸PCR (over-lap extension PCR, PCR (over-lap extension PCR, OE-PCR )OE-P
4、CR )2 2、大引物、大引物PCRPCR法(法(megaprimer PCR )megaprimer PCR )3 3、环状诱变、环状诱变 PCR PCR 法法4 4、TAMS TAMS 定点诱变技术定点诱变技术ppt课件.71 1、重叠延伸、重叠延伸PCR PCR (OE-PCROE-PCR) 首先设计两个首先设计两个PCRPCR反应以产生两个含反应以产生两个含突变位点的突变位点的DNADNA片段,随后将上述两个片段,随后将上述两个PCRPCR产物混合,二者通过产物混合,二者通过末端互补区结合末端互补区结合并在适宜的温度下并在适宜的温度下互为引物延伸互为引物延伸得到完得到完整的含突变的基因
5、,对第一次整的含突变的基因,对第一次PCRPCR产物进产物进行纯化处理可显著提高突变效率行纯化处理可显著提高突变效率ppt课件.8ppt课件.92 2、大引物、大引物PCRPCR法法(megaprimer PCR )megaprimer PCR ) 先设置一个先设置一个PCRPCR反应产生一个含突变的反应产生一个含突变的DNADNA片段,然后再以此片段,然后再以此DNADNA片段作为引物与原模板片段作为引物与原模板退火进行退火进行PCRPCR扩增得到含突变的完整的基因。扩增得到含突变的完整的基因。因为作为引物使用的因为作为引物使用的DNADNA片段较通常的引物要片段较通常的引物要大许多甚至有上
6、百碱基,所以命名为大引物大许多甚至有上百碱基,所以命名为大引物PCRPCR法。法。 ppt课件.10大引物大引物PCR PCR 定点诱变技术路线定点诱变技术路线(圆点指突变位点)(圆点指突变位点)ppt课件.113 3、环状诱变、环状诱变 PCR PCR 法法定义:以整个带有目的基因的质粒为模板,用诱变剂定义:以整个带有目的基因的质粒为模板,用诱变剂进行扩增,最后产生环状的带有目的突变的质粒。进行扩增,最后产生环状的带有目的突变的质粒。方法方法:两个引物反向、紧邻但没有重叠区,扩增产物是平两个引物反向、紧邻但没有重叠区,扩增产物是平末端的线性末端的线性DNADNA,需用,需用T4T4连接酶环化
7、处理。连接酶环化处理。以以StratageneStratagene公司开发的定点突变试剂盒为代表,公司开发的定点突变试剂盒为代表,两个引物也是反向的并且其两个引物也是反向的并且其5 5端有端有l5l5个碱基以上的个碱基以上的重叠区,扩增产物为带黏性末端的线性重叠区,扩增产物为带黏性末端的线性DNADNA,可自,可自行环化。行环化。ppt课件.12环状诱变环状诱变 PCR PCR 法法ppt课件.13环状诱变环状诱变 PCR PCR 法法ppt课件.144 4、 TAMSTAMS定点诱变技术定点诱变技术 有目的地扩增突变链定点诱变技术有目的地扩增突变链定点诱变技术: :能够一次引入多个能够一次引
展开阅读全文